Summary
Hier präsentieren wir ein Protokoll, um Blutproben von der Ratte subclavia Vene zu sammeln.
Abstract
Blutentnahme mit genügend Blutvolumen ist unerlässlich im Tierversuch. Blutentnahme aus der Vene Schweif von Ratten ist beliebt und weniger Stress im Vergleich zu anderen aggressiveren Methoden wie Retro-Orbital Plexus Kollektion probieren. Allerdings ist dieses Blut Erfassungsmethode manchmal durch eine unbefriedigende Erfolgsquote begrenzt. Hier stellen wir eine Methode für die Blutentnahme durch die Vene subclavia Punktion. Die subclavia Vene befindet sich direkt unter das Schlüsselbein und diese Ader ist groß genug, um das Volumen der Blutentnahme zu erfüllen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass diese Methode sicher und anwendbar für Sammlung Blutabnahme mit der benötigten Blutvolumen. Blutentnahme durch die Vene subclavia Punktion könnte als eine alternative Blut Erfassungsmethode bei fehlgeschlagenen Schweif Vene Blut Stichproben bei Ratten dienen.
Introduction
Blutentnahme ist in Tierversuchen unerlässlich. Die Ziel-Adern für die Blutentnahme gehören die Retro-Orbital-Plexus, die Halsschlagader der Stammvenen, Tail Blutgefäße und die Halsschlagader1,2,3,4. Manchmal könnte Blut der abdominalen Aorta, Vena Cava oder sogar das Herz5,6,7entnommen werden. Bei solchen Gelegenheiten die Tiere geopfert werden müssen und nicht für nachfolgende Beobachtung verwendet werden; so, mit diesen Methoden sind weniger in der täglichen experimentelle Arbeit. Blutentnahme aus der Vene Schweif von Ratten ist beliebt und weniger Stress im Vergleich zu den oben genannten Methoden8.
Blutentnahme aus der Vene Schweif ist jedoch manchmal durch eine unbefriedigende Erfolgsquote begrenzt. Gelegentlich ist es auch schwierig, genügend Blutvolumen von dieser Methode zu erhalten. Die subclavia Vene ist groß genug und befindet sich direkt unter dem Schlüsselbein-Knochen, läßt Vene subclavia Punktion sich eine alternative Methode für das um Blut zu probieren, wenn routinemäßige Blut Erhebungsmethoden nicht erfolgreich sind. Hier stellen wir eine Methode der Blutentnahme mittels Vene subclavia Punktion bei Ratten.
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Protocol
Diese Studie wurde von der zentralen Ethikkommission South University für Animal Research aus dem zweiten Xiangya Krankenhaus (Changsha, China) genehmigt. Das Manuskript wurde nach Ankunft vorbereitet (Animal Research: Berichterstattung von In Vivo Experimente) Leitlinien-9.
1. Material und Tier Vorbereitung
- Benötigte Materialien vorbereiten: Klebeband, Epilieren Agent, 75 % Ethanol, Blutsammelröhrchen, 2,5 mL Spritze mit Nadel (24 G, 0,6 x 25 mm), Haar Rasierer, elektronische Waage und Messgerät (siehe Tabelle der Materialien) verbunden.
- Verwenden Sie 20 Sprague-Dawley (SD) Ratten, im Alter von 8 bis 10 Wochen und einem Gewicht von 153-200 g (siehe Tabelle der Materialien). Pflegen Sie gemäß dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren10Ratten.
- Haus Ratten unter Standardbedingungen mit freiem Zugang zu Nahrungsmitteln und Trinkwasser. Halten sie in 530 cm2 Käfige mit Holz-Rasur-Bettwäsche (2 Ratten pro Käfig). Halten Sie Tiere in einer temperaturgesteuerten Raumtemperatur bei etwa 25 ° C.
- Induzieren Vollnarkose (Natrium-Pentobarbital 40 mg/kg) bei allen Tieren durch intraperitoneale Injektion vor der Vene subclavia Punktion.
- Legen Sie die Ratte in Rückenlage. Befestigen Sie den hinteren Gliedmaßen in einer bequemen Position und befestigen Sie der oberen Extremität parallel zur Körperachse direkt neben dem Stamm.
Hinweis: Keine mechanische Lüftung benötigt für dieses Verfahren (Abbildung 1). - Reinigen Sie beide Seiten des Raumes Infraclavicular Fell entfernen (mit Haar Rasierer und Epilieren Agent, siehe Tabelle of Materials) und sichtbaren Schmutz. Wischen Sie den Hals und thorakalen Haut mit 75 % Ethanol. Halten Sie den Bereich für die Punktion, sauber und trocken mit Gaze.
2. Blut Inkasso
Hinweis: Beide Seiten der subclavia Ader eignen sich für Punktion und hier wählen wir die Rechte Seite für Punktion. Die Lage und Richtung des rechten Schlüsselbeins werden durch die Betreiber linken Daumen (Abbildung 2) identifiziert. Suprasternal Gruben sind sanft mit dem Zeigefinger berührt, als die Suprasternal Gruben geht in die Richtung der Nadel (Abbildung 2).
- Spülen einer sterilen 2,5 mL Spritze mit Heparin-Lösung (10 IU/mL).
- Suchen Sie die Punktionsstelle 0,5 mm kaudalen zur äußeren Umgebung: 1/3 des rechten Schlüsselbeins (Abbildung 3). Verschieben Sie die Spritze sanft in die Haut an der Einstichstelle. Sobald die Nadel die Haut Infraclavicular tritt, gelten Sie Unterdruck mit Rechten des Betreibers (Abbildung 4).
Hinweis: Die durchschnittliche und maximale Blutvolumen sind 1,0 mL 1,4 mL bzw.. Die Richtung der Nadel sollte befindet sich in Richtung der Suprasternal Gruben und fast parallel zum Schlüsselbein nur hintere darauf. In der Regel kann der subclavia Vene erreicht werden, durch die Nadel ca. 2 mm in diese Richtung. Sobald die Nadel die Vene gelangt, wird Blut die Spritze Unterdruck.- Unterdruck bis genügend Volumen des Bluts gezeichnet wird (Abbildung 5).
- Wenn die Blutentnahme subclavia Vene nicht erfolgreich ist, ziehen Sie die Nadel heraus zum subkutanen Bereich und passen Sie die Richtung der Nadel leicht innen auf dem Brustbein.
- Wenn drei Versuche fehlschlagen, vermeiden die subclavia Vene von der gleichen Seite und verwenden der kontralateralen Seite für die Blutabnahme.
- Entfernen Sie nach der Blutentnahme die Punktionsnadel, und üben Sie Druck auf die Punktionsstelle für 1-2 Minuten, um Blutungen zu stoppen.
Hinweis: Der Druck muss sehr sanft zu ersticken zu verhindern.
3. Blut Probe Verarbeitung
- Übertragen Sie die Blutprobe in ein Antikoagulans-beschichtetem Vakuumröhre (mit EDTA) und Zentrifuge für 10 min bei 1600 X g Plasma zu sammeln.
- Aspirieren des Überstands in ein sauberes Röhrchen und Store bei-80 ° C (Abbildung 6).
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Representative Results
Insgesamt 20 SD-Ratten (männliche n = 10, weibliche n = 10) wurden hier verwendet. Blut Collectionwas durchgeführt, indem qualifizierte Betreiber, die mehr als 20 Blut Kostproben aus der subclavia Vene an Ratten durchgeführt haben und die Anfänger-Betreiber, die keine Vene subclavia Punktion haben Erfahrung in Ratten oder andere Tiere. Vor Operationen beobachtete Anfänger mindestens 3 Verfahren durch qualifiziertes Personal durchgeführt.
Die Blutabnahme gelungen, 17 Ratten über den rechten subclavia Vene Zugang. Dieses Verfahren nicht in 3 Ratten (1 in der qualifizierten Gruppe) und 2 in der Anfängergruppe, und Blutabnahme wurde erfolgreich durch die linken subclavia Vene Zugriffe in diese 3 Ratten. Die Lautstärke des Zeit-Kurs und Blut gesammelt für jeweils sind in Tabelle 1dargestellt. Die Erfolgsquote war vergleichbar der Anfängergruppe (80 %) und die qualifizierte Gruppe (90 %, p = 0.531). Die Erfolgsquote war 100 % für beide Gruppen, wenn die zusätzlichen linken subclavia Vene Zugänge bei den 3 Ratten einschließlich. Zwei tailed Student t-Test zeigte, dass es keinen signifikanten Unterschied auf Zeitaufwand zwischen Anfänger und erfahrene Gruppe (102,1 ± 14,9 s vs. 84.3 ± 9,7 s, p = 0,33, Abbildung 7). Keine schwere Komplikationen traten in allen Verfahren z. B. Pneumothorax, Hemopneumothorax oder größere Blutungen während oder nach Operation. Alle Tiere überlebt und erholte sich innerhalb von 30 Minuten nach der Blutabnahme.
Um die Schwierigkeiten beim Erlernen der Punktion Verfahren zu demonstrieren, verglichen wir weiter die Anzahl der Auszahlungen zwischen erfahrenen und Anfänger Gruppen. Wie aus Tabelle 2hervorgeht, die durchschnittliche Anzahl der Auszahlungen in der qualifizierten Gruppe ist etwas weniger als die Anfängergruppe (1,6 ±0.3 vs. 2,5 ±0.4), aber es gibt keine statistische Signifikanz (p = 0.0913).
Abbildung 1 : Position der Ratten. Die Ratten sind in Rückenlage gelegt, und die oberen Gliedmaßen sind Parallel zur Körperachse, gleich neben dem Stamm fixiert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 : Die Oberfläche Symbole von Ratten zu identifizieren. (A) den linken Daumen des Betreibers ist auf der rechten Schlüsselbein zu identifizieren, die Lage und die Auswahl an diesem Knochen; (B) die Suprasternal Gruben werden sanft mit dem Zeigefinger berührt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 : Position der Punktion. Die Punktionsstelle ist befindet sich auf der äußeren 1/3 Seite von der rechten Schlüsselbein kaudalen 0,5 mm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4 : In der Spritze Unterdruck bilden. Sobald die Nadel die Infraclavicular Haut gelangt, bewegen die Finger der rechten Hand um Unterdruck in der Spritze zu erstellen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 5 : Rückzug von Blut in die Spritze. Wenn die Nadel die subclavia Vene eingibt, wird Blut die Spritze Unterdruck. Der Unterdruck wird gehalten, bis genug Blut gewonnen wird. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 6 : Plasma Extraktion nach zentrifugieren. Nach dem Zentrifugieren, ist das Blut in Plasma und Zellen getrennt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 7 : Die Time-Kurs und Erfolg-Rate zwischen den verschiedenen Gruppen. Dieses Diagramm zeigt keine signifikanten Unterschiede in der Zeit (linken) oder Erfolg-Rate (rechte Abbildung) zwischen der qualifizierten Gruppe und die Anfängergruppe. Der Zeit-Kurs in der Anfängergruppe und die qualifizierte Gruppe sind 102,1 ± 14,9 s 84.3 ± 9,7 s, bzw. p = 0,33 zwischen Gruppen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 8 : Die Anatomie der subclavia Vene. Die subclavia Vene befindet sich nur posterior und kaudalen um das Schlüsselbein. Es verbindet sich mit der inneren Halsschlagader zu bilden die Brachiocephalic Vene und fließt in super Vena Cava unterhalb der Suprasternal-Gruben. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
| qualifizierte Gruppe | Anfängergruppe | |||||||||
| Geschlecht | Gewicht (g) | Blutvolumen (mL) | Zeitlicher Verlauf (S) | Geschlecht | Gewicht (g) | Blutvolumen (mL) | Zeitlicher Verlauf (S) | |||
| S1 | Männlich | 153 | 1.6 | 70 | B1 | Männlich | 149 | 1.6 | 72 | |
| S2 | Männlich | 168 | 1.6 | 60 | B2 | Männlich | 158 | 1.6 | 68 | |
| S3 | Weiblich | 183 | 1.6 | 75 | B3 | Weiblich | 190 | 1.6 | 83 | |
| S4 | Weiblich | 170 | 1.6 | 74 | B4 | Weiblich | 160 | 1.6 | 77 | |
| S5 | Weiblich | 159 | 1.6 | 65 | B5 | Weiblich | 153 | 1.6 | 200 | |
| S6 | Männlich | 200 | 1.6 | 83 | B6 | Männlich | 187 | 1.6 | 92 | |
| S7 | Männlich | 178 | 1.6 | 86 | B7 | Männlich | 164 | 1.6 | 99 | |
| S8 | Männlich | 187 | 1.6 | 168 | B8 | Männlich | 200 | 1.6 | 82 | |
| S9 | Weiblich | 192 | 1.6 | 83 | B9 | Weiblich | 198 | 1.6 | 70 | |
| S10 | Weiblich | 157 | 1.6 | 79 | B10 | Weiblich | 175 | 1.6 | 178 | |
Tabelle 1: Das Blut Volumen und Zeit-Kurs von Punktion bis eine fertige Blutentnahme. S: qualifizierte Gruppe; B: Anfänger.
| Gruppe | n | Meine | SE | 95 % conf.-Intervall | |
| B | 10 | 2.5 | 0,4 | 1.59 | 3.41 |
| S | 10 | 1.6 | 0,3 | 0.91 | 2.29 |
Tabelle 2: Die Anzahl der Auszahlungen zwischen den beiden Gruppen. B: Anfänger; S: qualifizierte Gruppe. p = 0.0913
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Discussion
Hier stellen wir eine alternative Methode für die Extraktion von Blut aus der Vene subclavia und wir zeigen, dass diese Methode möglich, sichere und anwendbar für die Blutentnahme bei Ratten. Diese Methode wird von der subclavia Vene Punktion im Herzschrittmacher Blei Implantation für Patienten11abgeleitet. Die subclavia Vene liegt nur posterior und kaudalen, das Schlüsselbein und ist eine Fortsetzung der axillären Ader. Er verläuft von der äußeren Grenze der ersten Rippe auf den medialen Rand des vorderen Scalene Muskel12. Von hier, aus es verbindet sich mit inneren Halsschlagader, die Brachiocephalic Vene zu bilden und fließt in super Vena Cava unterhalb Suprasternal Gruben (Abbildung 8). Das Schlüsselbein ist leicht zu erkennen und es gibt eine klare anatomische Beziehung zwischen der subclavia Vene und das Schlüsselbein. Hier haben wir diese klinische Fertigkeit zu Tierversuchen angewandt. Aufgrund der unterschiedlichen Ausrichtung der oberen Extremität bei Menschen und Ratten ist der oberen Extremität platziert direkt neben den Stamm während des Verfahrens, den Raum um das Schlüsselbein kaudalen verfügbar zu machen, was die Punktion (Abbildung 1) erleichtert.
Die subclavia Ader ist viel größer als die Rute Vene. Daher ist es einfacher, genügend Blut aus der Vene subclavia als von der Rute Vene zu bekommen. Die Gesamtstichprobe Lautstärke konnte 10 % der gesamten zirkulierenden Blutvolumen jedes Mal1erreichen. Wenn herkömmliche Heck Vene Blutentnahme oder eine andere Route ausfällt, können Forscher die Vene subclavia Punktion betrachten. Vollnarkose ist für dieses Verfahren erforderlich, und dies ist eine wichtige Einschränkung dieses Verfahrens. Hier verwenden wir Pentobarbital-Natrium für die Vollnarkose. Im Vergleich zu anderen Agenten, Pentobarbital-Natrium ist einfach zu injizieren, und braucht keine spezielle Instrumente. Tsukamoto Et Al. berichteten, dass Isofluran Inhalation hatte die stabilste SpO2 als andere Agenten und kurzen Wiederherstellungszeiten. In Zentren mit Inhalation Ausrüstung kann Isofluran13betrachtet werden. Darüber, wie der subclavia-Ader in der Nähe der Brusthöhle befindet, müssen wir vorsichtig, schwere Verfahren-Komplikationen wie Pneumothorax und Hemopneumothorax zu verhindern sein. Die Richtung der Nadel muss sorgfältig gerichtet sein, um diese Komplikationen zu vermeiden. Hier wird die Nadel immer parallel zum Schlüsselbein und nur nach es und zog sanft in Richtung der Suprasternal Gruben positioniert. Die Ergebnisse zeigen, dass die Verwendung von über Technik kann mögliche Komplikationen vermeiden. Vermeiden Sie jede abwärts Richtung der Nadel in Richtung der Brusthöhle in diesem Verfahren. Darüber hinaus ist die Tiefe der subclavia Ader immer ca. 2 mm aus der Punktionsstelle aufzubewahren.
Gelegentlich können Versuche von einer Seite schlagen fehl. Wir empfehlen nicht mehr als 3 Versuche von der gleichen Seite. Verwenden Sie unter solchen Bedingungen die andere Seite für Punktion, die die Erfolgsrate bei der Blutabnahme verbessern kann. Um die Machbarkeit unserer Methode weiter zu verdeutlichen, haben wir die Erfolgsquote und Zeitaufwand zwischen einem Anfänger-Gruppe und eine qualifizierte Gruppe getestet. Interessanterweise gab es zwischen diesen Gruppen keine statistische Signifikanz (p = 0,33), die bewiesen der Umsetzbarkeit dieser neu entwickelten Methode.
Wie hier erläutert, ist die wichtigste Einschränkung die Erfolgsquote auf der einen Seite. Wenn die Prozedur fehlschlägt, muss die andere Seite der subclavia Ader berücksichtigt werden. Allgemeiner Anästhesie dient in diesem Verfahren und die Recovery-Zeit im Durchschnitt ca. 30 min. mit Pentobarbital-Natrium. Isofluran Inhalation Anästhesie hat eine viel kürzere Erholungszeit und die Annahme neuer Methoden der Anästhesie bei der Reduzierung der Dauer des Verfahrens hilfreich sein könnte. Wir zeigen, dass diese Methode für Ratten gilt, aber wir nicht, seine Anwendbarkeit auf kleinere Tiere wie Mäuse getestet haben.
Zusammenfassend zeigen die Ergebnisse der Studie, dass die Vene subclavia Punktion Methode zur Blutentnahme Probe sicher und machbar in Ratten. Diese Methode ist besonders wertvoll, wenn große Mengen an Blut benötigt werden. Diese Methode ist eine optimale Alternative, wenn konventionelle Blutentnahme Verfahren Versagen.
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Disclosures
Diese Arbeit wurde durch den Zuschuss aus dem National Natural Science Foundation von China Nr. 81670269, Nr. 81500355 und Nr. 81500226 unterstützt.
Acknowledgments
Keiner erklärt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| rats | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | ||
| stastical software | SPSS Statistics 17 | ||
| epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China) | ||
| 2.5 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China) | ||
| hair shaver | Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China) | ||
| adhesive tape | 3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany) | ||
| Pentobarbital sodium | Merck | ||
| 75% ethanol | Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | ||
| blood collection tube | Hubei Jinxing Technology&Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml) | ||
| electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China) | ||
| canvas gloves | for anethesia | ||
| hepain | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU) | ||
| physical saline | Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml) |
References
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