Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

פרוטוקול להדביק Published: June 26, 2014 doi: 10.3791/51703
Automatic Translation
1, 1
1Department of Biological Sciences, Florida Atlantic University

Summary

סי אלגנס התפתחה כמודל גנטי חדש כדי לחקור אינטראקציות בין המאכסן לפתוגן. כאן אנו מתארים פרוטוקול להדביק ג elegans עם typhimurium סלמונלה בשילוב עם טכניקת התערבות RNAi גדיל פעמיים כדי לבחון את התפקיד של גנים מארח בהגנה מפני זיהום סלמונלה.

Abstract

בעשור האחרון, ג elegans התפתחה האורגניזם חסר חוליות ללמוד אינטראקציות בין מארחים ופתוגנים, כולל ההגנה המארחת נגד סלמונלה typhimurium חיידק גראם שלילי. סלמונלה קובעת זיהום מתמשך במעי של ג elegans ותוצאות במוות המוקדם של בעלי חיים נגועים. מספר מנגנוני חסינות זוהה בג elegans כדי להתגונן מפני זיהומי סלמונלה. Autophagy, מסלול השפלה lysosomal אבולוציונית שימור, הוכח להגביל את שכפול סלמונלה בג elegans וביונקים. הנה, בפרוטוקול מתואר להדביק ג elegans עם typhimurium סלמונלה, שבו התולעים נחשפים לסלמונלה לזמן מוגבל, בדומה לזיהום סלמונלה בבני אדם. זיהום סלמונלה מקצר את תוחלת החיים של ג באופן משמעותי elegans </ Em>. שימוש בגן autophagy החיוני BEC-1 כדוגמא, אנחנו בשילוב שיטת זיהום זה עם ג elegans RNAi האכלת גישה והראה פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לבחון את תפקידו של ג גנים מארח elegans בהגנה מפני זיהום סלמונלה. מאז ג elegans ספריות RNAi הגנום כולו זמינות, פרוטוקול זה מאפשר למסך באופן מקיף לג גנים elegans כי להגן מפני סלמונלה ופתוגנים מעיים אחרים באמצעות ספריות RNAi הגנום כולו.

Introduction

נמטודות הקרקע המתגוררות ללא Caenorhabditis elegans היא אורגניזם מודל פשוט וגנטי צייתן שימוש ללמוד הרבה שאלות ביולוגיות. ג elegans דומיננטי קיים כהרמפרודיטים דישון עצמיים. זכרים שנוצרו באופן ספונטני על ידי אי - חוסר התאמה של כרומוזום X במהלך 1,2 gametogenesis. בנוכחותו של מזון בשפע, ג elegans לפתח ברציפות בארבעה שלבי זחל למבוגרים. טמפרטורה גם משפיעה ג פיתוח elegans; פיתוח מהיר יותר היא נצפתה בטמפרטורות גבוהות יותר. במעבדה, ג elegans הוא תרבית בטמפרטורה סטנדרטית של C ° 20 על צלחות אגר עם coli Escherichia זרע החיידק (זן OP50) כמזון 1,2.

בעשור האחרון, ג elegans התפתחה האורגניזם חסר חוליות ללמוד אינטראקציות בין המאכסן לפתוגן 3-5. בטבע, ג elegans אוכל חיידקים כnutrien1,2 המקור לא. האוכל שלה נורמלי חיידקים במעבדה, OP50, ניתן להחליף בקלות עם פתוגנים אחרים כדי לבחון את יחסי הגומלין בין ג elegans וכל פתוגן שנבחר. בתנאים אלה, המעי הוא האתר העיקרי של הזיהום. אכן, מגוון רחב של חיידקים פתוגנים הוכח להדביק קטלני ג elegans 3-5.

סלמונלה חיידק גראם שלילי היא הפתוגן במערכת העיכול שגורם למחלות שמקורן במזון לבני אדם ברחבי העולם 6,7. ג elegans הוא מארח מודל טוב לסלמונלה typhimurium כחיידק הזה משכפל ותערוכות דלקות מעיים מתמשכות 8-10. ג elegans נעשה שימוש כדי לזהות גם רומן וארסיות סלמונלה ידועה קודם לכן גורמי 11. מעניין לציין, כי ג מערכת חיסונית elegans מגבילה הצלחת שכפול סלמונלה. זה כבר דווח בעבר כי inhibition של גנים autophagy הופך שכפול סלמונלה מוגבר בג elegans, וכתוצאה מכך למוות המוקדם של תולעים נגועים 10. Macroautophagy (המכונה במסמך זה כלautophagy) הוא תהליך דינמי הכולל ארגון מחדש של קרומי subcellular לעקל ציטופלסמה ואברונים למסירה הליזוזום לפירוק 12. Autophagy דווח להגביל את שכפול סלמונלה בג elegans ואצל יונקי 10,13.

ג הגנום elegans היה הגנום תאיים אוקריוטים הראשון רצף; הוא מגיב לטיפול RNAi 14-16. יתר על כן, יכול להיות מנוהל ביעילות על ידי חשיפת RNAi תולעים לבלוע חיידקים המכילים פעמיים תקועים RNA של גן המטרה, המכונה RNAi האכלת 16,17. ספריות האכלת הגנום כולו RNAi כבר נוצרו עבור RNAi הגנום הקרנת 16,18. בזאת, הפרו זיהום סלמונלהtocol בשילוב עם RNAi האכלה כדי לאפשר ג הבדיקה גנים elegans של עניין ביכולתם על מנת להגן מפני זיהום סלמונלה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. צלחות XLD (קסילוז יזין Desoxycholate) אגר

אגר XLD הוא מדיום גידול סלקטיבי לסלמונלה, שמופיע כמושבות שחורות על צלחות אגר XLD. עם זאת, אם אין חשש לזיהום, ניתן להחליף צלחת LB רגילה.

  1. לשקול את אגר XLD 5.5 g ו resuspend ב 5 מיליליטר מים deionized.
  2. מערבבים היטב עד שכל אגר הוא רטוב. הוספת 95 מיליליטר מים deionized עד שכל הגושים נעלמים והבינוני הוא resuspended לחלוטין.
  3. מרתיחים את המדיום כדי להמס לחלוטין (לא חיטוי).
  4. מגניב הבינוני בטמפרטורת חדר כדי 50 ° C.
  5. יוצקים 25 אגר מיליליטר בכל 95 x 15 מ"מ צלחת (גובה x קוטר) (צלחות חתומות עם Parafilm יכולות להיות מאוחסן על 4 מעלות צלזיוס למשך עד חודש 1).

2. צמיחה נמטודות בינוני (NGM) RNAi האכלת צלחות

הכנת ג צלחות elegans NGM כבר תוארו בעבר 1 9. הנה הליך מתואר בקצרה להוסיף אמפיצילין האנטיביוטיקה ואיזופרופיל inducer הכימי RNAi β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) לתקשורת NGM לעשות צלחות האכלת RNAi.

  1. להמס 3 גרם NaCl ו2.5 peptone גרם Bacto בליטר המים deionized 1.
  2. הוספת 17 אגר Bacto גרם לכלי התקשורת.
  3. החיטוי התקשורת 45 דקות ולקרר את התקשורת ל50 מעלות צלזיוס באמבט מים.
  4. להוסיף את הפתרונות הבאים: כולסטרול מיליליטר 1 (5 מ"ג / מיליליטר ב95% אתנול), 1 מיליליטר 1 M CaCl 2, 1 מיליליטר 1 M MgSO 4, ו25 מיליליטר 1 M חיץ אשלגן זרחה (pH 6.0). מערבבים היטב.
  5. הוסף 1 מיליליטר 1 M IPTG ו500 אמפיצילין μl (100 מ"ג / מיליליטר במים סטריליים).
  6. מערבבים את הפתרון טוב ויוצקים לתוך 60 x 15 מ"מ (גובה x קוטר) צלחות פטרי באמצעות סיוע Pipet ו25 מיליליטר פיפטה סרולוגיות בעקבות הליכי סטרילי. ממלא כל צלחת עם אגר מיליליטר 12. ניתן לאחסן צלחות על 4 מעלות צלזיוס עד חודש 1.

"Jove_title"> 3. הכן את בעלי חיים שטופלו RNAi לזיהום

גן autophagy החיוני BEC-1 משמש כדוגמא כדי לבחון את תפקודו של גן מארח בהגנה מפני זיהום סלמונלה. הפרוצדורות הן באיור 1 ולוח 1. הפרוטוקול להכנת חיות שטופלו ב-RNAi לזיהום הבא, עם היום של כל שלב ניסיוני שניתן בסוגריים.

  1. לחסן האכלת RNAi BEC-1 ובקרת וקטור הריק L4440 RNAi האכלת חיידקים על ידי הצבת פתית של -80 חיידקים קפואים מעלות צלזיוס ל -2 מיליליטר מדיום LB בתוספת 100 מ"ג / מיליליטר אמפיצילין (יום 1). חזור על פעולה זו פעם בשבוע במהלך כל הניסוי יש חיידקי RNAi טריים. אחסן את התרבות במקרר 4 ° C, כאשר אינו בשימוש.
  2. זרעים של תרבות חיידקי RNAi לילה 100 מיליליטר על צלחות RNAi. הכן שלושה RNAi BEC-1 ושלוש השליטה v הריקEctor צלחות RNAi. דגירה הצלחות ב 37 ° C במשך לילה (יום 2).
  3. הסר את צלחות RNAi מ37 מעלות צלזיוס החממה ולאפשר להם להתקרר לטמפרטורת חדר על הספסל. תרים הרמפרודיטים N2 סוג בר L4 ייזונו היטב, ולהעביר אותם ל-BEC 1 RNAi ולשלוט צלחות RNAi וקטור ריקות. הנח שלושה תולעים לכל צלחת, על צלחות בשלושה עותקים. באותו היום, להכין צלחות RNAi כמתואר בשלב 3.2 (יום 3).
  4. דגירה צלחות RNAi עם תולעים בחממת 20 מעלות צלזיוס במשך 36-40 תולעי שעה ומעביר לצלחות RNAi מקבילה טריות מוכנות בשלב 3.3. אחרי התולעים מועברים, דגירה הצלחות בחממת C ° 20 ל64 שעה (יום 4).

4. הכן סלמונלה לזיהום

  1. סלמונלה Streak -80 ° C מניות קפוא על צלחת אגר XLD 1 ו דגירה את הצלחת על 37 ° C במשך הלילה (יום 5
  2. פיק מושבה סלמונלה השחורה מבודדת היטב ולחסן אותו בכ -2 מיליליטר מדיום LB על 37 מעלות צלזיוס עם רעד הלילה (יום 6).
  3. תרבות לילה זרע 80 מיליליטר סלמונלה על 1 ג elegans 60 x 15 מ"מ (גובה x קוטר) צלחת אגר NGM ולהכין 6 צלחות בסך הכל. דגירה הצלחות בטמפרטורת חדר למשך 6 שעות. תרבות החיידקים צריכה להתייבש ויוצרת דשא על הצלחת (יום 7).

5. תולעים שטופלו ב-RNAi להדביק עם סלמונלה

  1. העבר את BEC-1 ולשלוט הרמפרודיטים ריקים וקטור טופלו RNAi L4 N2 (צאצאים של תולעים שהוקמו בשלב 3) לצלחות סלמונלה שטופלה RNAi. הנח 40 תולעים לכל צלחת על 3 צלחות עבור כל קבוצה. דגירה צלחות התולעת ב20 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות (יום 7).
  2. הכן את הסט אחד של צלחות RNAi טריות כמתואר בשלבי 3.1 ו3.2 (יום 7 ו
  3. לאחר 48 זיהום שעה, להעביר תולעים הנגועים בסלמונלה לצלחות RNAi המתאימות מוכנות בשלב 5.2 ולדגור על 20 ° C (יום 9).

6. הישרדות Assay

  1. ציון ההישרדות של תולעים יומיים ולהעביר את תולעים לצלחות RNAi מתאימים טריות בתקופת הטלת הביצים. להכין סט של צלחות RNAi טריות לפני כל העברת תולעת כמתואר בשלבי 3.1 ו3.2. לגעת בגוף התולעת (הראש, חלק וזנב באמצע) בעדינות עם חוט פלטינה שיטח סוף. תולעת הוא הבקיע כמת אם לא תנועה של גוף התולעת הוא ציינה.
  2. ציון ההישרדות של תולעים ביום או בכל יום אחר, ולהעביר את תולעים לצלחות RNAi מתאימים טריות פעמיים בשבוע אחרי התולעים יפסיקו להטיל ביצים.
  3. אחרי הכל התולעים למות, בריכת נתוני הישרדות מצלחות בשלושה עותקים כסט נתונים אחד. קלט נתוני ההישרדות של כל קבוצה לתוך תוכנה סטטיסטית מתאימה כגון GraphPad Prism ליצור עקומות הישרדות ולבצע ניתוח הישרדות Kaplan-Meier. כל הניסוי חוזר על עצמו לפחות פעם אחת כדי לאשר את המסקנה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ב 20 ° C, תוחלת החיים הממוצעת של תולעי N2 סוג בר היא 17 ימים (איור 2 א וטבלה 2). זיהום סלמונלה מקטין באופן משמעותי את תוחלת החיים הממוצעת של תולעי N2 ל10.5 ימים (p = 0.0002, בדיקת יומן דרגה) (איור 2A ).

אם ג גן elegans ממלא תפקיד חשוב בהגנה מפני זיהום סלמונלה, הוא ניבא כי עיכובה יהיה להקנות את רגישות לזיהום סלמונלה. למעשה, בהשוואה לבעלי החיים שטופלו RNAi שליטה הנגוע בסלמונלה N2, תוחלת החיים הממוצעת של תולעי N2 הנגוע בסלמונלה BEC-1-טופל RNAi הוא ירד מ10.5 ימים עד 9 ימים (p <0.0001, בדיקת יומן דרגה) (איור 2B וטבלה 2). תוחלת החיים המרביות מתקצרות באופן דרמטי על ידי 14 ימים (מ24 ימים 10 ימים, 2B איור וטבלה 2). יתר על כן, להיותc-1 יש RNAi אין השפעה ברורה על תוחלת החיים של תולעי N2 שאינם נגועים בסלמונלה (p = 0.2593, בדיקת יומן דרגה) (איור 2C וטבלה 2), מצביע על כך שזיהום סלמונלה, לא BEC-1 טיפול RNAi, מקטין את תוחלת החיים של תולעים שטופלו RNAi BEC-1-נגועים סלמונלה. כמו כן, BEC-1 הוא גן חיוני בג הגנת elegans מפני זיהום סלמונלה.

איור 1
איור 1. תרשים זרימה של הפרוצדורות.

איור 2
איור 2. עיכוב של גן BEC-1 על ידי RNAi מקנה susceptibility לזיהום סלמונלה בג elegans. עקומות AC) הישרדות של בעלי החיים N2 סוג בר שטופלו גם עם וקטור שליטה ריק RNAi או RNAi הגן BEC-1 בעקבות חשיפת 2 יום לtyphimurium סלמונלה או חיידקי Escherichia nonpathogenic ב20 ° C. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של נתון זה.

טבלת 1
טבלת 1. זמן פרוטוקול זיהום סלמונלה.

טבלה 2
טבלה 2. ניתוח סטטיסטי שלתוחלת חיים נתונים באיור 2.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

סי אלגנס הוא אורגניזם מודל גנטי פשוט שאוכלת חיידקים כמקור התזונתי שלה. לפיכך, קל להחליף החיידקים שבמזון הרגיל שלו עם הפתוגן מעיים כדי לחקור את יחסי הגומלין בין ג elegans ופתוגן שנבחר. במסמך פרוטוקול מתואר לשלב זיהום סלמונלה ו-C elegans RNAi האכלת טיפול כדי לבחון את התפקיד של גנים מארח בהגנה מפני זיהום סלמונלה. פרוטוקולי זיהום קודמים לחשוף ג תולעי elegans לחיידקים פתוגניים כוללים סלמונלה במהלך חייהם 20. בפרוטוקול הנוכחי, סלמונלה מדביקה את התולעים בתקופה של יומיים. אחרי זה, התולעים כבר לא נחשפו לסלמונלה. זיהום סלמונלה זה מקטין את תוחלת החיים של ג באופן משמעותי elegans בעלי חיים מסוג בר. לפיכך, פלש סלמונלה לשכפל תולעים בפנים ולהרוג את החיות 10 סלמונלה זיהום סלמונלה אנושית, שאמורה לעזור לחשוף מידע שימושי כדי להבין מחלות שמקורן במזון לבני אדם הנגרמות על ידי זיהום סלמונלה. יתר על כן, פרוטוקול זה משלב את טיפול האכלת RNAi עם זיהום סלמונלה, כך שניתן לבדוק כל גנים מועמדים שעשויים להיות מעורב בהגנת מארחת מפני זיהום סלמונלה, במיוחד כאשר מוטציות הגנטיות אינן זמינות. גן autophagy ידוע להיות מעורבים בהגנה מפני זיהום סלמונלה BEC-1 משמש כדוגמא במחקר הנוכחי. מוטציות BEC-1 הן 21 קטלניים, המונעת בדיקת תפקידה בהגנה מפני זיהום סלמונלה במבוגרים. באמצעות הפרוטוקול הנוכחי, זה היה הראה כי עיכוב של BEC-1 על ידי RNAi מניב רגישות לזיהום סלמונלה בג elegans. במחקר הנוכחי, תולעים מסוג בר N2 פהד עם חיידקי L4440 יש תוחלת חיים דומות לזו של בעלי חיים נמאס עם OP50. החיות יתחילו למות סביב יום 6 ואת תוחלת החיים המקסימלית היא כארבעה שבועות. תולעי N2 הנגועים בסלמונלה לחיות קצרים כמה ימים. לעומת זאת, bec-1 תולעים שטופלו RNAi נגוע בסלמונלה למות כשתי פעמים מהר יותר מאשר חיות בקרה למרות שתאריך תחילת לבעלי חיים למות בשתי הקבוצות הוא רק בהפרש של מספר ימים (איור 2). כל הניסוי נמשך כחודש 1.

בפרוטוקול זה, התיאום של האכלת RNAi והכנת סלמונלה נחוץ כדי שהרמפרודיטים שלב L4 טופל RNAi חשופים לזיהום סלמונלה. פרק זמן טיפוסי של הפרוטוקול המשמש במעבדה של המחברים מתואר בטבלה 1. חיידקי האכלת RNAi מוכנים שבועיים ותרבות החיידקים מאוחסנת על 4 מעלות צלזיוס, כאשר אינו בשימוש. ראוי לציין, ביום 7, הזיהום יתחיל 60; שעות לאחר תרבויות לילה סלמונלה מונחות על צלחות NGM. במהלך תקופה של 6 שעות זה, הרמפרודיטים L4 N2 טופל RNAi נקטפים ממקביל BEC-1 ולשלוט צלחות RNAi וקטור ריקות. תולעים שאינם נגועים משמשים כבקרה כדי לבדוק אם זיהום סלמונלה מקצר את תוחלת החיים של תולעים נגועים ואם טיפול RNAi BEC-1 יש השפעה על תוחלת החיים של תולעת.

נכון לעכשיו, הישרדותו של ג elegans לאחר ההדבקה הוא בדרך כלל משמש למדידת ארסיות הפתוגן 3-5. עם זאת, עיכוב RNAi של ג מסוים גנים elegans לגרום לתוחלת חיים ירדו. לכן, אחד צריך להיות זהיר כאשר לפרש את הנתונים. כאשר מצב זה הוא נתקל, ריכוזים שונים של משדל RNAi, IPTG, יכולים להיבדק כדי לזהות את הריכוז הרצוי שרק משפיע על תגובת המארח לזיהומי הפתוגן ללא השפעה על תוחלת החיים של בעלי החיים. כפי שדווח בעבר <sup> 10, ריכוז 1 ננומטר IPTG היה השתמש בהצלחה כדי לבחון את התפקיד של autophagy בהתנגדות הפתוגן בתיווך איתות של IGF בג elegans.

בהתחשב בכך שג הגנום elegans כבר רצף וג ספריות האכלת elegans RNAi כבר נוצרו 16,18, ניתן לשנות את הפרוטוקול המתואר לבצע הקרנת RNAi הגנום לזהות את כל הגנים של המארח מעורב בהגנה מפני זיהום סלמונלה. לדוגמא, במקום להשתמש בחציון ההישרדות למדוד את הארסיות של סלמונלה, משמשת ההישרדות המרבית. יתר על כן, ניתן לעקר תולעים נגועים בהשלמת צלחות עם fluorodeoxyuridine, מעכב סינתזה של DNA. לפיכך, העברה של תולעים נגועים היא מיותרת כל עוד אוכל מסופק כדי למנוע תולעים מרעב. שינויים אלה יפחיתו את עומס העבודה עבור מסך תפוקה גבוהה מאוד. סוג זה של מחקר בקנה מידה גדולה עשוי יםאור הד בהבנה את התגובה האנושית לזיהום סלמונלה כמשבש מסלולים ביולוגיים רבים בג elegans שמורים באבולוציה בבני אדם.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

Acknowledgments

אנו מודים לד"ר דיאן Baronas-ואל לקריאה ביקורתית של כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי Charles E. מידט מכללת FAU של גרנט זרע המדע ומלגות מהזדקנות הרפואית אליסון הקרן לKJ

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LB Broth Fisher BP9723-500
XLD agar EMD Chemicals 1.05287.0500
Bacto Agar Fisher DF0140-01-0
Peptone Fisher BP1420-500
Sodium Chloride Fisher S671-500
Calcium Chloride Fisher C69-500
Magnesium Sulfate Fisher M65-500
IPTG Gold Biotechnology 12481C50
Cholesterol Sigma C8667-25G
Ampicillin Fisher BP1760-25
Salmonella typhimurium ATCC ATCC14028
Petri Dish 95 x 15 mm Fisher FB0875714G
Petri Dish 60 x 15 mm  Fisher 08-757-13A
Falcon Serological pipet Fisher 13-668-2
Falcon Express Pipet-Aid Fisher 13-675-42
MaxQ6000 shaking incubator  Thermo Scientific SHKE6000-7
Incubator Percival I-36DL

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. C. elegans II. , (1997).
  2. Brenner, S. The Genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  3. Aballay, A., Ausubel, F. M. Caenorhabditis elegans as a host for the study of host-pathogen interactions. Curr Opin Microbiol. 5, 97-101 (2002).
  4. Kurz, C. L., Ewbank, J. J. Caenorhabditis elegans: an emerging genetic model for the study of innate immunity. Nat Rev Genet. 4, 380-390 (2003).
  5. Mylonakis, E., Aballay, A. Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions. Infection and Immunity. 73, 3833-3841 (2005).
  6. Ford, M. W., et al. A descriptive study of human Salmonella serotype typhimurium infections reported in Ontario from 1990 to 1997. Can J Infect Dis. 14, 267-273 (2003).
  7. Voetsch, A. C., et al. FoodNet estimate of the burden of illness caused by nontyphoidal Salmonella infections in the United States. Clin Infect Dis. 38 Suppl 3, (2004).
  8. Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. M. Salmonella typhimurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans. Curr Biol. 10, 1539-1542 (2000).
  9. Alegado, R. A., Tan, M. W. Resistance to antimicrobial peptides contributes to persistence of Salmonella typhimurium in the C. elegans intestine. Cell Microbiol. 10, 1259-1273 (2008).
  10. Jia, K., et al. Autophagy genes protect against Salmonella typhimurium infection and mediate insulin signaling-regulated pathogen resistance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 14564-14569 (2009).
  11. Tenor, J. L., McCormick, B. A., Ausubel, F. M., Aballay, A. Caenorhabditis elegans-based screen identifies Salmonella virulence factors required for conserved host-pathogen interactions. Curr Biol. 14, 1018-1024 (2004).
  12. Levine, B., Klionsky, D. J. Development by self-digestion: molecular mechanisms and biological functions of autophagy. Developmental Cell. 6, 463-477 (2004).
  13. Birmingham, C. L., Smith, A. C., Bakowski, M. A., Yoshimori, T., Brumell, J. H. Autophagy controls Salmonella infection in response to damage to the Salmonella-containing vacuole. J Biol Chem. 281, 11374-11383 (2006).
  14. The C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282, 2012-2018 (1998).
  15. Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
  16. Kamath, R. S., Martinez-Campos, M., Zipperlen, P., Fraser, A. G., Ahringer, J. Effectiveness of specific RNA-mediated interference through ingested double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Genome Biol. 2, 1-10 (2001).
  17. Liang, J., Xiong, S., Savage-Dunn, C. Using RNA-mediated interference feeding strategy to screen for genes involved in body size regulation in the nematode C elegans. J. Vis. Exp. (72), (2013).
  18. Fraser, A. G., et al. Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference. Nature. 408, 325-330 (2000).
  19. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook: the online review of C elegans biology. , 1-11 (2006).
  20. Aballay, A., Ausubel, F. M. Programmed cell death mediated by ced-3 and ced-4 protects Caenorhabditis elegans from Salmonella typhimurium-mediated killing. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 2735-2739 (2001).
  21. Melendez, A., et al. Autophagy genes are essential for dauer development and lifespan extension in C. elegans. Science. 301, 1387-1391 (2003).

Tags

אימונולוגיה גיליון 88, Autophagy זיהום מחולל מחלה מארח RNAi
פרוטוקול להדביק<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; עם<em&gt; Typhimurium סלמונלה</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zhang, J., Jia, K. A Protocol to… More

Zhang, J., Jia, K. A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium. J. Vis. Exp. (88), e51703, doi:10.3791/51703 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter