Summary
وقد برزت C. ايليجانس نموذجا وراثية جديدة لدراسة التفاعلات المضيف الممرض. نحن هنا وصف بروتوكول لتصيب C. ايليجانس مع السالمونيلا التيفية الفأرية إلى جانب تقنية التدخل رني المزدوج حبلا لدراسة دور الجينات المضيف في الدفاع ضد العدوى السالمونيلا.
Abstract
في العقد الماضي، C. برز ايليجانس كما كائن حي اللافقارية لدراسة التفاعلات بين المضيفين ومسببات الأمراض، بما في ذلك الدفاع المضيف ضد البكتيريا سالبة الجرام السالمونيلا التيفية الفأرية السالمونيلا يحدد العدوى المستمرة في الأمعاء من C. ايليجانس والنتائج في الموت المبكر من الحيوانات المصابة. وقد تم تحديد عدد من الآليات الحصانة في C. ايليجانس للدفاع ضد العدوى السالمونيلا. الالتهام الذاتي، والحفاظ تطويريا تدهور الليزوزومية المسار، وقد تبين للحد من تكرار السالمونيلا في C. وايليجانس في الثدييات. هنا، يوصف بروتوكول لتصيب C. ايليجانس مع السالمونيلا التيفية الفأرية، الذي يتعرض لالسالمونيلا الديدان لفترة زمنية محدودة، على غرار عدوى السالمونيلا في البشر. يقصر عدوى السالمونيلا بشكل كبير من عمر C. ايليجانس <م />. الالتهام الذاتي باستخدام الجينات الأساسية تيرو-1 كمثال على ذلك، ونحن معا هذه الطريقة الإصابة بفيروس C. ايليجانس رني تغذية النهج وأظهر هذا البروتوكول يمكن استخدامها لدراسة وظيفة C. ايليجانس الجينات المضيف في الدفاع ضد العدوى السالمونيلا. منذ C. ايليجانس الجينوم هي المكتبات رني كله المتاحة، هذا البروتوكول يجعل من الممكن لفحص شامل لC. الجينات ايليجانس التي تحمي ضد السالمونيلا ومسببات الأمراض المعوية الأخرى باستخدام المكتبات رني على نطاق الجينوم.
Introduction
الديدان الخيطية التربة الحرة الحية انواع معينة ايليجانس هو كائن نموذج بسيط ولين العريكة وراثيا تستخدم لدراسة العديد من الأسئلة البيولوجية. C. ايليجانس موجود يغلب كما المنحرفين-التسميد الذاتي. يتم إنشاؤها من قبل الذكور بشكل عفوي غير انفصال للكروموسوم X أثناء عملية تكوين الأمشاج 1،2. في ظل وجود وفرة من المواد الغذائية، C. ايليجانس تطوير مستمر من خلال أربع مراحل اليرقات إلى الكبار. درجة الحرارة يؤثر أيضا C. التنمية ايليجانس؛ لوحظ تطور أسرع عند ارتفاع درجات الحرارة. في المختبر، C. ايليجانس هو مثقف في درجة حرارة قياسية من 20 درجة مئوية على لوحات أجار مع المصنف القولونية بكتيريا الإشريكية (سلالة OP50) كغذاء 1،2.
في العقد الماضي، C. برز ايليجانس كما كائن حي اللافقارية لدراسة التفاعلات المضيف الممرض 3-5. في الطبيعة، C. ايليجانس يأكل البكتيريا كما nutrien لهار المصدر 1،2. العادية الطعام المختبر الجرثومي، OP50، يمكن أن تكون بديلا بسهولة مع مسببات الأمراض الأخرى لدراسة التفاعلات بين C. ايليجانس وأي الممرض الذي تم اختياره. في ظل هذه الظروف، الأمعاء هو الموقع الرئيسي للعدوى. في الواقع، وقد تبين مجموعة واسعة من مسببات الأمراض البكتيرية للإصابة قاتلة C. ايليجانس 3-5.
بكتيريا السالمونيلا سالبة الجرام هو الممرض الجهاز الهضمي التي تسبب الأمراض التي تنقلها الأغذية الإنسان في العالم 6،7. C. ايليجانس هو المضيف نموذجا جيدا للالسالمونيلا التيفية الفأرية كما يعيد هذه البكتيريا والالتهابات المعوية يسلك المستمرة 8-10. C. وقد استخدم ايليجانس لتحديد كل من الرواية والعوامل المعروفة سابقا الفوعة السالمونيلا 11. ومن المثير للاهتمام، وC. الجهاز المناعي ايليجانس يحد بنجاح تكرار السالمونيلا. وقد أفيد في وقت سابق ان inhibition الجينات الالتهام الذاتي يجعل زيادة تكرار السالمونيلا في C. ايليجانس، مما أدى إلى وفاة مبكرة من الديدان المصابة 10. Macroautophagy (المشار إليها هنا الالتهام الذاتي) هو عملية دينامية تنطوي على إعادة ترتيب الأغشية التحت خلوية لعزل السيتوبلازم والعضيات للتسليم إلى يحلول لتدهور 12. وقد تم الإبلاغ عن الالتهام الذاتي للحد من تكرار السالمونيلا في C. ايليجانس و10،13 في الثدييات.
وC. كان ايليجانس الجينوم أول جينوم حقيقية النواة متعددة الخلايا متسلسلة؛ هو استجابة للعلاج رني 14-16. علاوة على ذلك، رني يمكن إدارتها بفعالية بإخضاع الديدان لاستيعاب البكتيريا التي تحتوي على الحمض النووي الريبي مزدوج الخيط من الجين المستهدف، والمعروفة باسم رني تغذية 16،17. تم إنشاؤها الجينوم المكتبات التغذية رني كامل لالجينوم على نطاق رني الفرز 16،18. هنا، والسالمونيلا العدوى المواليةويقترن tocol مع رني تغذية للسماح اختبار C. الجينات ايليجانس الاهتمام لقدرتها على حماية ضد عدوى السالمونيلا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. لوحات XLD (الزيلوز يسين Desoxycholate) آجار
XLD أجار هو وسيلة النمو الانتقائي لالسالمونيلا، والذي يظهر كما مستعمرات سوداء على لوحات أجار XLD. ومع ذلك، إذا كان هناك أي مخاوف من التلوث، ويمكن أن تكون بديلا لوحة LB العادية.
- تزن 5.5 غرام من XLD أجار وresuspend في 5 مل من الماء منزوع الأيونات.
- تخلط جيدا حتى كل أجار هو الرطب. إضافة 95 مل منزوع الأيونات الماء حتى تختفي جميع الكتل والمتوسطة معلق تماما.
- تغلي على المديين المتوسط وتذوب تماما (لا الأوتوكلاف).
- تبريد المتوسطة في درجة حرارة الغرفة إلى 50 درجة مئوية.
- صب 25 مل أجار في كل 95 × 15 ملم (قطر × الارتفاع) لوحة (لوحات مختومة مع parafilm يمكن تخزينها في 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 1 في الشهر).
2. النيماتودا نمو متوسط (NGM) رني تغذية لوحات
إعداد C. وقد وصفت لوحات ايليجانس NGM سابقا 1 9. هنا يوصف إجراء لفترة وجيزة لإضافة الأمبيسلين المضادات الحيوية ورني محفز كيميائية الآيزوبروبيل β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) في وسائل الإعلام NGM لجعل لوحات التغذية رني.
- حل 3 غرام كلوريد الصوديوم و 2.5 جرام Bacto ببتون في 1 لتر منزوع الأيونات الماء.
- إضافة 17 غرام Bacto أجار في وسائل الإعلام.
- الأوتوكلاف وسائل الإعلام لمدة 45 دقيقة وتبريد وسائل الإعلام إلى 50 درجة مئوية في حمام مائي.
- إضافة الحلول التالية: 1 مل الكولسترول (5 ملغ / مل في 95٪ من الإيثانول)، 1 مل 1 M و CaCl 2، 1 مل 1 M MgSO 4، و 25 مل 1 M العازلة فوسفات البوتاسيوم (الرقم الهيدروجيني 6.0). تخلط جيدا.
- إضافة 1 مل 1 M IPTG و 500 ميكرولتر الأمبيسلين (100 ملغ / مل في الماء المعقم).
- مزيج الحل جيدا وتصب 60 × 15 ملم (قطر × الارتفاع) لوحات بتري باستخدام المعونة الماصة و 25 مل ماصة المصلية التالية الإجراءات العقيمة. ملء كل لوحة مع 12 مل أجار. ويمكن تخزين لوحات في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 1 في الشهر.
"jove_title"> 3. إعداد الحيوانات المعالجة رني للعدوى
الجينات الالتهام الذاتي الأساسية تيرو-1 يستخدم كمثال لفحص وظيفة الجين في الدفاع المضيف ضد عدوى السالمونيلا. ويوضح الإجراءات التجريبية في الشكل 1 والجدول 1. بروتوكول لإعداد الحيوانات رني المعاملة للعدوى يلي، مع اليوم كل خطوة تجريبية نظرا بين قوسين.
- تطعيم تيرو-1 التغذية رني والسيطرة على ناقلات الفارغة L4440 رني تغذية البكتيريا عن طريق وضع رقائق من -80 درجة مئوية البكتيريا المجمدة في 2 مل LB المتوسطة تستكمل مع 100 ملغ / مل الأمبيسلين (يوم 1). كرر هذه الخطوة مرة واحدة في الأسبوع خلال التجربة بأكملها لديها البكتيريا رني الطازجة. تخزين الثقافة في 4 ° C الثلاجة عندما لا تستخدم.
- البذور 100 مل من ثقافة البكتيرية بين عشية وضحاها رني على لوحات رني. إعداد ثلاثة تيرو-1 رني وثلاثة السيطرة الخامس فارغةector لوحات رني. احتضان لوحات عند 37 درجة مئوية خلال الليل (اليوم 2).
- إزالة لوحات رني من الحاضنة 37 درجة مئوية، والسماح لهم ليبرد إلى درجة حرارة الغرفة على مقاعد البدلاء. التقاط تغذية جيدة L4 النوع البري المنحرفين N2 ونقلها إلى تيرو-1 رني والسيطرة فارغة لوحات رني ناقلات. وضع ثلاثة الديدان في لوحة، وعلى لوحات ثلاث نسخ. في نفس اليوم، وإعداد لوحات رني كما هو موضح في الخطوة 3.2 (اليوم 3).
- احتضان لوحات رني مع الديدان في الحاضنة 20 درجة مئوية لمدة 36-40 ساعة، ونقل الديدان لوحات رني المقابلة الطازجة المعدة في الخطوة 3.3. بعد أن يتم نقل الديدان، واحتضان لوحات في 20 درجة مئوية لمدة 64 ساعة حاضنة (يوم 4).
4. إعداد السالمونيلا للعدوى
- خط السالمونيلا -80 ° C الأسهم المجمدة في 1 XLD أجار لوحة واحتضان لوحة عند 37 درجة مئوية خلال الليل (اليوم 5
- اختيار معزولة جيدا مستعمرة السالمونيلا والأسود تطعيم في 2 مل LB المتوسطة عند 37 درجة مئوية مع الهز بين عشية وضحاها (اليوم 6).
- البذور 80 مل السالمونيلا الثقافة بين عشية وضحاها في 1 C. ايليجانس 60 × 15 ملم (قطر × الارتفاع) لوحة NGM آغار وإعداد 6 لوحات في المجموع. احتضان لوحات في درجة حرارة الغرفة لمدة 6 ساعة. ثقافة البكتيرية يجب أن تجف وتشكيل العشب على لوحة (يوم 7).
5. الديدان تصيب رني تعامل مع السالمونيلا
- نقل تيرو-1 والسيطرة فارغة ناقلات المعالجة رني المنحرفين L4 N2 (ذرية من الديدان التي أنشئت في الخطوة 3) لوحات السالمونيلا المعالجة رني. وضع الديدان في 40 لوحة في 3 لوحات لكل مجموعة. احتضان لوحات دودة عند 20 درجة مئوية لمدة 48 ساعة (يوم 7).
- إعداد مجموعة واحدة من لوحات رني جديدة كما هو موضح في الخطوات 3.1 و 3.2 (يوم واحد 7 و
- بعد 48 ساعة العدوى، ونقل الديدان المصابة السالمونيلا إلى لوحات رني المقابلة أعدت في الخطوة 5.2 واحتضان عند 20 درجة مئوية (يوم 9).
6. البقاء على قيد الحياة الفحص
- يسجل بقاء الديدان اليومية ونقل الديدان لوحات رني المقابلة الطازجة خلال فترة وضع البيض. إعداد مجموعة من لوحات رني الطازجة قبل كل نقل دودة كما هو موضح في الخطوات 3.1 و 3.2. لمس جسم الدودة (الرأس، والجزء الأوسط والذيل) بلطف مع سلك البلاتين بالارض نهاية. يتم احتسابه دودة في عداد الموتى إذا لوحظ أي حركة للجسم الدودة.
- يسجل بقاء الديدان يوميا أو مرة كل يومين، ونقل الديدان لوحات رني المقابلة الطازجة مرتين في الاسبوع بعد وقف الديدان وضع البيض.
- بعد موت جميع الديدان، وتجميع البيانات من البقاء على قيد الحياة لوحات ثلاث نسخ كما مجموعة بيانات واحدة. إدخال البيانات بقاء كل مجموعة في صناعة البرمجيات الإحصائية المناسبة مثل GraphPad Prism لتوليد منحنيات البقاء على قيد الحياة وأداء كابلان ماير تحليل البقاء على قيد الحياة. يتم تكرار التجربة بأكملها مرة واحدة على الأقل للتأكد من النتيجة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
عند 20 درجة مئوية، ومتوسط عمر من النوع البري الديدان N2 هو 17 يوما (الشكل 2A والجدول 2). يقلل الإصابة السالمونيلا بشكل كبير من متوسط عمر الديدان N2 إلى 10.5 يوما (ع = 0.0002، اختبار تسجيل رتبة) (الشكل 2A ).
إذا C. ايليجانس الجينات تلعب دورا هاما في الدفاع ضد العدوى السالمونيلا، ومن المتوقع أن تثبيط لها سوف تضفي القابلية للعدوى السالمونيلا. في الواقع، بالمقارنة مع السيطرة المعالجة رني الحيوانات N2 المصابة السالمونيلا، وانخفض متوسط عمر المصابين السالمونيلا تيرو-1-N2 تعامل رني الديدان من 10.5 أيام إلى 9 أيام (ع <0.0001، اختبار تسجيل رتبة) (الشكل 2B والجدول 2). هو تقصير عمر الأقصى بشكل كبير من قبل 14 يوما (من 24 يوما إلى 10 يوما، والشكل 2B الجدول 2). وعلاوة على ذلك، ويكونج 1 رني لا يوجد لديه تأثير واضح على عمر الديدان N2 التي لم يتم المصابين السالمونيلا (ع = 0.2593، اختبار تسجيل رتبة) (الشكل 2C والجدول 2)، مشيرا إلى أن عدوى السالمونيلا، وليس تيرو-1 العلاج رني، يقلل من عمر السالمونيلا المصابة تيرو-1 الديدان المعالجة رني. أيضا، تيرو-1 هو جين أساسي في C. الدفاع ايليجانس ضد العدوى السالمونيلا.
الشكل 1. تدفق الرسم البياني الإجراءات التجريبية.
الشكل 2. تثبيط تيرو-1 الجين بواسطة رني يمنح سوسceptibility للعدوى السالمونيلا في C. ايليجانس. منحنيات AC) من البقاء على قيد الحياة البرية من نوع الحيوانات N2 تعامل مع مكافحة ناقلات إما فارغة أو رني تيرو-1 رني الجين بعد التعرض 2 يوم لالسالمونيلا التيفية الفأرية أو غير إمراضية الإشريكية القولونية عند 20 ° C. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الجدول 1. بروتوكول زمني عدوى السالمونيلا.
الجدول 2. التحليل الإحصائي للالعمر الإفتراضي البيانات في الشكل 2.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
C. ايليجانس هو كائن نموذج الوراثية بسيط هو أن يأكل البكتيريا كمصدر المغذيات فيها. وبالتالي، فمن السهل أن تحل محل المواد الغذائية البكتيرية العادية مع الممرض الأمعاء للتحقيق في التفاعلات بين C. ايليجانس والممرض الذي تم اختياره. هنا يوصف بروتوكول لعدوى السالمونيلا والجمع بين C. ايليجانس رني تغذية العلاج لدراسة دور الجينات المضيف في الدفاع ضد العدوى السالمونيلا. بروتوكولات الإصابة السابقة فضح C. الديدان ايليجانس إلى البكتيريا المسببة للأمراض بما في ذلك السالمونيلا خلال حياتهم 20. في هذا البروتوكول، السالمونيلا يصيب الديدان في فترة تستغرق يومين. بعد ذلك، والديدان لم تعد تتعرض لالسالمونيلا. هذه العدوى السالمونيلا يقلل بشكل ملحوظ عمر C. ايليجانس الحيوانات البرية من نوع. وبالتالي، غزت الديدان تكرار السالمونيلا داخل وقتل الحيوانات 10 السالمونيلا السالمونيلا يقلد الإنسان، والتي ينبغي أن تساعد على كشف معلومات مفيدة لفهم الأمراض التي تنقلها الأغذية البشرية التي تسببها عدوى السالمونيلا. وعلاوة على ذلك، فإن هذا البروتوكول يجمع بين العلاج التغذية رني مع عدوى السالمونيلا، مما يجعل من الممكن لاختبار أي مرشح الجينات التي قد يكون متورطا في الدفاع المضيف ضد عدوى السالمونيلا، وخصوصا عندما المسوخ الجينية غير متوفرة. الجينات الالتهام الذاتي يستخدم تيرو-1 المعروف أن تشارك في الدفاع ضد العدوى السالمونيلا كمثال في الدراسة الحالية. طفرات تيرو-1 هي القاتلة 21، والذي يمنع اختبار دورها في الدفاع ضد العدوى السالمونيلا في البالغين. باستخدام بروتوكول الحالي، فقد تبين أن تثبيط تيرو-1 بواسطة رني تعطي القابلية للعدوى السالمونيلا في C. ايليجانس. في هذه الدراسة، N2 نوع الديدان البرية الحديدد مع البكتيريا L4440 لها عمر مماثلة الحيوانات التي تتغذى على OP50. الحيوانات تبدأ في الموت حول يوم 6 والحد الأقصى للعمر هو حوالي أربعة أسابيع. الديدان N2 المصابين السالمونيلا تعيش بضعة أيام أقصر. على النقيض من ذلك، تيرو-1 الديدان المعالجة رني المصابين السالمونيلا يموت حوالي مرتين أسرع من الحيوانات السيطرة على الرغم من أن تاريخ بداية للحيوانات للموت في كل من المجموعتين ليست سوى بضعة أيام بصرف النظر (الشكل 2). التجربة بأكملها تستغرق حوالي 1 الشهر.
في هذا البروتوكول، يتعين على تنسيق وإعداد التغذية رني السالمونيلا بحيث يتعرضون رني المعاملة L4 المنحرفين المرحلة لعدوى السالمونيلا. يوصف زمني نموذجي من البروتوكول المستخدم في المختبر المؤلفين في الجدول 1. يتم إعداد البكتيريا تغذية رني الأسبوعية ويتم تخزين ثقافة البكتيرية في 4 درجات مئوية عندما لا تستخدم. من المذكرة، في يوم 7، وسوف تبدأ العدوى 60؛ ساعة بعد يتم وضعها السالمونيلا الثقافات بين عشية وضحاها على لوحات NGM. خلال هذه الفترة 6 ساعة، يتم انتقاؤها رني معاملة المنحرفين L4 N2 من المقابلة تيرو-1 والسيطرة فارغة لوحات رني ناقلات. وتستخدم الديدان غير المصابة والضوابط للتأكد مما إذا عدوى السالمونيلا يقصر عمر الديدان المصابة وإذا تيرو-1 رني العلاج لديه أي تأثير على دودة العمر.
حاليا، بقاء C. ايليجانس بعد الإصابة يستخدم عادة لقياس الفوعة الممرض 3-5. ومع ذلك، رني تثبيط بعض C. الجينات ايليجانس يؤدي إلى انخفاض عمر. لذلك، ينبغي للمرء أن يكون حذرا عند تفسير البيانات. عند مواجهة هذا الوضع، وتركيزات مختلفة من محفز رني، IPTG، ويمكن اختبار لتحديد تركيز المطلوب الذي يؤثر فقط على استجابة المضيف للالتهابات الممرض دون التأثير على عمر الحيوان. كما ذكرت سابقا <سوب> 10، تم استخدام تركيز 1 نانومتر IPTG بنجاح لدراسة دور الالتهام الذاتي في IGF بوساطة إشارات المقاومة الممرض في C. ايليجانس.
بالنظر إلى أن C. وقد تسلسل الجينوم وC. ايليجانس وقد ولدت المكتبات تغذية ايليجانس رني 16،18، فمن الممكن لإعادة النظر في بروتوكول وصف لأداء رني الفرز على نطاق الجينوم لتحديد جميع الجينات تشارك في الدفاع المضيف ضد عدوى السالمونيلا. على سبيل المثال، بدلا من استخدام متوسط بقاء لقياس ضراوة السالمونيلا، ويستخدم الحد الأقصى للبقاء على قيد الحياة. وعلاوة على ذلك، والديدان المصابة يمكن تعقيمها بواسطة المكمل لوحات مع fluorodeoxyuridine، مثبط تخليق الحمض النووي. وبالتالي، ونقل المصابين من الديدان غير ضروري طالما يتم توفير الغذاء لمنع الديدان من الموت جوعا. وهذه التعديلات تخفيف عبء العمل عن شاشة عالية الإنتاجية بشكل كبير. هذا النوع من الدراسة على نطاق واسع قد ق[هد] ضوء على فهم استجابة الإنسان للإصابة السالمونيلا العديد من المسارات البيولوجية في C. يتم حفظها ايليجانس تطويريا في البشر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
Acknowledgments
نشكر الدكتورة ديان Baronas-ويل لقراءة نقدية للمخطوطة. وأيد هذا العمل من قبل وحدة التحليل المالي تشارلز إي شميت كلية العلوم غرانت البذور ومنحة الشيخوخة من مؤسسة إليسون الطبية لKJ
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| LB Broth | Fisher | BP9723-500 | |
| XLD agar | EMD Chemicals | 1.05287.0500 | |
| Bacto Agar | Fisher | DF0140-01-0 | |
| Peptone | Fisher | BP1420-500 | |
| Sodium Chloride | Fisher | S671-500 | |
| Calcium Chloride | Fisher | C69-500 | |
| Magnesium Sulfate | Fisher | M65-500 | |
| IPTG | Gold Biotechnology | 12481C50 | |
| Cholesterol | Sigma | C8667-25G | |
| Ampicillin | Fisher | BP1760-25 | |
| Salmonella typhimurium | ATCC | ATCC14028 | |
| Petri Dish 95 x 15 mm | Fisher | FB0875714G | |
| Petri Dish 60 x 15 mm | Fisher | 08-757-13A | |
| Falcon Serological pipet | Fisher | 13-668-2 | |
| Falcon Express Pipet-Aid | Fisher | 13-675-42 | |
| MaxQ6000 shaking incubator | Thermo Scientific | SHKE6000-7 | |
| Incubator | Percival | I-36DL |
References
- Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. C. elegans II. , (1997).
- Brenner, S.
- Aballay, A., Ausubel, F. M. Caenorhabditis elegans as a host for the study of host-pathogen interactions. Curr Opin Microbiol. 5, 97-101 (2002).
- Kurz, C. L., Ewbank, J. J. Caenorhabditis elegans: an emerging genetic model for the study of innate immunity. Nat Rev Genet. 4, 380-390 (2003).
- Mylonakis, E., Aballay, A. Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions. Infection and Immunity. 73, 3833-3841 (2005).
- Ford, M. W., et al. A descriptive study of human Salmonella serotype typhimurium infections reported in Ontario from 1990 to 1997. Can J Infect Dis. 14, 267-273 (2003).
- Voetsch, A. C., et al. FoodNet estimate of the burden of illness caused by nontyphoidal Salmonella infections in the United States. Clin Infect Dis. 38 Suppl 3, (2004).
- Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. M. Salmonella typhimurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans. Curr Biol. 10, 1539-1542 (2000).
- Alegado, R. A., Tan, M. W. Resistance to antimicrobial peptides contributes to persistence of Salmonella typhimurium in the C. elegans intestine. Cell Microbiol. 10, 1259-1273 (2008).
- Jia, K., et al. Autophagy genes protect against Salmonella typhimurium infection and mediate insulin signaling-regulated pathogen resistance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 14564-14569 (2009).
- Tenor, J. L., McCormick, B. A., Ausubel, F. M., Aballay, A. Caenorhabditis elegans-based screen identifies Salmonella virulence factors required for conserved host-pathogen interactions. Curr Biol. 14, 1018-1024 (2004).
- Levine, B., Klionsky, D. J. Development by self-digestion: molecular mechanisms and biological functions of autophagy. Developmental Cell. 6, 463-477 (2004).
- Birmingham, C. L., Smith, A. C., Bakowski, M. A., Yoshimori, T., Brumell, J. H. Autophagy controls Salmonella infection in response to damage to the Salmonella-containing vacuole. J Biol Chem. 281, 11374-11383 (2006).
- The C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282, 2012-2018 (1998).
- Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
- Kamath, R. S., Martinez-Campos, M., Zipperlen, P., Fraser, A. G., Ahringer, J. Effectiveness of specific RNA-mediated interference through ingested double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Genome Biol. 2, 1-10 (2001).
- Liang, J., Xiong, S., Savage-Dunn, C. Using RNA-mediated interference feeding strategy to screen for genes involved in body size regulation in the nematode C elegans. J. Vis. Exp. (72), (2013).
- Fraser, A. G., et al. Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference. Nature. 408, 325-330 (2000).
- Stiernagle, T.
- Aballay, A., Ausubel, F. M. Programmed cell death mediated by ced-3 and ced-4 protects Caenorhabditis elegans from Salmonella typhimurium-mediated killing. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 2735-2739 (2001).
- Melendez, A., et al. Autophagy genes are essential for dauer development and lifespan extension in C. elegans. Science. 301, 1387-1391 (2003).
