التحليل فوق البني لقسم دماغ الفأر باستخدام المجهر الإلكتروني للإرسال

خذ قسما من دماغ الفأر الثابت برباع أكسيد الأوزميوم مضمنا في كتلة من الراتنج.

احصل على صورة قسم وقم بمواءمتها مع صورة أطلس معدة مسبقا لتحديد منطقة الاهتمام.

ضع علامة على حدود هذه المنطقة على الكتلة.

قم بتسخين الراتنج لتليينه وإزالة المنطقة المحددة.

ألصق العينة بقضيب تثبيت زجاجي وقم بقصها.

باستخدام الميكروتوم الفائق ، قم بإعداد أقسام نصف رقيقة ورقيقة للغاية.

انقل الأقسام شبه الرقيقة والرقيقة جدا إلى حاملات زجاجية وشبكات نيكل ، على التوالي.

قم بتلطيخ الأجزاء شبه الرقيقة بصبغة ترتبط بالأحماض النووية والسيتوبلازم الغني بالريبوسوم والمصفوفة خارج الخلية.

اغسل الأقسام وفحصها تحت المجهر الضوئي للتأكد من وجود المنطقة المستهدفة.

راقب الأقسام فائقة النحافة تحت المجهر الإلكتروني الإرسال.

رابع أكسيد الأوزميوم كثافة الإلكترون للأغشية الخلوية والعضية ، مما يوفر تباينا عاليا ضد السيتوبلازم الأقل كثافة للإلكترون ، مما يتيح تصور البنية التحتية الخلوية.

لتعيين منطقة اهتمام، حدد صورة تحتوي على منطقة الاهتمام من أطلس الصور المعد مسبقا. ارسم حدود منطقة الاهتمام على الصورة المقسمة. قم بتركيب هذه الحدود بصريا على العينة المضمنة تحت المجهر ، واستخدم إبرة قياس 26 بوصة واحدة لخدش حدود المنطقة هذه على عينة الراتنج. ثم قم بتسخين العينات إلى 95 درجة مئوية من أجل تليين الراتنج.

بعد ذلك ، أخرج عينات الراتنج الدافئة من الفرن ، واستخدم شفرة حلاقة لاستئصال مناطق الاهتمام. قم بلصق العينات على قضبان تثبيت زجاجية من العيار المناسب ، وقم بقص العينات المثبتة للتقسيم شبه الرقيق والرقيق للغاية. استخدم الميكروتوم الفائق للحصول على أقسام شبه رقيقة 0.7 ميكرومتر ورقيقة جدا 70 نانومتر ، وجمع الأقسام شبه الرقيقة على حاملات الزجاج والأقسام الرقيقة جدا على شبكات النيكل.

بتلطيخ المقاطع شبه الرقيقة ب 1٪ من التولودين الأزرق في PBS لمدة أربع دقائق ، متبوعة بعدة غسلات في ماء منزوع الأيونات قبل فحص الأقسام بواسطة الفحص المجهري الضوئي. يمكن بعد ذلك تقييم المقاطع الرقيقة للغاية مباشرة عن طريق الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال عند 180 كيلو فولت ، دون مزيد من التعديل.