موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:08 دقيقة • July 8th, 2025
خذ أنابيب تحتوي على البلاعم المراسلة مع جين الفوسفاتيز القلوي الجنيني المفرز أو إنزيم SEAP تحت محفز محفز.
في أنبوب واحد ، أدخل جسما مضادا خاصا بالبلاعم المستقبل الشبيه بtoll-like Toll 2 أو TLR2 ، مما يؤدي إلى تحييد نشاطه.
في حالة أخرى ، أضف مثبطا لقمع إشارات TLR4. اترك الأنبوب الأخير دون علاج.
خذ شريحة مجمعة بطبقة ممتصة من الأنماط الجزيئية المرتبطة بالتلف أو DAMPs - البروتينات التي يتم إطلاقها أثناء نخر الخلية.
أضف البلاعم المعالجة وغير المعالجة في آبار منفصلة واحتضنها.
يرتبط TLR2 و TLR4 على البلاعم غير المعالجة ب DAMPs ، مما ينشط عوامل النسخ العامل النووي - kappa-B ، أو NF-κB ، والبروتين المنشط -1 ، أو AP-1.
تنتقل هذه إلى النواة وترتبط بمحفز SEAP ، مما يؤدي إلى تنظيم إنتاج SEAP ، الذي يتم إفرازه خارج الخلية.
انقل المادة الطافية المحتوية على SEAP إلى صفيحة دقيقة ذات ركيزة كروموجينيك.
يقومSEAP بتحلل الركيزة ، مما ينتج عنه منتج أرجواني أزرق اللون. قياس الامتصاص.
يقللتحييد TLR2 بشدة من إنتاج SEAP ، مما يشير إلى TLR2 كوسيط أساسي.
لتقييم تأثيرات طبقة البروتين الممتصة على نشاط NF-kB / AP-1 بوساطة المستقبلات الشبيهة بالحصيلة ، بعد زراعة البلاعم المراسلة في قارورة بحجم مناسب إلى التقاء 70٪ ، افصل الخلايا بمحلول تفكك إنزيمي مناسب كما هو موضح.
أعد تعليق الخلايا بتركيز 7.3 × 105 خلايا لكل م
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية