Introduction
Stroke blödning har visat sig förekomma i mer än 8% av patienter som lider av neuropatisk smärta, kallad central post-stroke smärta (cpsp). 1-3 cpsp kan resultera från somatosensoriska dysfunktion och därmed framkalla överkänslighet och allodyni. 4 emellertid de patofysiologiska mekanismer för somatosensoriska dysfunktion i cpsp fortfarande osäkra. Till exempel, förlusten av somatiska förnimmelser härrör från neuronal deafferentation i hemorragisk hjärnan området. Hyperalgesi kan orsakas av hyperexcitabilitet centrala nociceptiva neuroner eller central disinhibition, 5, 6 men neurala substrat som är involverade i cpsp symptom är fortfarande okända. Vissa studier har antytt att den dorsolaterala prefrontala cortex (dPFC), rostralt främre cingulum cortex (ACC), amygdala, hippocampus, periaqueductal grå (PAG), rostralt ventromediala medulla, och deras förbindelser med varandra medla nociceptiv bearbetning. 7 Ytterligarely, mediala prefrontala cortex (mPFC) -amygdala kretsar visade sig vara inblandade i smärtrelaterade uppfattning. 8 Uppgifter om patofysiologiska mekanismer för cpsp är olika, och aktivering av neurala substrat i cpsp behöver ytterligare granskning.
[14 C] -Iodoantipyrine (IAP) upptag används för att indirekt observera regionalt cerebralt blodflöde (rCBF), under antagande av en relation mellan hjärnaktivitet och CBF. Även [14 C] -IAP kan inte bedöma hjärnaktivitet i realtid, till exempel med funktionell magnetisk resonanstomografi (fMRI), har det flera fördelar. Till exempel, [14 C] -IAP är lämplig för mätning av spontant förekommande hjärn händelser under patologiska tillstånd. 9 Dessutom [14 C] -IAP upptagning mäts utan bedövning. Det kostar också mindre än andra avbildningsmetoder, inklusive fMRI och positronemissionstomografi (PET). Den [14 C] -IAP metod har föreslagits vara lämpliga för measuring spontan smärta (t.ex. cpsp) som induceras av lesioner i den ventrala basala kärnan (VB) av thalamus. 9
Det nuvarande protokollet beskriver hur man utför [14 C] -IAP metod för att bedöma medverkan av neurala substrat för cpsp som induceras av lesioner i VB i thalamus i en djurmodell. Tekniken erbjuder ett sätt att bestämma de patofysiologiska mekanismer som ligger bakom cpsp symptom på beteende- och neuronala nivåer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Protokollet i denna studie erhållit godkännande från Academia Sinica Institutional Animal Care och Utilization kommittén i Taiwan.
1. Djur Förberedelser
- Erhålla Sprague-Dawley-råttor av hankön (ca 300-400 g). Behåll råttorna i ett luftkonditionerat rum (21 - 22 ° C, 50% luftfuktighet) under 12 tim / 12 tim ljus / mörker-cykel (ljus på vid 08:00) med fri tillgång till mat och vatten.
2. Försöksförfarande
- Tillåta alla de råttor för att anpassa sig till miljön i sina hemburar under en vecka före experimenten. Under anpassning, utför von Frey och plantar tester för att fastställa baslinjerna.
- von Frey-test
- Placera råttan i en akryl inneslutning (30 cm x 30 cm x 80 cm) under 30 min för boende.
- Skaffa von Frey filament (filament nr 11 -. 20) som har samma längd men varierande diametrar för att ge ett intervallav krafter 2-100 g.
- Att bedöma tassåterdragningströskeln i råttans baktass, använda von Frey filament för att stimulera mitten av baktassar genom en nätliknande port på akrylplatta vid 5 min intertrial intervall. För att spela in maximalt pålagda trycket, använda trådarna i stigande ordning, från låg till hög, tills det maximala applicerade trycket registreras. 10
- När råttor uppvisar en tass tillbakadragande svar på stimulering, spela glödnummer. Bestäm tillbakadragande svar i denna studie enligt lägsta stimulus.
- Upprepa samma procedur omedelbart, för totalt tre gånger i följd på samma råtta. Konvertera filamentet numret till motsvarande kraft (i gram) och genomsnittet i värden.
- plantar Test
- Placera råttan i en genomskinlig plexiglaslåda (uppdelad i fyra ramar, 80 cm x 30 cm x 15 cm) under 30 minuter för boende.
- Använd en infrared stråle för att stimulera centrala baktassen genom en glasplatta. Justera den infraröda ljusintensiteten för att erhålla en genomsnittlig tasstillbakadragande responslatens av ca 10 sek. Genomför en rättegång genom att trycka på en knapp som slår på IR-ljuskällan och startar en digital solid-state timer. Manipulera varaktigheten av den infraröda ljusstrålen.
- Registrera varaktigheten av det infraröda ljuset, när råttorna uppvisa en tasstillbakadragande svar. Den längsta längd bör inte överstiga 20 sekunder i varje försök att undvika vävnadsskada. Använd en intertrial intervall på minst 5 minuter för att undvika successiv stimulering.
- Upprepa testet med tre försök för vänster och höger baktassar och beräkna genomsnittet för varje baktass för varje råtta.
- Kollagenas Lesion Kirurgi
- Söva råttan med 4% isofluran tills förlust av toe-nypa respons och somatiska svar på kirurgiska stimuli inträffar. Upprätthålla anestesi med 1,5-2% isoflurane för varaktigheten av kirurgi.
- Placera råttan i en stereotaxisk anordning med en enkel värmedyna för att bibehålla kroppstemperaturen vid 36,5 till 37,5 ° C. Applicera ögonkräm på ögonen för att förhindra torrhet under narkos.
- Raka pälsen med steriliserade elklipper, och göra en smidig snitt (ca 2-2,5 cm) med en skalpell längs mittlinjen i hårbotten. Rengör huden och skallen med omväxlande försyn jod och 75% alkohollösning för desinfektion. Under den kirurgiska fasen, använda 75% alkohol för att sterilisera alla enheter, verktyg och arbetsbänken för att upprätthålla sterila förhållanden. Innan dess måste alla kirurgiska material steriliseras i en ångautoklav.
- Använd sterila handskar och instrument, och borra ett litet hål (3 mm diameter) i skallen med en elektrisk borr över VB (inklusive ventrala posteromedial talamisk kärna [VPM] och ventrala posterolateral talamisk kärna [VPL]) i thalamus (3,0 -3,5 mm posteriort, 3,0-3,5 mm lateraltbregma, och 5,5-5,8 mm djup från skallytan).
- Mikroinjicera 0,5 pl av normal saltlösning eller 0,125 U av typ 4 kollagenaslösning i kontroll- och försöksgrupper, respektive.
- Hålla injektionsnålen på plats under ytterligare 5 min för att möjliggöra läkemedels diffusion.
- Använda dentalcement för att fylla hålet i skallen, och sutur snittet. Efter sutur snittet tillämpa lokala smärtstillande medel (lidokain salva) till såret, och återföra dem till deras hem burar.
- Efter operation, var för sig hysa råttorna i plastburar tills de behålla sternala VILA, och håller sig varm tills återhämtat sig från anestesi.
- Beteendetester efter kirurgisk återhämtning
- Efter 7 dagars återhämtning från kirurgi, upprepa procedurerna i avsnitten 2.2 och 2.3 för testfasen. Utföra de beteendetester under 4 veckor under övervakning av hälsa och utvecklingsmässiga data för djuren.
- Söva råtta med 4% isofluran, och bibehålla kroppstemperaturen vid 36,5 till 37,5 ° C med en enkel värmedyna.
- Med en skalpell, skär två hål (2 cm diameter vardera) i mittlinjen av ryggdelen av frambenen och skärningspunkten mellan den ventrala delen av den vänstra axeln och brösthålan, respektive.
- Dissociera hud och muskler med en sax mellan de två hålen.
- Anslut den ena änden av PE 50 slang (20 cm längd) till den yttre halsvenen genom den ventrala hålet. Anslut änden av samma PE 50 slangen till rygg hålet, och anbringa på huden.
- Använd en spruta för att injicera saltlösning i halsvenen för att verifiera att PE 50 slanginte hindras.
- Sutur snittet, och injicera råttorna med 6 mg / kg gentamycin (intraperitonealt).
- Spola slangen varannan dag efter operationen med 0,3 ml 0,9% saltlösning, följt av 0,1 ml saltlösning med 20 U / ml heparin.
- En vecka efter steg 2,6, upprepa steg från 2,2 till 2,3 för att bekräfta att beteendet är stabil jämfört med steg 2,5 efter kirurgisk återhämtning.
- Placera råttan i en vilande bur under 5 - 10 min för anpassning.
- Med hjälp av en splitter ansluter PE 50 slang till två 1 ml sprutor. Fyll en spruta med normal saltlösning och fyller den andra med [14 C] -IAP-lösning (125 | j, Ci / kg i en volym av 0,3 - 0,5 ml).
- Injicera radioaktiva spår i den yttre halsvenen, och ersätta sprutan med en annan spruta fylld med 3 M kaliumklorid.
- Tio sekunder efter det radioaktiva spår injvsnitt, injicera 3 M kaliumklorid i en överdos av isofluran, och offra djur i enlighet med standardeutanasimetoder (dvs. isofluran från en förångare 50 min) baserad på riktlinjerna i Academia Sinica Institutional Animal Care och användning kommittén i Taiwan.
- Efter en minut, exponera skallen, och trimma bort de återstående muskeln. Med användning rongeurs, skala bort den dorsala ytan av skallen från hjärnan. Klippa bort sidorna av skallen med rongeurs. Nästa med hjälp av en spatel, skär lukt glödlampor och nervförbindelser längs den ventrala ytan av hjärnan, och ta bort hjärnan.
- Använda optimal skärtemperatur (oktober) förening för att frysa hjärnan i torr is och metylbutan (ca -55 ° C). Lagra hjärnvävnaden i en frys. 11, 12
- Orientera vävnaden i en mikrotom, med hindbrain nedåt. Använd en kryostat att skära hjärnan i 20 &# 181; m tjocka sektioner.
- Placera hjärnan skivor på objektglas i en kryostat vid -20 ° C, med en 240 | j, m intervall mellan varje skiva.
- Placera objektglas och fem standardfilterpapper med graderad radioaktivitet i exponerings kassetter under 3 dagar vid -20 ° C. Enligt sekvensen av hjärnan skivor, ordna objektglas från topp till botten. Slutligen, placera filterpapper i botten av kassetterna. 12
- Ta fosforskärmen från exponerings kassetter, och använd en variabel läge kameran för att läsa fosforskärmen och generera bilder för att visa [14 C] -IAP upptag för hjärnan skivor.
3. Dataanalys
- Efter steg 2.9.4, justera bilder med hjälp av Statistiska Parametrisk Mapping (SPM) och ImageJ programvara. Rekonstruera alla bilder med hjälp av serie koronala sektioner. Smidig och normalisera bilder enligt en referensråtthjärna modell.12, 13
- För kvantitativa bedömningar, mäta regionen av intresse (ROI) i hjärnan bilder med hjälp av ImageJ programvara för att bestämma pixelsignalstyrkan, och använda statistisk mjukvara för analys. 12, 13
- För att undersöka sambanden mellan olika hjärnkärnor, använder MATLAB korrelationsanalys programvara för att visa radioaktivitet förhållandet i en interkorrelationsmatris, och visualisera matriser som färgkartor. Slutligen använder Pajek programvara för nätverksanalys. 12, 13
- Använd 2 × 5 tvåvägs blandad variansanalys (ANOVA), med grupp och veckor som faktorer, att jämföra varaktigheten av värmetålighet i plantar testet och mekanisk kraft i von Frey-test i sken och cpsp grupper vid baslinjen och veckor 1 - 5. Använd en 2 × 31 tvåvägs ANOVA för att mäta radioaktiviteten förhållandet enligt grupp och hjärnområde. När det är lämpligt, genomföra Tukeys Ärligt signifikant skillnad (HSD) post hoc test. calBeräkna om Pearson korrelationskoefficienter att bedöma korrelationer mellan alla valda områden i hjärnan i bluff och cpsp grupper.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1A visar den experimentella tidslinjen. Råttor tilldelas bluff och cpsp grupper för de beteendetester (dvs von Frey-test och plantar test). Den första dagen av experimentet fungerade som baslinje, och tester upprepades vid vecka 1 - 5. PE-50 kateterisering utfördes i den yttre halsvenen vid vecka 4. Heparin (20 U / ml, 0,1 ml / dag) injicerades under vecka 4 och 5. Fem minuter efter heparininjektion, [14 C] -IAP injicerades, följt 10 sek senare av en överdos av anestetikum för uppoffring. En minut senare, råttorna dekapite, och oktober-inbäddade hjärnan skivor gjordes. Figur 1B visar råttorna i en kirurgisk stereotaxisk anordning, kanyl implantationsställen, och histologisk karta över hjärnan skivor baserade på en råtthjärna atlas. Figur 1C visar det högra hålet i den externa jugularvenen i rött, placeringen av PE-50 slang, ochslutliga experimentuppställning.
Figur 2A visar hjärnan skivor som exponerats i kassetterna. Fosforskärmen analyserades med användning av en variabel-mode imager. Prov och standarddata för hjärnan skivor analyserades sedan. Figur 2B visar standardautoradiografiska kurvor. Den vänstra panelen visar förhållandet mellan bildintensiteten (pixel / mm 2) och radioaktivitetsräkningar per minut (CPM), vilket ger den följande förutsagda linjära ekvation: Y = 44.542X + 196,24. Den högra panelen visar att upplösning (pixel / mm 2) förstärktes som exponeringstiden ökade (i dagar). Den optimala upplösning observerades på dag fyra.
Figur 3A visar experimentuppställning för plantar test, som bedömer termisk smärta. Den cpsp gruppen uppvisade en signifikant minskning i tröskeltasstillbakadragande
Figur 4A visar ROI i en anatomisk atlas. ROI-analys visade att aktivering av den infralimbic cortex (IL), prelimbic cortex (PRL) och cingulate cortex område 1 (CG1) var signifikant högre i den cpsp gruppen i den högra hjärnhalvan, med undantag för den VB (Figur 4B) .
Skillnader i interregionala korrelationer av rCBF observerades mellan cpsp och skengrupper i den högra hjärnhalvan (Figur 4C). Matrisen (Fishers Z-statistics) av alla regioner analyserades med hjälp av Pearsons korrelation. Figur 4C visar skillnader i interregionala korrelationer av medverkan av neurala substrat i cpsp gruppen. Smärtrelaterade neurala substrat bestämdes genom att analysera skillnader i interregionala korrelationer rCBF. De röda linjerna i figur 4D indikerar betydande positiva korrelationer och blå linjer indikerar betydande negativa korrelationer.
Figur 1. Experimentell Tidslinje av lesionering ventrala Basal Nucleus (VB) av Thalamus att inducera Central Post-Stroke Pain (cpsp) och injektion [14 C] -IAP. (A) Ventral basala kärnor lesioner att inducera cpsp för de beteende bedömningar och injektioner av [14 C] -IAP att mäta aktiveringen av neurala substrat som är involverade i cpsp. (B) Placering av VB. (C) [14 C] -IAP injektioner. Skalstreck = 1 mm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Standard Autoradiografiska kurvor. (A) Prov och standardkurvor erhölls för olika exponeringstider och bildupplösningar. (B) Standardkurva av bildintensitet och CPM och standardkurva av exponeringstid och upplösning. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
figur 3. Plantar Test (Thermal smärta) och von Frey-test (Mechanical Pain) utfördes i Sham och cpsp grupper vid baslinjen och vecka 1 - 5. (A) cpsp råttor uppvisade en lägre tasstillbakadragande tröskel i plantar test ( dvs mindre värmetålighet) jämfört med sken råttor, indikerar större termisk smärta. (B) cpsp råttor uppvisade en lägre tasstillbakadragande tröskel i von Frey-test jämfört med sken råttor, vilket indikerar större mekanisk smärta. SEM, standardfel av medelvärdet. Gröna asterisk (*) indikerar en signifikant skillnad jämfört med skengruppen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. ROI Analys och förhållandet mellan Inter-REGIONALT Samband mellan neurala substrat inblandade i cpsp. (A) hjärnområden bestämdes och analyserats av formuleringen förhållandet. (B) ROI i IL, PRL, CG1 och VB var signifikant annorlunda i den högra hjärnhalvan. (C) Analys av rCBF i de utvalda områden i hjärnan. (D) Inter-regionala korrelationer mellan områden i hjärnan. klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I beteendetester, uppvisade cpsp gruppen minskningar av tröskeln tassen tillbakadragande i värmesmärttestet och mekanisk kraft i von Frey-test vid baslinjen och vecka 1 -. 5. Resultaten överensstämde med en tidigare studie 14
Den [14 C] -IAP metod förlitar sig på pixelintensiteten av hjärnbilder för kvantitativ analys av olika hjärnan skivor. Att utvärdera de data i hjärnan bilder, var pixelsignalintensitet definierats. I den aktuella studien var miljöbakgrundssignalen definieras som 25,811-46,979 CPM. Signalen från den [14 C] -IAP 0,001 pCi filterpapper definierades som 42 CPM. Pixelsignalintensiteten var <0,001 pCi, som fungerar som bakgrundsintensiteten. Pixelintensitet fem filterpapperen bestämdes för 0,001, 0,01, 0,1, och 10 ^ Ci, som tjänar som pixeln gråskala för var och en av hjärnan bilder. [14 C] -IAP radioaktivitet visade apositive korrelation med pixelintensiteten och radioaktivitet räknas på en logaritmisk skala. Därför kan ovanstående procedur följas för kalibrering av [14 C] -IAP radioaktivitet till pixel intensitet.
När du utför [14 C] -IAP försöksprotokoll, vissa punkter måste beaktas. Till exempel, kan den yttre halsvenen bli blockerade, och praktiker måste se till öppenheten hos PE-50 slang med heparin varje dag. Dessutom, kan placeringen av lesionen platserna ibland inte höra hemma, vilket resulterar i obetydlig cpsp symptom. Innan injektionerna måste riktigheten i injektionsstället och platser i förhållande till bregma bekräftas. Vinkeln och volymen för varje injektion måste också bestämmas noggrant.
Begränsningar av hjärnbilder måste också övervägas. Snedvridning av hjärnan bilder kan uppstå efter att exponera hjärnan skivor i kassetterna till en fosforskärm. Hjärnan imaGES måste normaliseras till en standard hjärnan atlas med hjälp av en bildanalysprogram för att undvika eventuella störningar i hjärnan bilder. Dessutom kan olika isotoper ge olika resultat på grund av deras olika mekanismer och åtgärder. Till exempel metaboliten och verkningsmekanismen för [18 F] -fludeoxyglucose (FDG) liknar glukos. Därför är [18 F] -FDG bilder visade sig vara liknande den reaktionsväg glukosmetabolismen. Dessutom är halveringstiden för [18 F] -FDG kort; därför måste det kombineras med PET för att generera bilderna. [201 TI] lämpar sig för att bedöma myocardial blodflöde perfusion med hjälp av single-photon emission computed tomography. Därför är det viktigt att välja en lämplig isotop för bedömning av hjärnan bilder.
Tillämpningen av [14 C] -IAP metod för att bedöma hjärnaktivering i cpsp är billigare än andra hjärnavbildningstekniker (t.ex. PET och fMRI). Than [14 C] -IAP metod lämpar sig för spontant förekommande händelser, men det kan inte användas för kartläggning av hjärnan i realtid. Metoden skiljer sig från andra hjärnkartläggningstekniker, såsom PET och fMRI. Vidare kan föreliggande [14 C] -IAP protokoll mäta subtila förändringar i rCBF i något patologiskt tillstånd.
Den [14 C] -IAP metod kan användas för att testa konventionella smärtbanorna, såsom den spinotalamiska vägarna (STT), mediala talamus (MT) -ACC och mPFC-amygdala neurala kretsar. Aktiveringen av var och en av dessa vägar effekter de andras. Aktiveringen av dessa vägar i cpsp har i detalj i vår tidigare papper. 12
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Den aktuella studien stöddes av National Science Council bidrag till Dr Bai-Chuang Shyu (NSC 99-2320-B-001-016-My3, NSC 100-2311-B-001-003-My3 och NSC 102-2320- B-001-026-My3). Detta arbete utfördes vid Institutet för biomedicin, som fått medel från Academia Sinica.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthetic: | |||
| Isoflurane | Halocarbon Products Corporation | NDC 12164-002-25 | 4% |
| Surgery | |||
| homeothermic blanket system | Harvard Apparatus | Model 50–7079 | body temperature were maintained at 36.5 - 37.5 °C. |
| 10 µl micro syringe | Hamilton | 80008, Model 1701SN | injected with collagenase |
| polyethylene-50 tubing | Becton, Dickinson and Company | 427411 | catheterized into external jugular vein |
| 1 c.c syringe | Terumo Medical Products | SS-01T | injected with 14C-IAP and saline. |
| saline (Sodium Chloride 0.9 gm) | Taiwan Biotech Co., LTD. | 100-130-0201 | To flush the tube |
| Drugs | |||
| type 4 collagenase | Sigma | C5138-500MG | 0.125 U |
| Gentamicin | Sigma | G1264-250MG | 6 mg/kg |
| Heparin | Sigma | H9399 | 20 U/ml; 0.1 ml/day |
| 14C-iodoantipyrine (IAP) | PerkinElmer | NEC712 | 125 mCi/kg in 300 ml of 0.9% saline |
| Potassium chloride | Merck | 1.04936.1000 | 3 M |
| Behavior system: | |||
| von Frey esthesiometer | Fabrication Enterprises, Inc. | Baseline Tactile Monofilaments 12-1666 | mechanical hyperalgesia was assessed by measuring the withdrawal response to a mechanical stimulus |
| plantar test apparatus | IITC Life Science | IITC 390G Plantar Test | Thermal hyperalgesia was assessed by measuring the hind paw withdrawal latency in response to radiant heat. |
| Brain slice: | |||
| Optimal Cutting Temperature compound | Sakura Fintek Inc | 4583 | embedded the brain |
| dry ice | frozen in dry ice/methylbutane (approximately −55 °C) | ||
| methylbutane | Sigma | M32631-1L | frozen in dry ice/methylbutane (approximately −55 °C) |
| Cryostat | Leica Biosystems Nussloch GmbH, Germany | Leica CM1850 | Coronal brain slice were sectioned on this machine. |
| Data analyze | |||
| exposure cassettes with a phosphor screen | Amersham Biosciences | 20 cm x 25 cm | The slices were dried on glass slides and placed alongside five standard filter papers with graded radioactivity. All of the slides were exposed to the cassettes at −20 °C. |
| γ-counter | Beckman Coulter | Beckman LS 6500 Liquid Scintillation Counter | To measure the radioactivity count of the filter papers. |
| Typhoon 9410 Variable Mode Imager | GMI, Inc. | WS-S9410 | To read phosphor screen which was exposed by brain slice |
| Statistical Parametric Mapping (SPM) | Wellcome Centre for Neuroimaging | version 8 | all of the brains were averaged to create the final brain template. To determine significant differences between the images in these two groups, the images were derived by subtracting the sham group from the CPSP group. |
| ImageJ | http://imagej.nih.gov/ij | version 1.46 | Adjacent sections were aligned both manually and using Stack- Reg, an automated pixel-based registration algorithm in ImageJ software. All of the original three-dimensionally reconstructed brains were smoothed and normalized to the reference rat brain model. |
| Matlab | MathWorks | version 2009b | used Pearson correlation coefficients to examine the relationships between the CPSP and sham groups. An inter-regional correlation matrix was calculated across animals from each group. |
| Pajek | http://Pajek.imfm.si/ | version 3.06 | Graphical theoretical analysis was performed on networks defined by the above correlation matrices using Pajek software. |
References
- Finnerup, N. B. A review of central neuropathic pain states. Curr Opin Anaesthesiol. 21 (5), 586-589 (2008).
- Andersen, G., Vestergaard, K., Ingeman-Nielsen, M., Jensen, T. S.
- Chen, B., Stitik, T. P., Foye, P. M., Nadler, S. F., DeLisa, J. A. Central post-stroke pain syndrome: yet another use for gabapentin? Am J Phys Med Rehabil. 81 (9), 718-720 (2002).
- Greenspan, J. D., Ohara, S., Sarlani, E., Lenz, F. A. Allodynia in patients with post-stroke central pain (CPSP) studied by statistical quantitative sensory testing within individuals. Pain. 109 (3), 357-366 (2004).
- Klit, H., Finnerup, N. B., Jensen, T. S. Central post-stroke pain: clinical characteristics, pathophysiology, and management. Lancet Neurol. 8 (9), 857-868 (2009).
- Kumar, G., Soni, C. R. Central post-stroke pain: current evidence. J Neurol Sci. 284 (1-2), 10-17 (2009).
- Denk, F., McMahon, S. B., Tracey, I.
- Ji, G., et al. Cognitive impairment in pain through amygdala-driven prefrontal cortical deactivation. J Neurosci. 30 (15), 5451-5464 (2010).
- Jungehulsing, G. J., et al. Levetiracetam in patients with central neuropathic post-stroke pain: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Eur J Neurol. 20 (2), 331-337 (2013).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J Neurosci Methods. 53, 55-63 (1994).
- Jay, T. M., Luciqnani, G., Crane, A. M., Jehle, J., Sokoloff, L. Measurement of local cerebral blood flow with [14C]iodoantipyrine in the mouse. J Cereb Blood Flow Metab. 8 (1), 121-129 (1988).
- Lu, H. C., Chang, W. J., Kuan, Y. H., Huang, A. C., Shyu, B. C. A [14C]iodoantipyrine study of inter-regional correlations of neural substrates following central post-stroke pain in rats. Mol Pain. 11 (1), (2015).
- Wang, Z., et al. Functional brain activation during retrieval of visceral pain-conditioned passive avoidance in the rat. Pain. 152, 2746-2756 (2011).
- Wasserman, J. K., Koeberle, P. D. Development and characterization of a hemorrhagic rat model of central post-stroke pain. Neuroscience. 161 (1), 173-183 (2009).
![Autoradiografiska Mätningar av [<sup> 14</sup> C] -Iodoantipyrine i råtthjärna Efter Central Post-Stroke Pain](https://cloudfront.jove.com/CDNSource/teasers/53947.jpg)
