تصور الضفيرة المشيمية في دماغ الفأر باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح

خذ الضفيرة المشيمية من دماغ الفأر في سلة عينة.

يحتوي النسيج ، الموجود داخل بطينات الدماغ ، على طبقة من الخلايا الظهارية التي تحتوي على الزغابات الدقيقة على سطحها القمي.

احتضان الأنسجة في محلول مثبت للحفاظ على بنيتها الخلوية.

يغسل بمخزن مؤقت لإزالة المثبت الزائد وتثبيت درجة الحموضة.

احتضان الأنسجة برباع أكسيد الأوزميوم الذي يرتبط بدهون غشاء الخلية ، مما يحافظ على استقرار الغشاء ، ثم اشطف الكاشف الزائد.

تجفيف الأنسجة باستخدام زيادة تركيزات الكحول لمنع تشويه الأنسجة أثناء التصوير.

جفف الأنسجة ، وثبتها على حامل عينة مطلي بالكربون ، ثم قم بتغطيتها بطبقة بلاتينية موصلة.

باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح ، قم بتركيز شعاع إلكتروني على السطح. تعمل الطبقة البلاتينية على تبديد الإلكترونات ، مما يمنع تراكم الشحنة ويقلل من القطع الأثرية التصويرية.

يلتقط الكاشف الإلكترونات المنتشرة من السطح ، مما ينتج عنه صورة للأنسجة التي تظهر الخلايا الظهارية مع الزغابات الدقيقة.

لإجراء تحضير العينة ل SEM ، انقل الضفيرة المشيمية المعزولة حديثا إلى محلول تثبيت طازج ، واحتضانها طوال الليل عند 4 درجات مئوية. بمجرد الانتهاء من ذلك ، اغسل العينة ثلاث مرات باستخدام 3 إلى 5 ملليلتر من 0.1 مولار كاكوديلات الصوديوم لمدة خمس دقائق لكل منهما.

بعد إصلاح العينات في 3 إلى 5 ملليلتر من رابع أكسيد الأوزميوم 2٪ في محلول كاكوديلات الصوديوم 0.1 مولار لمدة 30 دقيقة. ثم اغسل العينات ثلاث مرات لمدة خمس دقائق باستخدام 3 إلى 5 ملليلتر من الماء عالي النقاء. بعد ذلك ، قم بتجفيف العينات في سلسلة متزايدة من تركيزات الكحول الإيثيلي المثلج مع 15 دقيقة لكل محلول كحول إيثيلي. استخدم مجفف النقاط الحرجة لتجفيف العينة بشكل صحيح. ضع العينة بعناية على حامل عينة باستخدام ملصق كربوني ، وتصور عينات الضفيرة المشيمية باستخدام SEM.