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 JoVE Biology

Micro-dissecção de cérebro de um rato para RNA ou Extração de Proteína da região específica do cérebro

1, 1, 1, 1, 1

1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

Article
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    Summary

    Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

    Date Published: 8/30/2007, Issue 7; doi: 10.3791/269

    Cite this Article

    Chiu, K., Lau, W. M., Lau, H. T., So, K., Chang, R. C. Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region. J. Vis. Exp. (7), e269, doi:10.3791/269 (2007).

    Abstract

    Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

    Protocol

    Passo 1

    Sacrificar o rato de acordo com protocolos estabelecidos. Remover o cérebro do crânio e lave-o em gelo frio DEPC tratados água Milli Q para remover qualquer vestígio de sangue de superfície.

    Passo 2

    Coloque no prato de metal frio. Cortar o cérebro bi meio em hemisfério direito e esquerdo.

    01-269_Figure

    Figura 1. As posições de corte do ponto de vista medial do hemisfério rato

    Passo 3

    Recolher o bulbo olfatório logo após o primeiro corte. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

    269_Figure-02

    Figura 2. Dissecção bulbo olfatório

    Passo 4

    Recolher o córtex frontal direito, após o segundo corte, usando uma lâmina e um Dumont No. 5 fórceps. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

    269_Figure-03

    Figura 3. Dissecção córtex frontal

    Passo 5

    Recolher o striatum (núcleo caudado) logo após o terceiro corte com a ajuda de duas pinças de Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

    269_Figure-04

    Figura 4. Estriado dissecção (núcleo caudado)

    Passo 6

    Para coletar o hipocampo, coloque o lado ventral do cérebro para cima e depois remover mesencéfalo para expor o hipocampo. Dissecar o hipocampo do córtex utilizando duas pinças Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

    269_Figure-05

    Figura 5. Dissecção hipocampo

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    Discussion

    Diferentes regiões do cérebro associada com diferentes doenças neurodegenerativas. Por exemplo, córtex frontal e striatum se relacionam com a doença de Parkinson, enquanto o hipocampo se relaciona com a doença de Alzheimer. Micro-dissecção precisa do cérebro que nos permite detectar as alterações mRNA e proteína na região de doentes com mais precisão.

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    Disclosures

    Os animais foram tratados de acordo com o protocolo para o uso de animais em pesquisa aprovada pelo Comitê sobre o Uso de Animais Vivos em Ensino e Pesquisa (CULATR) na Universidade de Hong Kong e de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para uso animal.

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Microscope Olympus Corporation
    Dissection tools Metal plate, forceps, blade, etc. Individually wrapped with aluminum foil and heated at 180oC for eight hours to eliminate RNase. Made ice cold before use.

    References

    1. Palkovits, M., 1998. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. New York: Elsevier, c.1988.

    2. Swanson, L.W., 2004. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. Elsevier Academic Press.

    Comments

    9 Comments

    thank u very much. good protocol
    Reply

    Posted by: AnonymousJanuary 8, 2009, 4:37 AM

    very nice and great
    Reply

    Posted by: AnonymousFebruary 11, 2009, 1:27 PM

    Approximately how much time/rat from sacrifice to remove the frontal cortex and the hippocampus?  Thank you.
    Reply

    Posted by: AnonymousFebruary 16, 2009, 10:59 AM

    Hi, can be done within 3 minutes. When you practice more, ² minutes will be enough.
    Reply

    Posted by: kin c.March 28, 2012, 9:28 PM

    Great, Thanks for your sharing̀²; maybe it's better to have more brain regions to dissect  
    Reply

    Posted by: AnonymousApril 1, 2009, 8:47 AM

    How dŒs this protocol change if we were to attempting to dissect the striatum of embryonic rats or mice for culture?
    Reply

    Posted by: AnonymousJuly 14, 2010, 1:59 PM

    Yeah nicely done. Although I am using mice this seems to work just fine for me as well.
    Reply

    Posted by: AnonymousMarch 28, 2012, 6:23 AM

    Thanks. I think this is just a demostration that we can dissect the brain into regions. When we deal with different parts, normally we go back to the atlas first (you can use the atlas listed in the reference). Then we try to identify the region in the brain samples.
    Reply

    Posted by: kin c.March 28, 2012, 9:26 PM

    Thanks. If we want to isolate some specific nuclei from brain to study them under microscope how we must do that?
    Reply

    Posted by: Jamal E.May 8, 2012, 2:10 PM

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