التصوير المجهري الإلكتروني للإرسال للالتقام الخلوي المشبكي في الخلايا العصبية في الحصين الفأر

ابدأ بمعالجة الخلايا العصبية في الحصين الفئران بمخزن مؤقت عالي البوتاسيوم يحتوي على بيروكسيداز الفجل الحار أو HRP.

يزيل البوتاسيوم العالي استقطاب الخلايا العصبية قبل المشبكية ، مما يؤدي إلى إفراز الحويصلة المتشابكة. ثم تستعيد الخلايا العصبية أغشية الحويصلة المشبكية من خلال الالتقام الخلوي ، عن طريق دمج HRP في الحويصلات المشكلة حديثا. إصلاح الخلايا العصبية مع الجلوتارالديهايد وغسل لإزالة الجلوتارالديهايد الزائد.

أضف بيروكسيد الهيدروجين والركيزة الملونة ، والتي تتأكسد بواسطة HRP لتكوين رواسب كثيفة الإلكترون. اغسل لإزالة أي ركيزة غير متفاعلة.

تعامل مع رابع أكسيد الأوزميوم لتعزيز تباين الغشاء ، ثم اغسل الكاشف الزائد. بعد ذلك ، أضف أسيتات اليورانيل لتعزيز تباين العضية.

تجفيف الخلايا العصبية باستخدام زيادة تركيزات الإيثانول وتضمينها في الراتنج.

تحديد المناطق كثيفة الخلايا مجهريا واستئصالها. ثم قم بإعداد أقسام رقيقة للغاية.

انقل قسما إلى شبكة نحاسية وقم بمواجهته بعوامل التباين.

باستخدام الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال ، تظهر الحويصلات التي تحتوي على HRP كهياكل كثيفة الإلكترون.

تحفيز ثقافة الخلايا العصبية في الحصين عن طريق إضافة 1.5 مل من محلول التحفيز عالي البوتاسيوم إلى كل بئر في درجة حرارة الغرفة لمدة 90 ثانية. في هذه الخطوة ، قم بإعداد محلول كاكوديلات الصوديوم 0.1 مولار عند درجة الحموضة