موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:19 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بثقافة ملتصقة للخلايا العصبية البشرية الناضجة في صفيحة مغلفة بالمصفوفة.
أضف نواقل الفيروسات العدسية التي تشفر بروتين تاو بشري متحور مدمج في مبلغ بروتين فلوري أصفر (YFP).
يرتبط الفيروس العدسي بمستقبلات سطح الخلايا العصبية المحددة ، مما يتيح اندماج الغشاء الفيروسي المضيف وإطلاق الحمض النووي الريبي الفيروسي والإنزيمات.
يتم نسخ الحمض النووي الريبي الفيروسي عكسيا إلى الحمض النووي.
ينقل الإنتجراز الفيروسي الحمض النووي إلى النواة ، مما يسهل الاندماج في الجينوم المضيف ، ويؤدي إلى إنتاج بروتين تاو المتحور الموسوم ب YFP.
بمرور الوقت ، يشكل تاو الطافرة مجاميع سيتوبلازمية في الخلايا المنقولة.
اغسل الخلايا بوسائط جديدة لإزالة الجزيئات الفيروسية غير الداخلية.
استمر في الحضانة مع تغييرات الوسائط المنتظمة للحفاظ على بقاء الخلايا العصبية وتعزيز تراكم البروتين.
تصور الخلايا العصبية تحت المجهر.
تظهر الخلايا العصبية التي تم نقلها بنجاح مجاميع سيتوبلازمية من بروتين تاو المتحور الموسوم ب YFP.
لتحويل الخلايا العصبية بفيروس العدسات ، استخدم عدد عيار يبلغ 340,000 وحدة قابلة للتحويل لكل خلية. قم بتخفيف الوحدات القابلة للتحويل في وسط زراعة الخلايا إلى التركيز اللازم ، وإضافتها إلى الخلايا.
بعد يومين من إضافة فيروس العدسات ، اغسل الخلايا مرة واحدة بوسائط جديدة لا تحتوي على bFGF.
استمر في زراعة الخلايا عن
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية