الحقن التجسيمي للنواقل الفيروسية لإعادة برمجة الخلايا الدبقية في نموذج الفأر

قم بتأمين فأر معدلة وراثيا مخدر في إطار تجسيمي مع مكشوفة جمجمته.

يعبر هذا الفأر عن Cre recombinase في الخلايا الدبقية.

ضع الذراع التجسيمية التي تمسك الأنبوب الشعري فوق الجمجمة وقم بمحاذاة الأنبوب فوق البرجما.

اضبط المحاور التجسيمية للاستهداف الدقيق.

احفر حفرة في الموقع المستهدف ، مع التأكد من بقاء الأم الجافية سليمة. إزالة شظايا العظام.

اغسل الأنبوب الشعري بالعازلة. ارسم فقاعة هواء ، ثم قم بتحميل الفيروس المرتبط بالغدة الذي يحمل جينات إعادة برمجة الخلايا العصبية غير النشطة وبروتين الفلورسنت.

اخفض الأنبوب الشعري إلى العمق المستهدف وحقن المحلول الفيروسي في المنطقة الغنية بالخلايا الدبقية.

اسحب الأنبوب بعناية لمنع التدفق العكسي.

أغلق الشق واسمح بالتعافي.

تقوم

الفيروسات الداخلية بتوصيل الجينات المعطلة المحاطة ب loxP إلى النواة الدبقية. Cre recombinase يقلبها ، وينشط جينات إعادة برمجة الخلايا العصبية ويقود التحويل العصبي. تعبر الخلايا العصبية الداخلية المعاد برمجتها عن البروتين الفلوري تحت المحفز الخاص بالخلايا العصبية.

لحقن عوامل إعادة البرمجة ، ضع فأرة مخدرة في الإطار التجسيمي ، وقم بإدارة التسكين المناسب في بداية الجراحة ، ثم أحضر طرف الشعيرات الدموية الزجاجية لإبرة الحقن فوق بريجما مباشرة. تأكد من أن الطرف الشعري مستقيم تماما في كل من طائرات AP و ML. أعد تعيين كل من قيم M-L و AP إلى 0.0 على