The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Department of Physiology, University of Texas Health Science Center at San Antonio (UTHSCSA)
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Rossano, A. J., Macleod, G. T. Loading Drosophila Nerve Terminals with Calcium Indicators. J. Vis. Exp. (6), e250, doi:10.3791/250 (2007).
कैल्शियम तंत्रिका तंत्र में कई भूमिका निभाता है लेकिन कोई भी neurotransmitter रिहाई के लिए ट्रिगर के रूप में की तुलना में अधिक प्रभावशाली है, और कोई भी synaptic plasticity है कि सीखने और स्मृति का समर्थन करता है के लिए आवश्यक दूत के रूप में की तुलना में अधिक गहरा है. आगे Ca 2 के आणविक आधार स्पष्ट + निर्भर synaptic तंत्र, एक मॉडल प्रणाली की आवश्यकता है कि दोनों आनुवंशिक निंदनीय और physiologically से सुलभ है. ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर इस तरह के एक मॉडल उपलब्ध कराता है. इस प्रणाली में, अनुवांशिक इनकोडिंग फ्लोरोसेंट संकेतक तंत्रिका टर्मिनलों में Ca 2 + परिवर्तन का पता लगाने के लिए उपलब्ध हैं. हालांकि, इन संकेतकों 2 Ca के लिए संवेदनशीलता सीमित है + और अक्सर एक गैर रेखीय प्रतिक्रिया दिखा. सिंथेटिक फ्लोरोसेंट संकेतक बेहतर तेजी Ca 2 + तंत्रिका गतिविधि के साथ जुड़े परिवर्तन को मापने के लिए उपयुक्त हैं. यहाँ हम ड्रोसोफिला लार्वा में रहते तंत्रिका टर्मिनलों में dextran संयुग्मित सिंथेटिक Ca 2 + संकेतक लोड करने के लिए एक तकनीक का प्रदर्शन . सबसे पृथक नसों के साथ स्थैतिक बिजली निर्वहन कैसे से बचने के लिए, विस्तारित लोड हो रहा है अवधि के दौरान की तैयारी के स्वास्थ्य को बनाए रखने के जैसे है तकनीक की सफलता के लिए महत्वपूर्ण है, प्रोटोकॉल के उन पहलुओं पर विशेष जोर रखा है, और 2 Ca द्वारा प्रदान अक्षतंतु अस्तित्व को सुनिश्चित करने + कटे अक्षतंतु अंत की सील को बढ़ावा देने के लिए. निम्न आत्मीयता dextran संयुग्मित Ca 2 + fluo-4 और rhod जैसे संकेतक, उपलब्ध है जो एक उच्च संकेत से शोर अनुपात दिखाने जबकि न्यूनतम + गतिशीलता presynaptic 2 Ca में खलल न डालें . Dextran - संयुग्मन को रोकने Ca 2 + संकेतक mitochondria जैसे organelles में तनहा जा रहा में मदद करता है. लोड हो रहा तकनीक लार्वा भ्रूण, और वयस्कों के लिए समान रूप से लागू किया जा सकता है.
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| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma-Aldrich | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma-Aldrich | G1626 |
1. Macleod, G.T., Hegstrom-Wojtowicz, M., Charlton, M.P. & Atwood, H.L. Fast calcium signals in Drosophila motor neuron terminals. J. Neurophysiol. 88, 2659-2663 (2002).
2. Macleod, G.T., Suster, M.L., Charlton, M.P., Atwood, H.L. Single neuron activity in the Drosophila larval CNS detected with calcium indicators. J. Neurosci. Methods. 127, 167-178 (2003).
3. Macleod, G.T., Marin, L., Charlton, M.P., Atwood, H.L. Synaptic vesicles: test for a role in presynaptic calcium regulation. J. Neurosci. 24, 2496-2505 (2004).
4. Reiff, D.F., Thiel, P.R., Schuster, C.M. Differential regulation of active zone density during long-term strengthening of Drosophila neuromuscular junctions. J. Neurosci. 22, 9399-9409 (2002).
5. Reiff, D.F., Ihring, A., Guerrero, G., Isacoff, E.Y., Joesch, M., Nakai, J., Borst, A. In vivo performance of genetically encoded indicators of neural activity in flies. J. Neurosci. 25, 4766-4778 (2005).
With thanks
Eyal Gruntman
Cold Spring Harbor Labs, NY
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ReplyPosted by: AnonymousMay 26, 2009, 4:10 PM