Chromosomics: الكشف عن التغيرات العددية والهيكلية في جميع الكروموسومات 24 الإنسان وقت واحد باستخدام رواية الفحص FISH OctoChrome

يفحص اختبار Octa Chrome Fish في وقت واحد جميع الكروموسومات البشرية البالغ عددها 24 في تهجين واحد على شريحة واحدة. أولا ، قم بإعداد فروق الطور على الشريحة المربعة الثمانية المحددة. ثم قم بإجراء فحص آلي لشريحة العينة لتسهيل تحديد موقع جميع المراحل الوصفية وإعادة التقييم المستقبلي لجميع صور الخلية.

الموضع التالي ، ينزلق المربع الثمانية فوق جهاز الكروم ثماني الكروم وقم بتهجين المجسات. يمكن أن تظهر النتائج التي تم الحصول عليها ثلاثة كروموسومات كاملة مطلية مختلفة في كل مربع بناء على ترتيب مجموعات الكروموسومات على جهاز التناضح العكسي. خطرت لي فكرة طريقة RO FISH هذه لأول مرة عندما بدأت في تطبيق الأسماك في الدراسات السكانية البشرية خلال أوائل التسعينيات.

ثم قدمت فكرتي عن الرسم ثلاثي الألوان ، ثماني شرائح مربعة لضبط الخلية في المؤتمر السنوي A A CR في عام 1994. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل ثني الكروموسوم الكلاسيكي والنماذج الأولية الطيفية الحديثة هي أنها يمكن أن تحلل بسهولة جميع الكروموسومات البشرية البالغ عددها 24 في عدد أكبر من الخلايا. ابدأ بإعداد خلايا الطور الطوري المثبتة في التعليق كماصة تحكم في قطرة الخلايا على شريحة وتحقق من الكثافة المناسبة.

الآن اغمس في ثمانية مربعات من الكروم OC ، وانزلق إلى الإيثانول النقي لمدة دقيقتين. في سلسلة من المربعات المتناوبة ، قم بتوزيع خمسة ميكرولترات من تعليق الخلية على شريحة القالب لمنع انتشار الخلايا من التداخل مع بعضها البعض. تجفيف العينات بالهواء قبل اكتشاف الأزواج المجاورة.

ضع 20 ميكرولترا من 0.2 ميكروغرام لكل مليلتر من صبغة DAPI على وسط كل نصف شريحة ، وضع زلة غطاء. الآن ، قم بإجراء فحص آلي لشريحة العينة لتوطين خلايا الطور الطوري. استخدم برنامج metaverse لتسهيل تحديد موقع جميع المراحل الوصفية وإعادة التقييم المستقبلي لجميع صور الخلية.

اعرض نتائج المسح يدويا واحذف البيانات الاصطناعية غير الطورية. أولا ، قم بإزالة بقعة DPI في اثنين من المخزن المؤقت XSSC ، ثم قم بتجفيف العينات من خلال سلسلة من غسلات الإيثانول. جفف الشريحة في الهواء ثم ضعها على طبق قفزة 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق.

الآن قم بموازنة مسبار chroma وغرفة التهجين متعددة المجسات ومخزن التهجين في حمام مائي 37 درجة مئوية مع جانب الملصق لأسفل. ضع جهاز OC chrome على لوح تسخين 37 درجة مئوية. أضف ميكرولترين من محلول التهجين الدافئ إلى كل منطقة من المناطق الثمانية.

اقلب القالب ووجهه بعناية. مرر فوق جهاز OC chrome. تحقق من محاذاة شريحة النموذج مع جهاز Octa Chrome.

ثم قم بخفض الشريحة بعناية على قطرات محلول التهجين وقم بتطبيق ضغط لطيف متساو لنشر محلول التهجين على حواف كل منطقة من المناطق المرتفعة على جهاز الكروم OC. ارفع الطرف المتجمد من الشريحة الزجاجية واقلبها بحيث تكون الشريحة أسفل جهاز الكروم OC. ضعها على طبق ساخن 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.

ثم انقله إلى لوح ساخن 75 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. لتغيير طبيعة العينات لخطوة التهجين ، قم بنقلها إلى مسبار كروما ، غرفة تهجين متعددة المجسات. استبدل الغطاء وقم بتعويم الغرفة في حمام مائي 37 درجة مئوية طوال الليل.

قم بإزالة الشريحة بعناية من الجهاز واغسلها في 0.4 درجة مئوية زائدة عند 72 درجة مئوية لمدة دقيقتين. قم بإجراء الغسيل الثاني في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 ثانية. تابع إضافة 20 ميكرولترا من DPI إلى وسط كل نصف شريحة ووضع زلة غطاء.

احتضان العينات في الظلام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة قبل عرضها بواسطة الفحص المجهري الفلوري. يسهل اختبار أسماك الكروم ثماني الكروم الفحص المتزامن لجميع الكروموسومات البشرية البالغ عددها 24 باستخدام تهجين واحد على شريحة واحدة. يحمل كل مربع ثلاثة مجسات مختلفة لطلاء الكروموسوم الكامل المسمى مباشرة بالفلورو الملون المختلف.

يظهر الفحص الرباعي لخلية الطور الطوري الطبيعية في المربع الثاني من نظام ثماني الموارد البشرية أن الكروموسومات 8 و 21 و 12 مطلية باللون الأحمر والأخضر والأزرق. يمكن تصورها بشكل فردي باستخدام المرشحات المعنية أو تصورها في وقت واحد من خلال مرشح DAPI Fitzy ، Texas Red الثلاثي. نهج الكروموسومات هذا له فائدة في الكشف عن الخلايا غير الطبيعية المصابة بالكروموسومات الخاصة بسرطان الدم ، والإزاحة ، واختلال الصيغة الصبغية .

على سبيل المثال ، T 8 21 هو انتقال كروموسومي شائع في سرطان الدم النخاعي الحاد. التثلث الصبغي 21 3 نسخ من الكروموسوم 21 هو اختلال الصيغة الصبغية شائع في سرطان الدم بعد التطور. مهدت هذه التقنية الطريق للعلماء في مجال علم الوراثة الخلوية الجزيئي وعلم الأوبئة الجزيئي لاستكشاف إعادة ترتيب الكروموسومات الشائعة في الغالب التي تم اكتشافها في سرطان الدم وسرطان الغدد الليمفاوية ، وفحص البلويد الانتقائي بين جميع الكروموسومات البشرية في المرضى السريريين أو السكان المعرضين للمواد الكيميائية السامة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية فحص جميع الكروموسومات البشرية البالغ عددها 24 في وقت واحد في تهجين واحد على شريحة واحدة بواسطة مقايسة Octo Chrome Fish. ونعرف هذا على أنه كروموسومات.