شريحة ساخنة: الكبار الدماغ الحاد في درجة الحرارة الفسيولوجية التقطيع

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنتاج شرائح دماغ حادة عالية الجودة. يتم تحقيق ذلك عن طريق استخراج الدماغ أولا من. الخطوة الثانية هي تشريح منطقة الدماغ التي تهم وإرفاقها بمرحلة التقطيع مع إبقائها رطبة بمحلول التقطيع.

بعد ذلك ، يتم غمر الدماغ في محلول تقطيع درجة الحرارة الفسيولوجية. الخطوة الأخيرة هي تقطيع الدماغ. في النهاية ، يمكن استخدام الشرائح في العديد من التجارب الفيزيولوجية الكهربية في المختبر.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل التقطيع المثلج ، هي أن هذا أبسط وينتج عنه نتائج فائقة. بشكل عام ، كل من هو جديد في هذه الطريقة سوف يكافح لأنه يتطلب تنفيذ جميع الخطوات بسلاسة وسرعة دون تأخير غير ضروري. خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما احتجنا إلى الحصول على شرائح نووية مخيخية عالية الجودة من البالغة.

سيتم عرض الطريقة من قبل Le Anri ، طالب في مختبرنا قبل البدء في هذا الإجراء. تأكد من إعداد الأداة والأدوات والحلول مسبقا. يوضح الجدول الأول تكوين الحل الفيزيائي القياسي أو SPS الذي سيتم فيه قطع الدماغ بعد تحضير محلول عمل SPS.

وفقا للبروتوكول المكتوب ، قم بموازنة المحلول بنسبة 95٪ أكسجين و 5٪ من ثاني أكسيد الكربون لمدة 20 دقيقة ، بينما تنظم موازنات SPS الأدوات المطلوبة للتقطيع. يوضح هذا الشكل ترتيبات الأدوات المستخدمة لتقطيع الدماغ ويمكن استخدامه كمرجع مرئي عند إعداد المفتاح لتحديد كل عنصر موجود في البروتوكول المكتوب. بعد اكتمال توازن محلول عمل SPS ، أضف ملليلترين من كلوريد الكالسيوم المولي إلى SPS ، ثم صب حوالي 300 مل من المحلول في دورق

ضع الدورق الذي يحتوي على SPS على لوح تسخين أو في حمام مائي للتسخين إلى 36 درجة مئوية. إذا تم استخدام سخان ، فتأكد من تضمين قضيب تقليب مغناطيسي وتأكد من أن المحلول لا يسخن أكثر من اللازم لأن ذلك سيؤدي إلى ترسيب الحديد ويجعل المحلول غير صالح للاستخدام. بعد ذلك ، قم بغلي ما يقرب من 500 مل من الماء النقي في غلاية كهربائية وأضفها إلى دورق يحتوي على 300 مل من الماء النقي البارد للحصول على ماء أكثر دفئا قليلا من 36 درجة مئوية بعد تخدير الماوس وقطع رأسه.

وفقا للبروتوكولات المعتمدة مؤسسيا ، يتم شطف الرأس من الدم الزائد في دورق الماء الدافئ. ثم استخدم مقصا صغيرا لفضح ثقب وماغنوم الجمجمة وسحب الجلد للخلف لكشف الجمجمة وتصور خيوط الجمجمة بشكل أفضل لفتح الجمجمة. أدخل طرف المقص الصغير من خلال الساعد والماغنوم.

قم بتدويرها على الفور نحو الجانب الجانبي وقم بقصها برفق على طول الحافة الجانبية للعظم الجداري حتى مكان خلف العينين والخياطة الجدارية الأمامية. ثم أدر المقص باتجاه مركز الجمجمة واقطع خط الوسط إلى الجانب الآخر من الجمجمة. يوضح هذا الرسم البياني النمط الكامل للجروح لفتح الجمجمة.

استخدم الآن ملقطا دقيقا لرفع الجمجمة من الزاوية الجدارية الأمامية وسحبها لأعلى قطريا لفضح الدماغ ونقل الدماغ والجمجمة المتبقية إلى طبق بتري يحتوي على شهة دافئة. SPS. ثم استخدم مشرطا وملعقة لفصل منطقة الاهتمام عن بقية الدماغ. هنا ، يتم إجراء قطع واحد من خلال كل من الدماغ المتوسط والجسر لفصل المخيخ.

الخط الأحمر على هذا الرسم التخطيطي موقع القطع. اشطف المخيخ بوضعه في طبق بتري صغير ثان يحتوي على SPS دافئ غازات. ثم انقل المخيخ إلى قطعة من ورق الترشيح المبلل.

استخدم مشرطا لقطع جذع الدماغ لتشكيل قاعدة عريضة مستقيمة ليتم لصقها على مرحلة القطع. يوضح الخط الأزرق في هذا الرسم البياني المنطقة التي ستكون عزيزة على مرحلة القطع. أخيرا ، أعد المخيخ المقطوع إلى طبق بتري الصغير الذي يحتوي على غاز دافئ SPS ، ثم انتقل إلى التقطيع.

أولا ، تأكد من جفاف مرحلة القطع ، ثم ضع قطرة صغيرة من غراء السيانواكريليت في منتصف المرحلة. ثم استخدم سولا لرفع كتلة الدماغ من SPS وربت بقطعة صغيرة من ورق الترشيح لإزالة أي سائل زائد من الدماغ. بمجرد إزالة السائل الزائد ، حرك الدماغ من الملعقة على قطرة الغراء بحركة واحدة.

ثم استخدم المعكرونة من قبل الأليفة لتطبيق بضع قطرات من SPS على الدماغ. ضع مرحلة القطع مع توصيل الدماغ بغرفة التقطيع. قم بمحاذاة كتلة الدماغ بحيث تكون القشرة المخيخية في مواجهة الشفرة.

هذا يضمن أن منطقة الاهتمام تتعرض لأقل قدر من الضغط الميكانيكي قبل تقطيعها. الآن ، ابدأ في قطع الدماغ باستخدام الميكروتوم وفقا لتعليمات الشركة المصنعة ، مع إخراج SPS باستمرار في غرفة القطع طوال عملية التقطيع. حافظ على درجة حرارة حجرة القطع عند 34 إلى 37 درجة مئوية عن طريق ملء الغرفة الخارجية بالماء النقي الدافئ.

أثناء التقطيع ، ادعم كل شريحة برفق بفرشاة ناعمة لمنعها من الطي. حاول ألا تلمس منطقة الاهتمام ولا تسمح للفرشاة بلمس شفرة الهزاز لأن ذلك سيؤدي إلى تلف الشفرة. باستخدام ماصة معكرونة زجاجية مصقولة واسعة الفم ، انقل كل شريحة من غرفة التقطيع إلى غرفة احتجاز تحتوي على SPS غازات باستمرار والاحتفاظ بها عند 36 درجة مئوية.

تأكد من أن الغاز لا ينتج عنه فقاعات صغيرة محاصرة في الغرفة يمكن أن تلحق الضرر بالشرائح بمجرد تقطيع الدماغ بالكامل. اترك الشرائح تستريح مغمورة في غرفة الاحتجاز عند 34 إلى 37 درجة مئوية لمدة ساعة على الأقل قبل بدء التجربة. هذا يسمح بتدهور الأنسجة التالفة والمحتضرة مما يؤدي إلى سطح شريحة أنظف.

بعد مرور الساعة ، اترك درجة حرارة غرفة الاسترداد لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة. الشرائح جاهزة الآن للاستخدام في التجارب. تظهر هذه الصورة شريحة مخيخية أفقية تم الحصول عليها بالطريقة الموضحة.

يشار إلى الطبقات الثلاث الرئيسية للقشرة المخيخية. GC هي طبقة الحبيبات. يشير الكمبيوتر إلى طبقة خلية البكيني والمل.

تسمية المادة البيضاء للطبقة الجزيئية بقطب مشبك التصحيح WMA يتم رسمه بشكل تخطيطي على خلية GOGI ، واختصار GOC. يمثل شريط المقياس 40 ميكرون. هذا مثال على تسجيل من خلية GOGI الموضحة سابقا.

تم الحصول على التسجيل باستخدام قطب كهربائي مشبك التصحيح. في وضع المشبك الحالي. اللون الأسود هو أثر تمثيلي لستة آثار رمادية.

هنا يتم عرض شريحة قشرية دماغية إكليلية تم الحصول عليها بالطريقة الموضحة. تظهر الخلايا شبه المعدنية القشرية مع رسم تخطيطي لقطب كهربائي مشبك التصحيح. هذا مثال على تسجيل مشبك التصحيح.

في وضع المشبك الحالي من الخلية شبه المعدنية الموضحة في الصورة السابقة ، يظهر التتبع السلوك النموذجي لخلية شبه معدنية قشرية. يرجى الانتباه أثناء هذا الإجراء لمراقبة درجة الحرارة باستمرار.