Summary
Det här protokollet beskriver hur att förbereda Aβ oligomerer från en syntetisk peptid i vitro och utvärdera relativa mängder av Aβ oligomerer av en prick blotting analys.
Abstract
Β-amyloid (Aβ) är en hydrofoba peptid med en inneboende tendens att själv montera i aggregat. Bland olika aggregat, Aβ oligomer är allmänt accepterat som den ledande nervgift i utvecklingen av Alzheimers sjukdom (AD) och anses vara den avgörande händelsen i patogenesen av AD. Därför Aβ oligomer hämmare kan förhindra neurodegeneration och har potential att utvecklas som sjukdomsmodifierande behandlingar av AD. Olika bildandet protokoll av Aβ oligomer kan dock leda till oligomerer med olika egenskaper. Dessutom finns det inte många metoder för att effektivt skärmen Aβ1-42 oligomer-hämmare. En A11 antikropp kan reagera med en delmängd av giftiga Aβ1-42 oligomer med anti parallell β-ark strukturer. I detta protokoll beskriver vi hur att förbereda en A11-positiv Aβ1-42 oligomer-rika prov från en syntetisk Aβ1-42 peptid i vitro och utvärdera relativa belopp för A11-positiv Aβ1-42 oligomer i prover av en dot blotting analys med A11 och Aβ1-42-specifika 6E10 antikroppar. Användning av detta protokoll, kan hämmare av A11-positiv Aβ1-42 oligomer också undersökas från semikvantitativt experimentella resultat.
Introduction
Alzheimers sjukdom (AD) är en av de viktigaste neurodegenerativa sjukdomar som drabbar äldre människor världen över1. Det är allmänt accepterat att onormala sammanläggning av β-amyloid (Aβ) kan vara den ledande patologiska faktorn av AD. Aβ-aggregat är huvudkomponenterna i senila plack, en av de biologiska markörerna i hjärnan hos AD-patienter. Dessutom producerar Aβ aggregat, inklusive oligomerer särskilt potent neurotoxicitet, som kan vara den neuronala dödsorsaken som AD fortskrider. Därför hämning av Aβ oligomer bildandet kan förebygga neurodegeneration och Aβ oligomer hämmare skulle kunna utvecklas som sjukdomsmodifierande behandlingar av AD. Många studier har använt en syntetisk Aβ-peptid för att bilda oligomerer i vitro, utforska morfologier och strukturer av konstgjorda Aβ oligomerer och undersöka hämmare av Aβ oligomer med in vitro- modeller2,3 , 4. dock olika in vitro- bildandet protokoll av Aβ oligomer kan leda till oligomer med olika morfologiska kännetecken, som kan orsaka de ojämförliga resultat bland olika forskargrupper. Därför är ett standard bildandet protokoll för Aβ oligomer brådskande.
Tills nu, har inte många metoder rapporterats att direkt detektera Aβ oligomerer. Överföring elektronisk microscopy (TEM), icke-denatureringen gelelektrofores, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) och dot blotting analys kan användas för att undersöka de belopp och/eller morfologi av Aβ oligomer in vitro-5, 6. exempel på Morfologi och struktur av Aβ oligomer kan observeras i TEM. Den relativa belopp och molekylär storlek av Aβ aggregeringar kunde mätas med icke-denatureringen gelelektrofores. ELISA kunde användas för att bestämma Aβ oligomer i serum, plasma och extrakt från hjärnvävnaden. Slutligen kunde dot blotting analys, en teknik som används för att upptäcka, analysera och identifiera proteiner, användas för att utvärdera den relativa koncentrationen av Aβ oligomer i olika prover med hjälp av oligomer-specifika och Aβ-specifika antikroppar. Dessutom erbjuder en prick blotting assay betydande tidsvinst, gelelektrofores och blotting förfarandena för geler inte krävs. Denna analys används därför normalt att skärmen potentiella Aβ oligomer inhibitorer. Det övergripande målet med detta protokoll är att beskriva en relativt enkla, tillförlitliga och reproducerbara metod för att förbereda en Aβ1-42 oligomer-rika prov, att analysera belopp av Aβ1-42 oligomer dot blotting analys och att skärmen Aβ oligomer -hämmare med semikvantitativ experimentella resultat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. lösningen förberedelse
Obs: Se Tabell av material för reagens källor.
- Bered en 5% bovint serumalbumin (BSA) genom att lägga till 5 g av BSA 100 mL dubbeldestillerat vatten. Blanda dem helt av vortexa dem. Förvara lösningen vid 4 ° C i upp till 1 månad.
- Bered en anti oligomer antikropp A11 (1:1, 000) genom att lägga till 10 µL av antikropp stamlösning till 10 mL av 5% BSA lösningen. Blanda dem helt av vortexa dem. Förvara lösningen vid 4 ° C i upp till 1 månad.
- Bered en anti-Aβ antikropp 6E10 (1:1, 000) genom att lägga till 10 µL av antikropp stamlösning 10 mL 5% BSA lösning. Blanda dem helt av vortexa. Förvara lösningen vid 4 ° C i upp till 1 månad.
- Bered en anti-fibrillar oligomer antikropp OC (1:1, 000) genom att lägga till 10 µL av antikropp stamlösning 10 mL 5% BSA lösning. Blanda dem helt av vortexa. Förvara lösningen vid 4 ° C i upp till 1 månad.
- Bered en Tris-buffrad koksaltlösning (TBS) lager genom att lägga till 24 g Tris base och 88 g NaCl 1000 mL dubbeldestillerat vatten. Justera pH till 7,4. Förvara lösningen vid 4 ° C i upp till 3 månader.
- Förbereda en Tris-buffrad koksaltlösning och Tween-20 (TBST) lösning genom att tillsätta 1 mL Tween-20 till 100 mL av TBS lager lösning och 900 mL dubbeldestillerat vatten.
- Förbereda en sekundär antikropp-lösning genom att lägga till 10 µL av pepparrot peroxidas (HRP) get anti-kanin IgG (H + L) till 10 mL TBST lösning. Blanda dem helt av vortexa dem. Förvara lösningen vid 4 ° C i upp till 1 månad.
- Lös 3.68 g curcumin i 1 mL av dimetyl sulfoxid (DMSO) att bilda en 10 mM curcumin stamlösning.
- Lös 5 mg av syntetiska Aβ1-42 i 2 mL 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (Bovallstrand) att bilda en 2,5 mg/mL Aβ monomeren lösningen. Placera den i rumstemperatur (25 ° C) för 20 min. gör 100 µL portioner och förvaras vid-20 ° C i upp till 6 månader.
Obs: Denna procedur ska köras så fort som möjligt. Pipettspetsarna bör skäras av för att säkerställa korrekt pipettering. - Förbereda elektrokemiluminescens (ECL) vätska genom att blanda ECL vätska A och B med en volymförhållandet 1:1. Denna lösning bör beredas omedelbart före användning.
2. provberedning
Obs: Utföra provberedningen 2 dagar före punkten blotting analys.
- Tillsätt 900 µL dubbeldestillerat vatten till en tub av Aβ1-42 monomeren lösningen; koncentrationen av Aβ1-42 blir 0,25 mg/mL. Lägg blandningen i rumstemperatur i 20 min.
- Indunsta lösningen med hög renhet kvävgas tills dess volym är ca 850 µL. Koncentrationen av Aβ1-42 lösningen kommer att handla om 0,29 mg/mL.
Obs: Lösningen ska skakas från tid till att säkerställa Bovallstrand är helt avdunstat. Normalt, efter 30 min av avdunstning är volymen av den återstående lösningen ca 850 µL. - Späd curcumin stamlösning till en curcumin fungerande lösning (0,2 och 2 µM) med dubbeldestillerat vatten. Blanda Aβ1-42lösning och curcumin arbetar lösning med volymförhållandet 1:1. Den slutliga koncentrationen av curcumin blir 0,1 och 1 µM.
Obs: Potentiella oligomer inhibitorer kan blandas med lösningen Aβ1-42 i något förhållande om det behövs. - Skaka lösningen kontinuerligt i en magnetisk omrörare (se Tabell för material).
- Fixa en plast divider låda till den magnetiska omröraren. Plats 2 magnetiska rör barer på 2 hörn av rutan och placera provrör i mitten av rutan.
- Skaka rutan i rumstemperatur (25 ° C) i 48 h.
Obs: Hastigheten på den magnetiska Omröraren är omkring 60 rpm.
- Centrifugera rören under 15 minuter vid 4 ° C och 18.000 x g. samla supernatanten.
3. dot Blotting analys
Obs: Alla inkubationer utförs på en horisontell shaker.
- Skär nitrocellulosa membran i 1 cm breda strimlor.
Obs: Bredden på nitrocellulosa membranet kan justeras enligt experimentella behov. - Placera 2-µL prov jämnt på 2 remsor (remsa 1 och 2) med varje punkt intervall på 0,5 cm.
- Placera remsorna i rumstemperatur i 5 min tills droplet-programmet på bandet är torr.
- Inkubera remsor med en 5% BSA lösning under 30 minuter vid rumstemperatur.
- Skölj remsorna med en TBST lösning för 5 min i rumstemperatur.
- Aspirera TBST lösningen. För 1 h i rumstemperatur, inkubera remsor 1 med en anti oligomer antikropp A11 lösning och band 2 med en anti-Aβ antikropp 6E10 lösning.
- Skölj remsorna med en TBST lösning tre gånger, varje gång under 5 minuter i rumstemperatur.
- Aspirera TBST lösningen. Inkubera remsor med en sekundär antikropp lösning för 40 min i rumstemperatur.
- Skölj remsorna med en TBST lösning tre gånger, varje gång under 5 minuter i rumstemperatur.
- Jämnt applicera den blanda ECL vätskan på ytan av remsorna. Exponera remsorna i en automatisk chemiluminescence imaging system (se Tabell för material).
Obs: Normalt 300 µL av ECL vätska är tillräckligt för en membran. Membranet måste hållas fuktig under exponeringen. Exponeringstiden beräknas automatiskt av systemet för bildbehandling. - Göra en gråskala analys med hjälp av ImageJ (National Institutes of Health) eller en annan bildbehandling programvara för att få Halvkvantitativa resultat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att undersöka huruvida en Aβ1-42 monomer kan bilda en Aβ1-42 oligomer efter beredning, användes TEM analys. Inga synliga aggregat observerades i Bovallstrand-upplöst Aβ1-42 monomer provet (figur 1A). Dessutom främst klotformiga aggregat med en diameter på runt 10-80 nm observerades i Aβ1-42 provet efter 48 h av skakningar, vilket tyder på att Aβ1-42 bildar oligomerer efter beredning (figur 1B).
Figur 1 . TEM analys av Aβ1-42 monomer och Aβ1-42 oligomer-rika prover. Bovallstrand-upplöst Aβ1-42 monomer provet (10 µM) och Aβ1-42 oligomer-rika provet (10 µM) upprättad enligt detta protokoll granskades av TEM. Skalstapeln = 200 nm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Dessutom användes dot blotting analys för att utvärdera de relativa mängder av Aβ1-42 oligomer i proven. En A11 antikropp kan reagera med en delmängd av giftiga Aβ oligomer med anti parallell β-ark strukturer. En OC-antikropp reagerar med fibrillar aggregat med parallella i-register β-ark strukturer. Med hjälp av dessa antikroppar, vi visat att A11-positiv Aβ1-42 oligomerer, men inte OC-positiv Aβ1-42 fibrillar aggregat, främst synts i de Aβ1-42 oligomer-rika prov som förberetts enligt det protokoll ( (Se figur 2). Med hjälp av den anti-Aβ antikropp 6E10, observerade vi att antalet Aβ1-42 peptider var liknande i Bovallstrand-upplöst Aβ1-42 monomer provet och Aβ1-42 oligomer-rika provet (figur 2).
Figur 2 . Dot blotting analys av Aβ1-42 monomer och Aβ1-42 oligomer-rika prover. (A), The Bovallstrand-upplöst Aβ1-42 monomer prov (10 µM) och Aβ1-42 oligomer-rika provet (10 µM) upprättad enligt detta protokoll granskades av dot blotting analys med anti oligomer antikroppen A11, anti-fibrillar Oligomer antikropp OC och anti-Aβ antikropp 6E10. (B - D) semikvantitativ analys av gråskala utfördes av ImageJ. Data, uttryckt som en procentandel av kontroll, var det medelvärde ± SEM 3 oberoende experiment; *** p < 0,001 vs. gruppen Aβ1-42 monomer (ANOVA och t-test). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
För att ytterligare undersöka om detta protokoll kan användas till skärmen hämmare av Aβ1-42 oligomerer, curcumin, användes en känd Aβ oligomer hämmare. Vi fann att en samtidig inkubering med curcumin (0,1 - 1 µM) reducerade signifikant de relativa belopp för A11-positiv Aβ1-42 oligomer, vilket framgår av den minskade färgning av A11 i curcumin Co ruvade Aβ1-42 oligomer provet än i den normala ruvade Aβ1-42 oligomer-rika prov (figur 3). På samma villkor, curcumin (0,1 - 1 µM) förändrade inte antalet Aβ1-42 peptider, som färgningen av 6E10 var även i alla prover (figur 3).
Figur 3 . Dot blotting analys av curcumin Co ruvade Aβ1-42 oligomer-rika prover. (A), Bovallstrand-upplöst Aβ1-42 monomerer (10 µM) utarbetades enligt detta protokoll och inkuberas med eller utan curcumin (0, 0,1, 1 µM) under skakar för 48 h. Proverna undersöktes av en prick blotting analys med A11 och 6E10. (B) semikvantitativt gråskala analysen utfördes av ImageJ. Data, uttryckt som en procentandel av kontroll, var det medelvärde ± SEM 3 oberoende experiment; *** p < 0,001 vs. Aβ1-42 gruppen som enbart (ANOVA och Tukey's test). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
För att verifiera oligomer bildandet, har vi också använt en icke-denatureringen gel. Vi hittade den oligomer (> 4 KD) var i Aβ1-42 oligomer-rika provet, medan de flesta monomer (4 KD) hittades i Aβ1-42 monomer provet (Figur S1).
Vi har undersökt Aβ-aggregat i supernatanten och pellets av Aβ1-42 provet. Efter 48 h för inkubation hittades Aβ1-42 oligomer men inte Aβ1-42 fibrillar aggregat i supernatanten av provet som bestäms av A11, OC och 6E10 antikroppar (Figur S2). På samma villkor hittades Aβ1-42 fibrillar aggregat men inte Aβ1-42 oligomerer i pelleten av provet (Figur S2).
Vi har även granskat morfologi av curcumin-behandlade Aβ1-42 provet med hjälp av TEM. Curcumin-behandlade provet innehåller några sfäriska ställen, vilket tyder på att curcumin kan minska mängden av Aβ1-42 oligomer (Figur S3).
Figur S1 . Icke-denatureringen gelelektrofores analys av Aβ1-42 monomer och Aβ1-42 oligomer-rika prover. Bovallstrand-upplöst Aβ1-42 monomer provet (10 µM) och Aβ1-42 oligomer-rika provet (5 µM, låg, 10 µM, hög) upprättad enligt detta protokoll granskades av icke-denatureringen gelelektrofores använder den anti-Aβ antikropp 6E10. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur S2 . Supernatanten av Aβ1-42 lösning innehåller främst oligomer, men inte fibrillar aggregat. En Aβ1-42 lösning (50 µL), var efter omskakning för 48 h, centrifugeras vid 18.000 x g i 10 min. Supernatanten samlades och pelleten var åter löses i 850 µL dubbeldestillerat vatten. De supernatanten och pellet undersöktes ytterligare genom en dot blot analys med hjälp av OC, A11 och 6E10 antikroppar. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur S3 . TEM analys av curcumin Co inkuberas Aβ1-42 oligomer-rika prover. Bovallstrand-upplöst Aβ1-42 monomerer (10 µM) var upprättad enligt detta protokoll och inkuberas med 1 µM curcumin under skakar för 48 h. Proverna undersöktes av TEM. Skalstapeln = 100 nm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I detta protokoll, har vi rapporterat en metod att förbereda prover som innehåller Aβ1-42 oligomer och analysera mängder A11-positiv Aβ1-42 oligomerer av en prick blotting analys. Även om våra metoder för beredning av Aβ1-42 oligomer-rika prover är ganska enkla, tillförlitliga och reproducerbara, finns det fortfarande några punkter att märkas. För det första används Bovallstrand att upplösa den syntetiska Aβ1-42 peptiden. En aggregerad Aβ1-42 peptid kan demontera till monomer i Bovallstrand lösningen. Dock Bovallstrand är lätt att avdunsta, och viskositeten hos Bovallstrand är mycket låg. Därför Aβ1-42 peptiden skall upplösas i Bovallstrand och Bovallstrand lösningen ska aliquoted så fort som möjligt för att minska den potentiella förlusten av Bovallstrand under operationen. Dessutom bör pipettspetsarna skäras av för att säkerställa korrekt pipettering i detta förfarande. För det andra, hög renhet kvävgas används avdunsta i Bovallstrand från lösningen. Under den här proceduren skakas Aβ1-42 lösningen från tid till att se till att Bovallstrand kan vara helt avdunstat. I slutet av proceduren, skall lukten av HPIF kunna påvisas i lösningen. Normalt minskar 30 min av avdunstning koncentrationen av Bovallstrand till mindre än 0,1%. Vid denna koncentration rapporteras Bovallstrand inte att ändra konformation övergången av Aβ1-427. För det tredje, när du förbereder prover som innehåller Aβ1-42 oligomer, den minsta volymen vätska bör vara större än 50 µL. annars proven är sannolikt att skingra i små droppar, fästa i väggen av rören. Dessutom kan inte Aβ1-42 monomer bilda oligomer utan en omsorgsfull blandning.
Protokollet till förbereda en Aβ1-42 oligomer-rika prov som beskrivs här är lite annorlunda från vissa protokoll som används i andra grupper. Till exempel i vissa studier, var Bovallstrand avdunstat innan du lägger till dubbeldestillerat vatten till lösning8,9. Dock i sådant skick, kan Aβ1-42 peptiden bilda små ark, som är svåra att lösa upp i lösningen. Därför valde vi att lägga dubbeldestillerat vatten först, och sedan avdunsta i Bovallstrand av kvävgas. Viktigast av allt, bekräftas Oligomera former av aggregat som utarbetats av detta protokoll av TEM. Dessutom Aβ1-42 oligomer bildas av detta protokoll kan framkalla neurotoxicitet i SH-SY5Y celler och primära Hippocampus nervceller och minska kognitiva prestanda efter injektion i regionen Hippocampus av möss, tyder på att Aβ1-42 Oligomer beredd är ganska giftig5,10. Dessa resultat överensstämmer med tidigare studier11.
Detta protokoll att utvärdera A11-positiv Aβ1-42 oligomer genom dot blotting analys har fortfarande vissa brister. För det första genom att använda manuell provtagning, är det inte lätt att hålla droppar enhetlig storlek. För det andra, en prick blotting analys en semikvantitativ men inte kvantitativ metod för att mäta mängden A11-positiv Aβ1-42 oligomer, vilket tyder på att andra metoder, såsom ELISA, behövs om korrekt utvärdering av mängder av Aβ1-42 oligomer är nödvändigt. För det tredje, vissa droger kan reagera på antikroppar, vilket leder till falskt positiva resultat.
I allmänhet har vi tillhandahållit en pålitligt protokoll att förbereda prover som innehåller A11-positiv Aβ1-42 oligomer och analysera mängder A11-positiv Aβ1-42 oligomer med hjälp av en prick blotting assay. Med hjälp av detta protokoll, potentiella Aβ1-42 oligomer kan hämmare med potential att behandla AD kontrolleras effektivt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete stöds av bidrag från National Natural Science Foundation i Kina (U1503223, 81673407, 21475131), forskningsprojektet tillämpas på ideell teknik i Zhejiangprovinsen (2016C 37110), Ningbo International vetenskap och teknik Samarbetsprojekt (2014D 10019), Ningbo kommunala Innovation Team av Life Science och hälsa (2015C 110026), Ningbo Sci & Tech projekt för Common Wealth (2017C 50042), Li Dak summan Yip Yio hakan Kenneth Li Marine biofarmaceutiska utvecklingsfonden, och K. C. Wong Magna fonden vid Ningbo universitet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A11 (ab126892 Rb pAb to Amyloid Oligomers) | Abcam | GR91739-58 | |
| 6E10 (beta-Amyloid Rabbit Ab) | Cell Signalling Technology | 2454S | |
| OC (Anti-Amyloid Fibrils OC Antibody) | Millipore | AB2286 | |
| Horseradish Peroxidase (HRP) Marker Goat anti rabbit IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| Aβ1-42 | GL Biochem | 52487 | |
| 1,1,1,3,3,3-Hexafiuoro-2-propanol | Aladdin | I1523078 | |
| Curcumin | Sigma | C1386 | |
| Albumin Bovine V | Solarbio | A8020 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | D920BA0003 | |
| Sodium dodecyl sulfate | SCR | 30166428 | |
| TRIS | Solarbio | T8060 | |
| Glycine | Solarbio | G8200 | |
| Dimethyl sulfoxide | Solarbio | D8370 | |
| 5×nondenaturing gel PAGE Protein Marker | Beyotime | P0016 | |
| Genshare CFAS anyKD PAGE | Genshare | JC-PE022 | |
| Pure Nitrocellulose Blotting Membrane | Pall Corporation | T50189 | |
| Methanol | SCR | 10014118 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Super low range protein Marker | Solarbio | PR1300 | |
| Transfer Membranes | Immobilon-PSQ | ISEQ00010 | |
| BeyoECL Star | Beyotime | P0018A | |
| Commassie Blue Fast staining solution | Beyotime | P0017 | |
| All - automatic chemiluminescence imaging system | Tanon | Tanon 5200 | |
| Image J | National Institutes of Health | ||
| Image processing software | Adobe | Photoshop CS6 | |
| Magnetic agitator | Shanghai Huxi |
References
- Lauren, J. Cellular prion protein as a therapeutic target in Alzheimer's disease. Journal of Alzheimer's Disease. 38 (2), 227-244 (2014).
- De Maio, A., Rivera, I., Cauvi, D. M., Arispe, N. Modulation of amyloid peptide oligomerization and toxicity by extracellular Hsp70. Biophysical Journal. 112 (3), 444 (2017).
- Di Scala, C., Chahinian, H., Yahi, N., Garmy, N., Fantini, J. Interaction of Alzheimer's beta-amyloid peptides with cholesterol: mechanistic insights into amyloid pore formation. Biochemistry. 53 (28), 4489-4502 (2014).
- Xiang, S. Y., et al. Fucoxanthin inhibits beta-amyloid assembly and attenuates beta-amyloid oligomer-induced cognitive impairments. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (20), 4092-4102 (2017).
- Chang, L., et al. Protection against beta-amyloid-induced synaptic and memory impairments via altering beta-amyloid assembly by bis(heptyl)-cognitin. Scientific Reports. 5, 10256 (2015).
- Yam, G. H. F., et al. In vitro amyloid aggregate forming ability of TGFBI mutants that cause corneal dystrophies. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (9), 5890-5898 (2012).
- Tomaselli, S., et al. The alpha-to-beta conformational transition of Alzheimer's A beta-(1-42) peptide in aqueous media is reversible: A step by step conformational analysis suggests the location of beta conformation seeding. ChemBioChem. 7 (2), 257-267 (2006).
- Shigemitsu, Y., et al. Nuclear magnetic resonance evidence for the dimer formation of beta amyloid peptide 1-42 in 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol. Analytical Biochemistry. 498, 59-67 (2016).
- Khan, M. V., Rabbani, G., Ahmad, E., Khan, R. H. Fluoroalcohols-induced modulation and amyloid formation in conalbumin. International Journal of Biological Macromolecules. 70, 606-614 (2014).
- Fang, F., et al. 5-hydroxycyclopenicillone, a new beta-amyloid fibrillization inhibitor from a sponge-derived fungus trichoderma sp HPQJ-34. Marine Drugs. 15 (8), 260 (2017).
- Shiao, Y. J., Su, M. H., Lin, H. C., Wu, C. R. Echinacoside ameliorates the memory impairment and cholinergic deficit induced by amyloid beta peptides via the inhibition of amyloid deposition and toxicology. Food & Function. 8 (6), 2283-2294 (2017).
