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この記事では、ネガティブ染色電子顕微鏡(EM)を用いて生体高分子の三次元(3D)再構成を得るために標準的な方法を説明します。このプロトコルでは、我々はランダムな円錐形の傾斜の再構成法(RCT)を使用して中解像度でサッカロマイセスセレビシエエキソソーム複合体の立体構造を取得する方法について説明します。