تنقية تقارب التكميل ثنائي الجزيئات لعزل بروتينين متفاعلين

لاكتشاف وعزل زوج من البروتينات المتفاعلة المحددة باستخدام تنقية تقارب التكميل ثنائي الجزيئات ، أضف زوجا من خليط البلازميدات ثنائية الجزيئات التكميلية - عامل التعدي في صفيحة مزرعة تحتوي على خلايا الثدييات.

يقوم بلازميد واحد بتشفير بروتين متفاعل واحد - بروتين الطعم - مدمج في جزء من البروتين الفلوري المراسل. يشفر البلازميد الآخر للبروتين المرتبط الآخر - بروتين الفريسة - المدمجة في الجزء التكميلي للبروتين الفلوري.

حضن. يسهل عامل التعدي امتصاص خلايا البلازميد. تعبر الخلايا المنقولة بنجاح عن البروتينات الموضعية لغشاء الخلية.

تعمل

تفاعلات بروتينات الطعم والفريسة على تقريب شظايا البروتين الفلوريسنت. يؤدي هذا إلى اندماج الشظايا وإعادة طيها ، مما يشكل البروتين الفلوري الوظيفي ، الذي يمكن تصور تألقه تحت المجهر الفلوري.

استبدل الوسائط بمخزن تحلل غير أيوني يحتوي على منظف لتعطيل الأغشية الخلوية ، وإطلاق بروتينات الاندماج. اجمع محللة الخلية في أنبوب. الطرد المركزي.

انقل المادة المطفية المحتوية على بروتين الاندماج إلى أنبوب جديد. أضف حبات الاغاروز المترافقة مع الجسم المضاد أحادي المجال الذي يستهدف البروتين الفلوري ، الجسم النانوي ، والذي يتعرف على حاتمة ثلاثية الأبعاد ويرتبط بها على البروتين الفلوري المطوي.

الطرد المركزي. أعد تعليق حبات الاغاروز المرتبطة ببروتين الاندماج في العازلة. تسخين لفصل برو