تحفيز الخلايا العصبية الحسية العقدية الجذرية الظهرية باستخدام ناهض مستقبلات الببتيد العصبي

خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على الخلايا العصبية الحسية العقدية الجذرية الظهرية للفئران المنقولة.

الخلايا العصبية الجيدة للاختبار تعبيرا منخفضا عن مستقبلات الببتيد العصبي ، بينما تظهر الخلايا العصبية للتحكم مستويات فسيولوجية للتعبير عن مستقبلات الببتيد العصبي.

استبدل الوسائط بوسائط خالية من المصل لتوفير بيئة خاضعة للرقابة لاستجابة تحفيز دقيقة.

أضف ناهض مستقبلات الببتيد العصبي إلى الآبار واخلطها. احتضان اللوحة.

في بئر التحكم ، يرتبط ناهض مستقبلات الببتيد العصبي بالمستقبلات المستهدفة ، مما يؤدي إلى سلسلة إشارات داخل الخلايا تطلق الناقلات العصبية.

ومع ذلك ، في آبار الاختبار ، يحد انخفاض تعبير مستقبلات الببتيد العصبي من ارتباط ناهض ، مما يؤدي إلى انخفاض إطلاق الناقل العصبي مقارنة بعنصر التحكم.

بعد الحضانة ، اجمع الوسائط من الآبار وأجهزة الطرد المركزي.

انقل المادة الطافية إلى أنابيب واستخدم مقايسة مناعية مناسبة لقياس مستويات الناقل العصبي. تظهر عينة التحكم إطلاق ناقل عصبي أعلى من عينة الاختبار بعد تحفيز ناهض المستقبلات العصبية.

في اليوم 6 ، بعد الطلاء وبعد 72 ساعة من تعداء siRNA ، قم بتغيير وسط الثقافة إلى 200 ميكرولتر من الوسط الخالي من المصل. بعد الحضانة لمدة 30 دقيقة ، أضف 1 ميكرولتر من مادة التحفيز الكيميائية ، واخلطها برفق عن طريق سحب العينات. بعد الحضانة للفترة المطلوبة ، اجمع وسط الاستزراع من طبق الاستزراع ، وجهاز الطرد المركزي عند 5,000 مرة جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية لإزالة أي شوائب معلقة. اجمع المادة الطافية من الطرد المركزي ، وخففها بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات حسب الحاجة.