JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:42 د • June 17th, 2025
خذ فأرا معدلا وراثيا مخدرا يعبر عن بروتينات الفلورسنت في الخلايا الدبقية الصغيرة. قم بتثبيته على إطار تجسيمي مع مرحلة آلية تحت مجهر ثنائي الفوتون.
الجمجمة مزودة بأنبوب معدني زجاجي القاع يعمل على تسطيح الحويصلات الهوائية برفق فوق منطقة الحصين القرنية 1 أو CA1 ، مما يضمن واجهة بصرية واضحة دون
ضغط مفرط على الأنسجة الأساسية.
املأ الأنبوب المعدني بالماء لتحسين الإرسال البصري.
قم بتنشيط الليزر النبضي عند الطول الموجي للإثارة.
باستخدام التألق من حمة الدماغ والضوء المنعكس من الأنبوب المعدني ، اضبط التركيز على منطقة CA1.
قم بتغيير موضع رأس الماوس لمحاذاة الجزء السفلي الزجاجي الموازي لمستوى التصوير ، مما يضمن تركيزا بؤريا موحدا عبر مجال الرؤية.
اضبط الهدف للحصول على الدقة المثلى ولاحظ ديناميكيات الخلايا الدبقية الصغيرة في الجسم الحي في منطقة CA1.
بعد ذلك ، قم بتصوير التلفيف المسنن ، حيث تؤكد الخلايا الدبقية الصغيرة الفلورية سلامة CA1.
اضبط الماوس في جهاز تثبيت الرأس تحت العدسة الموضوعية للمجهر ثنائي الفوتون وفي مرحلة المسح الضوئي XY الآلية. ثم املأ الفراغ بين قاع الزجاج والعدسة الموضوعية بالماء دون تكوين فقاعات هواء. اضبط التركيز ، على CA1 بتوجيه من التألق المنبعث من حمة الدماغ والضوء المنعكس من حافة الأنبوب المعدني ، تحت إضاءة مستمرة بواسطة الليزر النبضي.
اضبط زاوية رأس الماوس عن طريق إمالة جهاز تثبيت الرأس بحيث يكون الجزء السفلي الزجاجي موازيا لمستوى التصوير. بعد ذلك ، اضبط طوق التصحيح للهدف لتحقيق أعلى دقة على عمق الهيكل المستهدف في CA1. بعد ذلك ، تأكد من أن الخلايا الفلورية في الطبقة الجزيئية للتلفيف المسنن ، أو DG ، على عمق 500 ميكرومتر من قاع الزجاج ، يتم تصويرها في مجال الرؤية بأكمله. فقط في حالة نجاح الجراحة ، يمكن اكتشاف إشارات DG على الفور.
تأكد من أن الخلايا الدبقية الصغيرة قد استعادت مورفولوجيتها المتشعبة. ثم قم بإجراء التصوير في الجسم الحي على الطبقة ذات الأهمية في CA1.