Single Particle Electron Microscopy Reconstruction of the Exosome Complex Using the Random Conical Tilt Method

Xueqi Liu; Hong-Wei Wang

doi:10.3791/2574

랜덤 코니컬 틸트 메서드를 사용하여 Exosome 단지의 단일 입자의 전자 현미경의 재건

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Biology

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Single Particle Electron Microscopy Reconstruction of the Exosome Complex Using the Random Conical Tilt Method

랜덤 코니컬 틸트 메서드를 사용하여 Exosome 단지의 단일 입자의 전자 현미경의 재건

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12:10 min

March 28, 2011

DOI: 10.3791/2574-v

Xueqi Liu¹, Hong-Wei Wang¹

¹Molecular Biophysics and Biochemistry,Yale University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

이 문서는 부정적인 얼룩의 전자 현미경을 (EM)을 사용하여 생물 학적 macromolecules의 3 차원 (3D) 재건을하는 표준 방법을 설명합니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 임의의 원뿔 기울기 재건 방법 (RCT)을 사용하여 중간 해상도 Saccharomyces cerevisiae의 exosome의 복합의 3D 구조를 얻는 방법을 설명합니다.

다음 실험의 전반적인 목표는 무작위 원뿔 기울기 방법을 사용하여 엑소좀 복합체의 3차원 구조를 얻는 것입니다. 이것은 먼저 거룩한 탄소 그리드에 얇은 층의 탄소 필름을 증착하여 단백질 복합체와 염색에 대한 지지 기질을 두 번째 단계로 수행함으로써 달성됩니다. 표본과 얼룩은 그리드에 적용되어 표본을 중금속 염에 묻습니다.

그런 다음 전자 현미경을 수행하여 표본의 현미경 사진의 기울기 쌍을 얻습니다. 마지막으로, 무작위 원뿔 기울기 방법을 사용한 이미지 분석을 기반으로 엑소좀 복합체의 3차원 구조를 보여주는 결과를 얻습니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 무작위 원뿔 기울기 방법에 대한 표본을 잘 준비하는 것과 View에 따른 이미지 처리 절차가 어려운 경우가 있기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.

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