1.收集必要的材料
2.样品的制备细胞
3.样品的制备
4.编写收集瓶
5.萃取
资料来源: 实验室的杰夫卡普-马萨诸塞大学阿默斯特
分布的一组称为甘油二烷基甘油-tetraethers (GDGTs),由一套古菌和细菌,产生的有机生物标志物的发现在现代沉积物在回应空气可预测的方式更改或水温度1,2。因此,这些生物标志物在一个序列已知年龄的沉积物的分布可以用于重建的沿革空气和/或水温度对到千禧年代际时间尺度 (图 1)。长高分辨率记录的过去的气候,被称为古气候学,生产取决于数以百计,可能数以千计的样品的快速分析。年长的萃取技术,如超声波或索氏,是太慢。然而,更新的加速溶剂萃取技术的设计与效益就是生命。

图 1。在过去显示在地中海东部的海表温度 (SST) 的变化的古气候记录的示例 ~ 27,000 年3.此记录包括 ~ 115 样品和基于 isoprenoidal GDGT 基于 TEX86 SST 代理。
1.收集必要的材料
2.样品的制备细胞
3.样品的制备
4.编写收集瓶
5.萃取
加速溶剂萃取是一种快速、高效、高通量的技术,用于从大量地质沉积物样品中分离有机生物标志物。
传统上,使用超声处理或索氏等提取方法,但是,这些协议的缺点是它们太慢,无法处理足够的材料进行详细的古气候重建。一种较新的技术,即加速溶剂萃取或 ASE 方法,是在考虑效率和高通量的情况下开发的。
ASE 方法使用高温和高压的组合来提取样品,并且可以在一次相对较快的制备运行中处理多个样品。
该视频是详细介绍如何从沉积物中提取生物标志物的系列视频中的第三部分。它将涵盖该程序,并深入了解 ASE 优于超声处理或索氏萃取的优点。
在加速溶剂萃取中,样品被加载到钢制样品池中,然后装入转盘上。每个样品池的收集瓶也加载到单独的转盘上。仪器将样品池装入内部柱温箱中。溶剂通过一系列阀门从溶剂瓶中泵出,直到达到足够的压力。
该压力保持一段时间由样品和分析物决定。然后,通过钢管将溶剂从样品池中冲洗到相应的收集瓶中。该过程可以重复多次。温度、压力和持续时间都可以针对样品进行定制。
使用的高温增加了萃取的动力学,而高压可防止溶剂挥发。收集瓶现在包含总脂质提取物,样品池中剩余的物质称为残留物。它由非有机材料以及不可溶剂萃取的有机材料(称为干酪根)组成。
现在我们已经熟悉了加速溶剂萃取背后的原理,让我们看看这是如何在实验室中进行的。
采集感兴趣的样本后;冷冻干燥、均质化和去污,如本系列的另一个视频所示。
准备好所有样品后,为每个要提取的样品组装一个样品池,并为空白样品组装一个额外的样品池。为此,请将端盖拧到细胞体上。使用溶剂冲洗的镊子,在每个镊子上放置一个燃烧的玻璃纤维过滤器。用柱塞缓慢而轻柔地向下按压过滤器。
按编号标记每个样品的细胞体,并分别标记空白。?将燃烧的称量罐放在实验室秤上并去皮。用溶剂冲洗抹刀,然后用溶剂将 5 至 10 g 样品转移到称量罐中,并记录质量数。
将称量罐中的所有材料转移到相应的单元中。将另一个玻璃纤维过滤器放在顶部,轻轻夯实,直到它到达样品的顶部。
加入分散剂,如硅藻土或沙子,直到几乎满,小心避免任何碎片进入细胞体螺纹。用另一个端盖盖住单元的顶部。对每个样品和空白重复这些步骤。
在每个收集瓶上标记相应的样品池或空白样品池的编号,并用样品瓶盖盖上。将每个单元放入上部 ASE 托盘上的编号槽中。使用 ASE 上的键盘设置提取方法的参数,以在 100 ?C?和 1,200 psi。将每个样品提取 3 次,静置 10 分钟,并在静置之间用其总体积的 50% 冲洗细胞体。
接下来,确保溶剂瓶中含有足够的溶剂以提取所有样品。在开始运行之前,冲洗乐器管路 3 次。最后,按开始。
从 ASE 中取出样品瓶。现在生物标志物已经被提取出来,必须在分析前对其进行纯化。
加速溶剂萃取是一种多功能技术,可用于多种应用,此处将探讨其中一些应用。
加速溶剂萃取也可用于其他类型的样品,包括食品。监管和工业设施经常进行残留分析以检测农药污染,以确定水果或蔬菜等食品的安全性和质量。ASE 可用于从食品样品中提取有机氯农药,并确定农产品中存在的残留物的类型或水平。然后,此信息可用于确定农产品是否适合人类或动物食用。例如,狄氏剂在食物中的含量应在百万分之 0 到 0.1 之间,具体取决于产品。
食品营养成分也可以使用 ASE 提取。例如,可以提取像巧克力这样可能具有高重量脂肪含量的产品。使用含有石油醚的 ASE 作为溶剂,可以从巧克力样品中分离脂肪并进行定量分析,以确定每个已知量巧克力的准确脂肪含量百分比。使用这些信息,监管机构可以验证巧克力制造商的声明,或者制造商可以获取信息以创建准确的食品标签。
您刚刚观看了 JoVE 关于使用加速溶剂萃取 (ASE) 提取脂质生物标志物的介绍。进一步处理和分析的方法可以在后续视频中找到。
感谢观看!
最后提取,还有每个样本总脂提取物 (TLE)。每个小瓶现在包含从沉积物、 土壤或植物组织,可溶有机质。可以分析这些抽,和它们的化学成分确定和量化。
提取样本抽包含广泛的不同的有机化合物,包括 GDGTs,用于重建古温度。甘油-二烷基甘油-tetraethers 是显示对生长温度灵敏度的生物标志物的大套房。有两组 GDGTs,分枝和萜,不同性质的分支模式对核心烷基(图 3)。在海洋中,古生菌,称为 Thaumarchaeota,大都会组产生 isoprenoidal GDGTs4。分枝的 GDGTs 生产上陆地土壤中5,湖泊,和湖沉积物被身份不明的细菌,可能 Acidobacteria76 。古菌和细菌调整甲基枝叶生长温度,根据核心烷基环结构的数目,因为 GDGTs 是稳定沉积物中的几百万年,长的高分辨率的气候变化记录生成使用它们。
TEX86古水温度代理基于某些 isoprenoidal GDGTs,比每个含有 86 碳原子在其核心烷基组 (图 3):
TEX
Chapters in this video
0:00
Overview
1:05
Principles of Accelerated Solvent Extraction
2:23
Collection of Sample Materials and Preparation of ASE Cells
3:48
Preparation of Collection Vials and Extraction
4:49
Applications
6:18
Summary
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