Summary
Questo protocollo descrive come preparare oligomeri Aβ da un peptide sintetico in vitro e per valutare la quantità relativa di oligomero Aβ da un punto di analisi macchiante.
Abstract
Β-amiloide (Aβ) è un peptide idrofobo con un'intrinseca tendenza ad auto-assemblarsi in aggregati. Tra i vari aggregati, oligomero Aβ è ampiamente accettata come la neurotossina leader nel progresso della malattia di Alzheimer (AD) ed è considerato l'evento cruciale nella patogenesi dell'annuncio. Di conseguenza, Aβ oligomero inibitori potrebbero impedire la neurodegenerazione e hanno il potenziale per essere sviluppato come modificante la malattia trattamenti dell'annuncio. Tuttavia, i protocolli di diversa formazione di oligomeri Aβ potrebbero portare a oligomeri con caratteristiche diverse. Inoltre, non ci sono molti metodi per efficacemente gli inibitori di oligomero del1-42 di schermo Aβ. Un anticorpo A11 può reagire con un sottoinsieme di tossico oligomero di Aβ1-42 con strutture di β-foglio anti-parallelo. In questo protocollo, si descrive come preparare un campione di oligomero-ricco A11-positivi Aβ1-42 da un sintetico Aβ1-42 del peptide in vitro e per valutare la quantità relativa di oligomero di1-42 di Aβ A11-positivi in campioni tamponando un puntino analisi usando A11 e Aβ1-42-6E10 specifici anticorpi. Usando questo protocollo, inibitori dell'oligomero di A11-positivi Aβ1-42 possono essere selezionati anche da risultati sperimentali semi-quantitativa.
Introduction
Morbo di Alzheimer (annuncio) è una delle più importanti malattie neurodegenerative che colpisce le persone anziane nel mondo1. È ampiamente accettato che l'aggregazione anormale di β-amiloide (Aβ) può essere il fattore patologico principale dell'annuncio. Aggregati Aβ sono i componenti principali delle placche senili, uno dei marcatori biologici nei cervelli dei pazienti dell'annuncio. Inoltre, gli aggregati Aβ, oligomeri in particolare, producono neurotossicità potente, che potrebbe essere la causa della morte di un neurone come progredisce AD. Di conseguenza, l'inibizione della formazione di oligomeri Aβ potrebbe impedire la neurodegenerazione e inibitori oligomero Aβ potrebbero essere sviluppati come modificante la malattia trattamenti dell'annuncio. Molti studi hanno utilizzato un peptide Aβ sintetico per formare oligomeri in vitro, esplorare morfologie e strutture degli oligomeri Aβ artificiali e indagare gli inibitori dell'oligomero Aβ utilizzando in vitro modelli2,3 , 4. Tuttavia, protocolli di formazione diversi in vitro dell'oligomero Aβ potrebbero portare a oligomero con differenti caratteristiche morfologiche, che potrebbe causare i risultati incomparabili tra diversi gruppi di ricerca. Di conseguenza, un protocollo di formazione standard per oligomero Aβ è urgentemente necessaria.
Fino ad ora, non ci sono molti metodi sono stati segnalati per rilevare direttamente oligomeri Aβ. Microscopia elettronica a trasmissione (TEM), gel elettroforesi non-denaturante, analisi enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA) e dot blotting analisi può essere utilizzati per esaminare la quantità e/o la morfologia di Aβ oligomero in vitro5, 6. ad esempio, la morfologia e la struttura dell'oligomero Aβ può essere osservati nel TEM. La quantità relativa e dimensioni molecolari delle aggregazioni di Aβ può essere misurate mediante elettroforesi non-denaturante. ELISA potrebbe essere utilizzata per determinare oligomero Aβ in siero, plasma ed estratti dal tessuto cerebrale. Infine, dot blotting analisi, una tecnica utilizzata per la rilevazione, analisi e identificazione di proteine, potrebbe essere utilizzato per valutare la concentrazione relativa di oligomero Aβ in diversi campioni con l'aiuto di anticorpi Aβ-specifiche e oligomero. Inoltre, un dot blotting analisi offre notevole risparmio di tempo, come l'elettroforesi del gel e le procedure macchiante per gel non sono necessari. Pertanto, questa analisi è usata normalmente per potenziali inibitori di oligomero Aβ di schermo. L'obiettivo generale del presente protocollo è di descrivere un metodo relativamente semplice, affidabile e riproducibile per preparare un campione Aβ1-42 oligomero-ricco, di analizzare la quantità di oligomero Aβ1-42 da dot blotting analisi e oligomero Aβ schermo inibitori utilizzando semi-quantitativa di risultati sperimentali.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. soluzione preparazione
Nota: Vedere Tabella materiali per le origini di reagente.
- Preparare una soluzione di 5% albumina di siero bovino (BSA) con l'aggiunta di 5 g di BSA per 100 mL di acqua bidistillata. Mescolare nel Vortex completamente loro. Conservare la soluzione a 4 ° C per 1 mese.
- Preparare una soluzione di A11 dell'anticorpo anti-oligomero (1:1, 000) aggiungendo 10 µ l di soluzione madre di anticorpo a 10 mL di soluzione di BSA al 5%. Mescolare nel Vortex completamente loro. Conservare la soluzione a 4 ° C per 1 mese.
- Preparare una soluzione di 6E10 di anticorpo anti-Aβ (1:1, 000) aggiungendo 10 µ l di soluzione madre di anticorpo a 10 mL di soluzione al 5% BSA. Mescolarli completamente nel Vortex. Conservare la soluzione a 4 ° C per 1 mese.
- Preparare una soluzione OC di anticorpo anti-fibrillari oligomero (1:1, 000) aggiungendo 10 µ l di soluzione madre di anticorpo a 10 mL di soluzione al 5% BSA. Mescolarli completamente nel Vortex. Conservare la soluzione a 4 ° C per 1 mese.
- Preparare una soluzione di riserva (TBS) Tris-buffered salina con l'aggiunta di 24 g di Tris base e 88 g di NaCl a 1.000 mL di acqua bidistillata. Regolare il pH a 7.4. Conservare la soluzione a 4 ° C fino a 3 mesi.
- Preparare una soluzione fisiologica tamponata e Tween-20 (TBST) soluzione aggiungendo 1 mL di Tween-20 a 100 mL di TBS stock soluzione e 900 mL acqua bidistillata.
- Preparare una soluzione di anticorpo secondario da aggiungere 10 µ l di rafano perossidasi (HRP) Goat Anti-Rabbit IgG (H + L) a 10 mL di soluzione TBST. Mescolare nel Vortex completamente loro. Conservare la soluzione a 4 ° C per 1 mese.
- Sciogliere 3,68 g di curcumina in 1 mL di solfossido dimetilico (DMSO) per formare una soluzione stock di curcumina di 10 mM.
- Sciogliere 5 mg di sintetico Aβ1-42 in 2 mL di 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanolo (HFIP) per formare una soluzione di monomero Aβ 2,5 mg/mL. Mettetelo a temperatura ambiente (25 ° C) per le aliquote di 20 min. rendere 100 µ l e conservare a-20 ° C fino a 6 mesi.
Nota: Questa procedura deve essere eseguita velocemente come possibile. Le punte di pipetta dovrebbero essere tagliate fuori per garantire pipettaggio accurata. - Preparare elettrochemiluminescenza (ECL) liquido mescolando ECL fluido A e B con un rapporto di volume di 1:1. Questa soluzione deve essere preparata appena prima dell'uso.
2. preparazione del campione
Nota: Eseguire la preparazione del campione 2 giorni prima del punto, l'analisi macchiante.
- Aggiungere 900 µ l di acqua bidistillata in una provetta di soluzione di monomero Aβ1-42 ; la concentrazione di Aβ1-42 sarà 0,25 mg/mL. Mettere l'impasto a temperatura ambiente per 20 min.
- Far evaporare la soluzione con gas azoto ad alta purezza fino a quando il suo volume è circa 850 µ l. La concentrazione della soluzione Aβ1-42 sarà circa 0,29 mg/mL.
Nota: La soluzione deve essere agitata di volta in volta a garantire che il HFIP è completamente evaporato. Normalmente, dopo 30 min di evaporazione, il volume della soluzione residua è di circa 850 µ l. - Diluire la soluzione madre di curcumina per una soluzione di lavoro di curcumina (0,2 e 2 µM) con acqua bidistillata. Mescolare la soluzione Aβ1-42e curcumina soluzione con un rapporto di 1:1 di volume di lavoro. Le concentrazioni finali di curcumina sarà 0,1 e 1 micron.
Nota: Gli inibitori potenziali oligomero possono essere miscelati con la soluzione Aβ1-42 in qualsiasi rapporto, se necessario. - Agitare bene la soluzione continuamente in un agitatore magnetico (Vedi Tabella materiali).
- Fissare una scatola di divisorio in plastica per l'agitatore magnetico. Posto 2 magnetica mescolare bar a 2 angoli della scatola e posizionare le provette dei campioni al centro della scatola.
- La scatola a temperatura ambiente (25 ° C) per 48 h di scossa.
Nota: La velocità dell'agitatore magnetico è circa 60 giri/min.
- Centrifugare le provette per 15 min a 4 ° C e 18.000 g. x raccogliere il surnatante.
3. dot Blotting analisi
Nota: Tutte le incubazioni vengono eseguite su un agitatore orizzontale.
- Membrana di nitrocellulosa tagliate a strisce larghe 1 cm.
Nota: La larghezza della membrana di nitrocellulosa è regolabile in base alle esigenze sperimentali. - Posizionare il campione 2-µ l in modo uniforme sui 2 strisce (striscia 1 e 2) con ogni intervallo del punto a 0,5 cm.
- Mettere le strisce a temperatura ambiente per 5 minuti fino a quando la goccia sulla banda è asciutta.
- Incubare le strisce con una soluzione di 5% BSA per 30 min a temperatura ambiente.
- Sciacquare le strisce con una soluzione TBST per 5 min a temperatura ambiente.
- Aspirare la soluzione TBST. Per 1 h a temperatura ambiente, incubare striscia 1 con un anticorpo anti-oligomero A11 soluzione e striscia 2 con una soluzione di 6E10 di anticorpo anti-Aβ.
- Sciacquare le strisce con una soluzione TBST tre volte, ogni volta per 5 min a temperatura ambiente.
- Aspirare la soluzione TBST. Incubare le strisce con una soluzione di anticorpo secondario per 40 min a temperatura ambiente.
- Sciacquare le strisce con una soluzione TBST tre volte, ogni volta per 5 min a temperatura ambiente.
- Applicare uniformemente il liquido misto di ECL alla superficie delle strisce. Esporre le strisce in una sistema di imaging automatico di chemiluminescenza (Vedi Tabella materiali).
Nota: Normalmente, 300 µ l di liquido ECL è sufficiente per una membrana. La membrana deve essere tenuta umida durante l'esposizione. Il tempo di esposizione viene calcolato automaticamente dal sistema di imaging. - Fare un'analisi di scala di grigi utilizzando ImageJ (National Institutes of Health) o un altro software di elaborazione dell'immagine per ottenere risultati semi-quantitativi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Per studiare se un monomero Aβ1-42 può formare un oligomero Aβ1-42 dopo la preparazione, analisi TEM è stata usata. Non aggregati visibili sono stati osservati nel campione HFIP-dissolta Aβ1-42 monomero (Figura 1A). Inoltre, principalmente globulari aggregati con un diametro di circa 10-80 nm sono stati osservati nel campione Aβ1-42 dopo 48 h di agitazione, suggerendo che Aβ1-42 forma oligomeri dopo la preparazione (Figura 1B).
Figura 1 . Analisi TEM di Aβ1-42 monomero e campioni oligomero-ricco di Aβ1-42 . Il campione di monomero di HFIP-dissolta Aβ1-42 (10 µM) e il campione oligomero-ricco1-42 di Aβ (10 µM) preparato secondo questo protocollo sono stati esaminati da TEM. La barra della scala = 200 nm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Inoltre, dot blotting analisi è stato utilizzato per valutare la quantità relativa di oligomero di Aβ1-42 nei campioni. Un anticorpo A11 potrebbe reagire con un sottoinsieme di tossico oligomero Aβ con strutture di β-foglio anti-parallelo. Un anticorpo OC reagisce con aggregati fibrillari con strutture parallele di β-foglio a registro. Utilizzando questi anticorpi, abbiamo dimostrato che A11-positivi Aβ1-42 oligomeri, ma non OC-positivi Aβ1-42 aggregati fibrillari, principalmente è comparso nei campioni Aβ1-42 oligomero-ricchi che sono stati redatti secondo il protocollo ( Figura 2). Utilizzando il 6E10 di anticorpo anti-Aβ, abbiamo osservato che il numero di peptidi Aβ1-42 era simile per il campione di monomero disciolto HFIP Aβ1-42 e il campione di oligomero-ricco Aβ1-42 (Figura 2).
Figura 2 . Puntino analisi macchiante di Aβ1-42 monomero e Aβ1-42 campioni ricchi di oligomero. Campione di monomero (A) The HFIP-dissolta Aβ1-42 (10 µM) ed il campione oligomero-ricco1-42 di Aβ (10 µM) preparato secondo questo protocollo sono stati esaminati da dot blotting analisi usando l'anticorpo anti-oligomero A11, anti-fibrillare oligomero anticorpo OC e anti-Aβ anticorpo 6E10. (B - D) è stata eseguita l'analisi semi-quantitativa della scala di grigi di ImageJ. I dati, espressi come percentuale del controllo, erano la media ± SEM di 3 esperimenti indipendenti; *** p < 0,001 vs il gruppo di monomero Aβ1-42 (ANOVA e t-test). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Per indagare ulteriormente se questo protocollo potrebbe essere usato agli inibitori di schermo degli oligomeri Aβ1-42 , la curcumina, un noto inibitore di oligomero Aβ, è stato utilizzato. Abbiamo trovato che una co-incubazione con curcumina (0,1 - 1 µM) ha ridotto significativamente la quantità relativa di oligomero: A11-positivi Aβ1-42 , come testimoniano la macchiatura in diminuzione della A11 del campione di oligomero curcumina1-42 di Aβ co-incubate rispetto il incubate Aβ1-42 oligomero-ricco campione normale (Figura 3). Alle stesse condizioni, la curcumina (0,1 - 1 µM) non ha alterato il numero di peptidi Aβ1-42 , come la colorazione dei 6E10 era anche in tutti i campioni (Figura 3).
Figura 3 . Puntino analisi macchiante di curcumina co-incubate Aβ1-42 campioni ricchi di oligomero. (A) HFIP-dissolta Aβ1-42 monomeri (10 µM) sono stati preparati secondo questo protocollo e incubati con o senza curcumina (0, 0.1, 1 µM) sotto agitazione per 48 h. I campioni sono stati esaminati da un punto di analisi utilizzando A11 e 6E10 macchiante. Analisi semi-quantitativa in scala di grigi (B) è stata eseguita da ImageJ. I dati, espressi come percentuale del controllo, erano la media ± SEM di 3 esperimenti indipendenti; *** p < 0,001 vs il gruppo solo di Aβ1-42 (test ANOVA e di Tukey). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Per verificare la formazione di oligomeri, abbiamo anche usato un gel non-denaturante. Abbiamo trovato quel oligomero (> 4 KD) era presente nel campione Aβ1-42 oligomero-ricco, mentre la maggior parte monomero (4 KD) è stato trovato nell'esempio di monomero Aβ1-42 (Figura S1).
Abbiamo studiato Aβ aggregati nel surnatante e pellet del campione Aβ1-42 . Dopo 48 h di incubazione, oligomero Aβ1-42 ma non aggregati fibrillari Aβ1-42 sono stati trovati nel surnatante del campione come determinato dalla A11, OC e anticorpi 6E10 (Figura S2). Alle stesse condizioni, aggregati fibrillari di Aβ1-42 ma non gli oligomeri Aβ1-42 sono stati trovati nel pellet del campione (Figura S2).
Abbiamo anche esaminato la morfologia del campione1-42 Aβ curcumina-trattati mediante TEM. L'esempio di curcumina-trattati contiene poche macchie sferiche, suggerendo che la curcumina potrebbe ridurre la quantità di oligomero Aβ1-42 (Figura S3).
Figura S1 . Non-denaturante analisi elettroforesi del gel di Aβ1-42 monomero e campioni di oligomero-ricco Aβ1-42. Il campione di monomero disciolto HFIP Aβ1-42 (10 µM) e il campione di oligomero-ricco di Aβ1-42 (5 µM, basso; 10 µM, alta) preparato secondo questo protocollo sono stati esaminati mediante elettroforesi non-denaturante utilizzando il 6E10 di anticorpo anti-Aβ. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura S2 . Il surnatante di Aβ1-42 soluzione contiene principalmente oligomero, ma aggregati fibrillari non. Una soluzione di Aβ1-42 (50 µ l), dopo l'agitazione per 48 h, è stata centrifugata a 18.000 x g per 10 min. Il surnatante è stato raccolto e il pellet è stato ri-disciolto in 850 µ l di acqua bidistillata. Il surnatante e pellet sono stati ulteriormente esaminati da un'analisi di dot blot utilizzando anticorpi OC, A11 e 6E10. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura S3 . Analisi TEM di curcumina co-incubato campioni oligomero-ricco Aβ1-42. HFIP-dissolto Aβ1-42 monomeri (10 µM) sono stati preparati secondo questo protocollo e incubati con 1 µM curcumina sotto agitazione per 48 h. I campioni sono stati esaminati da TEM. Barra della scala = 100 nm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In questo protocollo, abbiamo segnalato un metodo per preparare campioni contenenti oligomero Aβ1-42 e per analizzare la quantità di oligomero di A11-positivi Aβ1-42 da un punto di analisi macchiante. Anche se i nostri metodi per la preparazione di campioni Aβ1-42 oligomero-ricchi sono abbastanza semplici, affidabili e riproducibili, ci sono ancora alcuni punti per essere notato. In primo luogo, HFIP viene utilizzato per sciogliere sintetico peptide Aβ1-42 . Un aggregato peptide1-42 di Aβ può smontare in monomero nella soluzione HFIP. Tuttavia, HFIP è facile da volatilizzarsi, e la viscosità di HFIP è molto bassa. Di conseguenza, peptide Aβ1-42 deve essere disciolto in HFIP e la soluzione HFIP dovrebbe essere aliquotata velocemente come possibile per ridurre la potenziale perdita di HFIP durante l'operazione. Inoltre, le punte di pipetta dovrebbero essere tagliate fuori per garantire accurata pipettaggio in questa procedura. In secondo luogo, gas di azoto ad alta purezza viene utilizzata per evaporare il HFIP dalla soluzione. Durante questa procedura, la soluzione Aβ1-42 deve essere agitata di volta in volta a garantire che la HFIP può essere completamente evaporato. Alla fine di questa procedura, l'odore di HPIF non dovrebbe essere rilevato nella soluzione. Normalmente, 30 min di evaporazione riduce la concentrazione di HFIP a meno dello 0,1%. A questa concentrazione, HFIP è segnalato di non alterare la transizione di conformazione di Aβ1-427. In terzo luogo, durante la preparazione di campioni contenenti oligomero Aβ1-42 , il volume minimo del liquido deve essere maggiore di 50 µ l. in caso contrario, i campioni sono probabili a disperdersi in piccole goccioline, fissaggio a parete dei tubi. Inoltre, monomero Aβ1-42 non può formarsi oligomero senza un'accurata miscelazione.
Il protocollo per preparare un campione Aβ1-42 oligomero-ricchi come descritto qui è leggermente diverso da alcuni protocolli utilizzati in altri gruppi. Ad esempio, in alcuni studi, HFIP era evaporata prima di aggiungere acqua bidistillata in soluzione8,9. Tuttavia, in tale condizione, il peptide1-42 di Aβ può formare piccoli fogli, che sono difficili da sciogliere nella soluzione. Pertanto, abbiamo scelto di aggiungere acqua bidistillata prima e poi evaporare il HFIP di gas azoto. La cosa più importante, forme oligomeriche di aggregati preparati da questo protocollo sono confermati dal TEM. Inoltre, oligomero Aβ1-42 formata da questo protocollo potrebbe indurre neurotossicità in SH-SY5Y cellule e neuroni hippocampal primari e ridurre la prestazione conoscitiva dopo l'iniezione nella regione hippocampal di topi, suggerendo che la Aβ1-42 oligomero preparato è abbastanza tossico5,10. Questi risultati sono coerenti con precedenti studi11.
Questo protocollo per valutare oligomero di A11-positivi Aβ1-42 di un'analisi macchiante dot ha ancora alcune lacune. In primo luogo, mediante campionamento manuale, non è facile mantenere le goccioline di dimensioni uniformi. In secondo luogo, un punto di analisi macchiante è un semi-quantitativa ma non quantitativo metodo per misurare la quantità di oligomero di A11-positivi Aβ1-42 , suggerendo che altri metodi, come ELISA, sono necessarie se la valutazione accurata della quantità di Aβ 1-42 oligomero è necessario. In terzo luogo, alcuni farmaci possono reagire agli anticorpi, che conduce a risultati falsi positivi.
In generale, abbiamo fornito un protocollo affidabile per preparare campioni contenenti oligomero di A11-positivi Aβ1-42 e per analizzare la quantità di oligomero di A11-positivi Aβ1-42 utilizzando un dot blotting analisi. Utilizzando questo protocollo, potenziale oligomero Aβ1-42 inibitori con il potenziale di trattare AD potrebbero essere proiettati efficacemente.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal National Natural Science Foundation of China (U1503223, 81673407, 21475131), il progetto di ricerca applicata su tecnologia senza scopo di lucro della provincia del Zhejiang (2016C 37110), Ningbo internazionale di scienza e tecnologia Progetto di cooperazione (2014D 10019), Ningbo comunale Innovation Team del Life Science e salute (2015C 110026), Ningbo Sci & Tech progetto per ricchezza comune (2017C 50042), il Li Dak somma Yip Yio mento Kenneth Li Marine biofarmaceutica Development Fund, e del fondo di K. C. Wong Magna a Ningbo University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A11 (ab126892 Rb pAb to Amyloid Oligomers) | Abcam | GR91739-58 | |
| 6E10 (beta-Amyloid Rabbit Ab) | Cell Signalling Technology | 2454S | |
| OC (Anti-Amyloid Fibrils OC Antibody) | Millipore | AB2286 | |
| Horseradish Peroxidase (HRP) Marker Goat anti rabbit IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| Aβ1-42 | GL Biochem | 52487 | |
| 1,1,1,3,3,3-Hexafiuoro-2-propanol | Aladdin | I1523078 | |
| Curcumin | Sigma | C1386 | |
| Albumin Bovine V | Solarbio | A8020 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | D920BA0003 | |
| Sodium dodecyl sulfate | SCR | 30166428 | |
| TRIS | Solarbio | T8060 | |
| Glycine | Solarbio | G8200 | |
| Dimethyl sulfoxide | Solarbio | D8370 | |
| 5×nondenaturing gel PAGE Protein Marker | Beyotime | P0016 | |
| Genshare CFAS anyKD PAGE | Genshare | JC-PE022 | |
| Pure Nitrocellulose Blotting Membrane | Pall Corporation | T50189 | |
| Methanol | SCR | 10014118 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Super low range protein Marker | Solarbio | PR1300 | |
| Transfer Membranes | Immobilon-PSQ | ISEQ00010 | |
| BeyoECL Star | Beyotime | P0018A | |
| Commassie Blue Fast staining solution | Beyotime | P0017 | |
| All - automatic chemiluminescence imaging system | Tanon | Tanon 5200 | |
| Image J | National Institutes of Health | ||
| Image processing software | Adobe | Photoshop CS6 | |
| Magnetic agitator | Shanghai Huxi |
References
- Lauren, J. Cellular prion protein as a therapeutic target in Alzheimer's disease. Journal of Alzheimer's Disease. 38 (2), 227-244 (2014).
- De Maio, A., Rivera, I., Cauvi, D. M., Arispe, N. Modulation of amyloid peptide oligomerization and toxicity by extracellular Hsp70. Biophysical Journal. 112 (3), 444 (2017).
- Di Scala, C., Chahinian, H., Yahi, N., Garmy, N., Fantini, J. Interaction of Alzheimer's beta-amyloid peptides with cholesterol: mechanistic insights into amyloid pore formation. Biochemistry. 53 (28), 4489-4502 (2014).
- Xiang, S. Y., et al. Fucoxanthin inhibits beta-amyloid assembly and attenuates beta-amyloid oligomer-induced cognitive impairments. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (20), 4092-4102 (2017).
- Chang, L., et al. Protection against beta-amyloid-induced synaptic and memory impairments via altering beta-amyloid assembly by bis(heptyl)-cognitin. Scientific Reports. 5, 10256 (2015).
- Yam, G. H. F., et al. In vitro amyloid aggregate forming ability of TGFBI mutants that cause corneal dystrophies. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (9), 5890-5898 (2012).
- Tomaselli, S., et al. The alpha-to-beta conformational transition of Alzheimer's A beta-(1-42) peptide in aqueous media is reversible: A step by step conformational analysis suggests the location of beta conformation seeding. ChemBioChem. 7 (2), 257-267 (2006).
- Shigemitsu, Y., et al. Nuclear magnetic resonance evidence for the dimer formation of beta amyloid peptide 1-42 in 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol. Analytical Biochemistry. 498, 59-67 (2016).
- Khan, M. V., Rabbani, G., Ahmad, E., Khan, R. H. Fluoroalcohols-induced modulation and amyloid formation in conalbumin. International Journal of Biological Macromolecules. 70, 606-614 (2014).
- Fang, F., et al. 5-hydroxycyclopenicillone, a new beta-amyloid fibrillization inhibitor from a sponge-derived fungus trichoderma sp HPQJ-34. Marine Drugs. 15 (8), 260 (2017).
- Shiao, Y. J., Su, M. H., Lin, H. C., Wu, C. R. Echinacoside ameliorates the memory impairment and cholinergic deficit induced by amyloid beta peptides via the inhibition of amyloid deposition and toxicology. Food & Function. 8 (6), 2283-2294 (2017).
