Ensayo de locomoción larvaria: Método de alto rendimiento para estudiar la toxicidad neurobehavioral de un compuesto en larvas de pez cebra

Overview

Este artículo describe la respuesta conductual del pez cebra a los compuestos tóxicos mediante el monitoreo de la locomoción larvaria. El protocolo examina además un ejemplo de la respuesta de las larvas de pez cebra a los contaminantes ambientales.

Protocol

1. Preparación para la prueba de comportamiento

1. Transfiera 800 μL de solución de exposición a cada pozo de la microplaca de 48 pozos.
   NOTA: Utilice 16 pozos para cada grupo (es decir, la solución de control, 5 μg/L y el grupo de 50 μg/L).
2. Utilice una punta de pipeta de 1 ml para transferir 200 μL de solución de exposición con una larva de la placa petri de vidrio a un pozo de la microplaca de 48 pozos.
3. Transfiera 4 ml de solución de exposición a cada pozo de la microplaca de 6 pozos.
   NOTA: Utilice una microplaca de 6 pozos para cada grupo.
4. Utilice una punta de pipeta de 1 ml para transferir 200 μL de solución de exposición con dos larvas en cada pozo de la microplaca de 6 pozos.
   NOTA: Cada grupo tiene seis grupos repetidos.
5. Asegúrese de que la temperatura de la sala de pruebas sea de 28 °C 2 h antes de la prueba.
   NOTA: Las pruebas de comportamiento generalmente se realizan por la tarde.

2. Prueba de locomoción y ángulo de trayectoria

1. Guarde el protocolo y baje la luz de la sala de pruebas.
2. Aclimate las larvas en el sistema durante 10 minutos y haga clic en el botón"Experimento" "Ejecutar" a su vez, luego elija la carpeta donde se guardan los archivos del experimento e introduzca el nombre del resultado.
3. Haga clic en el botón "Fondo"" Inicio" a su vez para iniciar la prueba.
4. Haga clic en el botón "Experimento" "Detener" a su vez para detener el experimento cuando finalice la prueba.
   NOTA: El sistema muestra los datos probados cuando el sistema se detiene. Los datos incluyen la distancia rastreada en tres clases de velocidad y números de ángulo de trazado en ocho clases de ángulo de cada minuto. Para la prueba de locomoción en el ejemplo presentado, se calcula la distancia total en cada período de luz (10 min) y se compara la diferencia entre el grupo de control y los grupos de tratamiento.
5. Transfiera la microplaca de 48 pozos a la incubadora de luz para otros experimentos.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution