Summary
ICP0 gjennomgår kjernefysiske-til-cytoplasmatiske translokasjon under HSV-1-infeksjon. Molekylær mekanismen av denne hendelsen er ikke kjent. Her beskriver vi bruk av AC confocal mikroskop som et verktøy for å kvantifisere ICP0 bevegelse i HSV-1-infeksjon, som legger grunnlaget for kvantitativt analysere ICP0 translokasjon i fremtidige mekanistisk studier.
Abstract
Infiserte cellen protein 0 (ICP0) av herpes simplex virus 1 (HSV-1) er en umiddelbar tidlig protein inneholder en RING-type E3 ubiquitin ligase. Det er ansvarlig for proteasomal nedbrytning av vert faktorer for restriktiv og påfølgende viral genet aktivering. ICP0 inneholder en kanoniske kjernefysiske lokalisering sekvens (NLS). Det går inn i kjernen umiddelbart etter de novo syntese og utfører sine anti-vert forsvar funksjoner i kjernen. Men senere i infeksjon, er ICP0 funnet utelukkende i cytoplasma, tyder forekomsten av en kjernefysisk-til-cytoplasmatiske translokasjon under HSV-1-infeksjon. Antagelig kan ICP0 translokasjon ICP0 til å modulere funksjonene i henhold til subcellular steder i ulike infeksjon faser. For å avgrense den biologiske funksjonen og regulatoriske mekanisme ICP0 kjernefysiske-til-cytoplasmatiske translokasjon, endret vi en immunofluorescent mikroskopi metode for å overvåke ICP0 smugling under HSV-1-infeksjon. Denne protokollen innebærer immunofluorescent flekker, AC confocal mikroskop tenkelig og kjernefysiske vs cytoplasmatiske distribusjon analyse. Målet med denne protokollen er å tilpasse steady state AC confocal bilder tatt i en tid kurs i en kvantitativ dokumentasjon ICP0 bevegelse gjennom lytisk infeksjonen. Vi foreslår at denne metoden kan generaliseres kvantitativt analysere kjernefysiske vs cytoplasmatiske lokalisering av andre virus eller cellular proteiner uten å involvere live bildeteknologi.
Introduction
Herpes simplex virus 1 (HSV-1) fører en rekke av mild til alvorlig postherpetisk sykdommer som herpes labialis, genital herpes, stromal keratitt og encefalitt. En gang infisert, oppretter viruset en livslang latente infeksjon i Ganglion neurons. Noen ganger kan viruset reaktiveres av forskjellige grunner som feber, stress og uimottakelig undertrykkelse1, fører til tilbakevendende herpes infeksjon. Infiserte cellen protein 0 (ICP0) er en viktig viral regulator avgjørende for både lytisk og latente HSV-1-infeksjon. Det transactivates nedstrøms virus gener via motvirke vert iboende/medfødte antiviral forsvar2,3. ICP0 har en E3 ubiquitin ligase aktivitet, som mål celle faktorer for proteasome-avhengige fornedrelse3. Det også samhandler med ulike celle stier å regulere sine aktiviteter og senere å kompensere vert antiviral restriksjoner3. ICP0 er kjent for å finne på ulike subcellular avdelinger som infeksjonen går3,4,5. Protein har lysin/arginine-rik kjernefysiske lokalisering signal (NLS) på rester 500 til 5066. På de novo syntese på tidlig HSV-1-infeksjon importeres ICP0 umiddelbart til kjernen. Det er først oppdaget på en dynamisk kjernefysiske struktur kalt kjernefysiske domene 10 (ND10)7. E3 ubiquitin ligase aktiviteten til ICP0 utløser nedbrytning av ND10 organizer proteiner, promyelocytic leukemi (PML) protein og flekkete protein 100 kDa (Sp100)8,9,10. Etter tapet av arrangøren proteiner, ND10 kjernefysiske organer er spredt og ICP0 er diffust for å fylle hele kjernen4,11.
Interessant, etter utbruddet av viral DNA-replikasjon forsvinner ICP0 fra kjernen. Den finnes kun i cytoplasma, tyder forekomsten av en kjernefysisk-til-cytoplasmatiske translokasjon sent i HSV-1-infeksjon4,12. Kravet til DNA-replikasjon innebærer mulige involvering av en sen viral protein(s) å tilrettelegge cytoplasmatiske translokasjon av HSV-1 ICP04,12. Tydeligvis ICP0 handel blant forskjellige rom under infeksjon gir ICP0 til å modulere sin interaksjoner ulike mobilnettet stier i en romlig-temporalt mote, og derfor koordinere dets funksjoner til å justere balansen mellom lytisk og latente HSV-1-infeksjon13. For bedre å forstå ICP0 multifunksjonalitet og samordning av ICP0 funksjonelle domener gjennom lytisk infeksjonen, dissekert vi nøye molekylær grunnlag av dynamisk ICP0 translokasjon12. For å gjennomføre den mekanistiske studier tidligere rapportert12, har vi brukt en immunofluorescent flekker metode for å visualisere ICP0 subcellular lokalisering på ulike infeksjonsstatus under AC confocal mikroskop. Vi har også utviklet en kvantitativ protokoll for å analysere kjernefysiske vs cytoplasmatiske distribusjon av ICP0 ved hjelp av AC confocal programvare. Befolkningen av HSV-1-infiserte celler ble ordnet i infeksjon fasene og utviklingen av ICP0 bevegelse ble analysert, under forskjellige biokjemiske behandlinger12. Her beskriver vi detaljerte protokollen at dokumenter ICP0 translokasjon i HSV-1-infeksjon. Vi foreslår at denne metoden kan bli vedtatt som en generell metode å studere kjernefysiske vs cytoplasmatiske translokasjon for andre virus eller cellular proteiner, som kan tjene som et alternativ til live imaging når live bildebehandling teknikken er uanvendelig grunn problemer som merking metoden, signalet intensitet eller protein overflod.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. celle såing og virusinfeksjon
- På 20-24 h før virusinfeksjon, frø 5 x 104 av menneskelige embryonale lunge (HEL) fibroblast celler eller andre celler bli undersøkt på et 4-brønn 11 mm forskjøvet lysbilde i vekst medium (Dulbeccos endret Eagle Medium (DMEM) med 10% fosterets storfe serum (FBS)). Inkuber cellene på 37 ° C med 5% karbondioksid (CO2).
Merk: Hver vel bør har 70-80% celle confluency på tidspunktet for infeksjon. - På den neste dagen, Fjern vekstmediet og infisere cellene med virus i Medium-199 ved en rekke 4-10 pfu/mobiltelefon. Inkuber virus-infiserte celler 1t på 37 ° C. Holde riste lysbildet under inkubasjonstiden.
- Etter den 1t inkubering, fjerne Medium-199 og supplere med vekst medium.
Merk: Stoffer som forstyrrer forskjellige infeksjon faser kan legges på dette trinnet, eller før viral absorpsjon. - Inkuber virus-infiserte celler på 37 ° C med 5% CO2 lengre infeksjon periode.
2. fiksering og Permeabilization
- Riktig infeksjon gangen raskt vask de infiserte cellene med fosfat-bufret saltvann (PBS) 3 ganger og tilsett 200 μL av 4% paraformaldehyde nylaget i PBS. Inkuber cellene med paraformaldehyde for 8-10 minutter ved romtemperatur å fikse cellene i hver brønn.
- Sug opp paraformaldehyde og vask brønner med 200 μL av PBS for 3 timene. Helt Sug opp PBS etter 3rd vask.
- Tilsett 100 μL av 0,2% ikke-ioniske surfactant hver brønn til permeabilize celler for 5-10 minutter.
- Sug opp den ikke-ioniske surfactant og vask brønner med 200 μL av PBS for 3 timene.
3. immunofluorescent flekker
- Helt Sug opp PBS og tilsett 200 μL blokkerer bufferen (1% bovin serum albumin (BSA) og 5% hest serum i PBS) i hver brønn for å ruge ved romtemperatur 1t eller 4 ° C over natten.
- Legg eksperimentelt bestemt konsentrasjon av primære antistoff (kanin anti-ICP0 polyklonale antistoff12) i blokkering buffer og ruge primære antistoff ved romtemperatur for 2t eller 4 ° C over natten.
- Vask med blokkering buffer 3 ganger med 10 min inkubasjon. Legg til Alexa 594-konjugerte geit anti-kanin sekundære antistoff (1:400 fortynnet i blokkering buffer) og ruge lysbildene ved romtemperatur 1t. Deretter vaskes lysbildene 3 ganger med blokkering buffer med 10 min intervaller.
- Endelig vask lysbildet når med PBS fjerne gjenværende BSA og hest serum.
- Legg en dråpe antifade montering medium med 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) å montere lysbildet og forsegle den med dekkglassvæske bruker gjennomsiktig neglelakk.
4. AC confocal Imaging
- Med en AC confocal mikroskop, angi bølgelengde på 590-650 nm for Alexa 594 og 410-520 nm for DAPI. Velg bildeformat på 1024 x 1024 og linje gjennomsnitt 8 hente høy oppløsning bilder.
- Analysere hver brønn på 4-vel lysbildet under AC confocal mikroskop. Hente representant celle bilder 100 X mål, som vist i figur 1 og figur 2.
- Teller stort antall celler, ta bilder av påfølgende 40 X mål.
Merk: Det krever 5-10 bilder å samle over 200 infiserte celler fra hvert punkt på hver infeksjon. - I hvert eksperiment, ta bilder med konstant AC confocal parametere for alle prøver må sammenlignes.
5. analyse kjernefysiske vs cytoplasmatiske distribusjon
- Åpne prosjekt med AC confocal søknaden programvare. Velg et bilde som cellene trenger for å være tabuleres for kjernefysisk vs cytoplasmatiske distribusjon av ICP0.
- Klikk kategorien "Antall" fra menyen øverst og velg "Sorter ROIs" Verktøy-menyen.
- Tegne en langsgående linje over cellen skal analyseres ved å velge "Trekke linjen" fra menyen øverst.
Merk: Histogrammet vises viser fluorescens intensiteten langs linjen for både ICP0 og DAPI. I histogrammet blå linjen representerer DAPI piksler og markerer grensen til kjernen mens den røde linjen representerer ICP0 piksler. -
Basert på bakgrunnen flekker, sette opp en konstant terskel for ICP0 intensitet til å analysere ICP0 subcellular distribusjon i hvert eksperiment.
- Som eksemplifisert i figur 2, røde signalet i gjennomsnitt er under grensen i regionen kjernefysiske men er over sperregrensen utover blå kantlinjen, kategorisere røde signalet som hovedsakelig ligger i cytoplasma.
- Hvis det røde signalet er over sperregrensen gjennom kjernen og utenfor grensen til blå signal, gruppere røde signalet som kjernen pluss cytoplasmatiske lokalisering.
- Hvis det røde signalet over terskelen i kjernen, men i gjennomsnitt er under den utenfor grensen til blå signal, gruppere røde signalet som kjernefysisk lokalisering.
- Tabulere mer enn 200 infiserte celler fra hver prøve forskjellige infeksjon tid og plot i stolpediagrammet å illustrere ICP0 bevegelse i henhold til tid (Figur 3).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For å forstå molekylær grunnlag og biologiske funksjoner for ICP0 menneskehandel under HSV-1-infeksjon, bruker vi en immunofluorescent mikroskopi metoden for å analysere ICP0 subcellular distribusjon i forskjellige infeksjon faser. Figur 1 viser representant cellene med særegne ICP0 lokalisering som infeksjonen utvikler seg. For å kvantifisere kjernefysiske-til-cytoplasmatiske translokasjon av ICP0, vi analyserer ICP0 distribusjon i forhold til kjernen ved å kategorisere infiserte celler i tre grupper: kjernefysiske lokalisering, cytoplasmatiske lokalisering og kjernefysiske pluss cytoplasmatiske lokalisering ( Figur 2). For å forstå elementer kreves for ICP0 handel under infeksjon, sporer vi ICP0 bevegelser i vill type eller mutant HSV-1 i forskjellige infeksjon faser. Figur 3 viser et eksempel på målingen resultater for subcellular distribusjon av ICP0 på ulike tidspunkt av infeksjon.
Figur 1: dynamisk handel med ICP0 under HSV-1-infeksjon. HEL celler dyrket på 4-vel lysbilder var infisert med prototype HSV-1 (belastning F) på 10 pfu/mobiltelefon. På 1, 5 og 9 h innlegget infeksjon (hpi), var celler fast, permeabilized, og reagerte på kanin anti-ICP0 og mus anti-PML primære antistoffer og deretter reagerte på Alexa 594-konjugerte anti-kanin og Alexa 488-cojugated anti-musen sekundære antistoffer for bildebehandling under 100 X mål. Promyelocytic leukemi (PML) protein fungerer som en markør protein for ND10 kjernefysiske organer, som forsvinner på 5 og 9 hpi på grunn av PML degradering av infeksjon. Skala bar = 10 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: analyse av ICP0 subcellular distribusjon. Venstre panel: med en AC confocal mikroskop, representant celler ble utvidet for å vise langsgående linjen over cellen som definerer regionen rundt (ROI). Høyre panel: fluorescens pixel bakgrunnsintensitetene i Avkastningen var kvantifisert for både ICP0 og DAPI i individuelle celler og illustrert som histogrammer av AC confocal søknaden programvare. En vilkårlig terskelen (grønn linje) ble satt til å gjenspeile den bakgrunnen flekker. Skala bar = 10 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: prosentandel av subcellular fordeling for vill-type og C-terminalen avkortet ICP0. HEL celler var infisert av rekombinant virus med vill-type ICP0 (ICP0 WT) eller C-terminalen avkortet ICP0 (ICP0 C-trunkering) på 4 pfu/mobiltelefon. På angitt tidspunkt, var celler farget og analysert som beskrevet ovenfor. Over 200 celler var ordnet etter ICP0 sted. Prosentdel av celler med kjernefysiske, cytoplasmatiske eller kjernefysiske + cytoplasmatiske ICP0 ble tegnet inn med et regnearkprogram beregning. Dette er en eksemplarisk eksperiment vise at bruker denne metoden, har vi identifisert ICP0 C-terminus som domene kreves for ICP0 kjernefysiske-til-cytoplasmatiske translokasjon. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokollen er brukt til å studere kjernefysiske-til-cytoplasmatiske translokasjon av HSV-1 ICP0. ICP0 gjennomgår subcellular smugling under HSV-1-infeksjon (figur 1). Sannsynlig samhandler ICP0 med ulike celle veier å utføre ulike funksjoner på forskjellige steder. Dette kan ICP0 å finjustere dets funksjoner i tug-of-war med menneske vert13. Men er hvor ICP0 koordinerer flere funksjoner i en romlig-temporalt måte ikke godt studert. Med fluorescerende mikroskopi protokollen beskrevet ovenfor, begynte vi å analysere molekylær grunnlaget for ICP0 kjernefysiske-til-cytoplasmatiske translokasjon. Som nå, har vi identifisert ICP0 C-terminalen 35 aminosyrer som et nødvendig element viktig for denne translokasjon. I fravær av C-terminus, er ICP0 hindret i kjernen gjennom infeksjon (Figur 3). Vi har også funnet at en ICP0 E3 ligase-avhengige kjernefysiske oppbevaring styrke forsinkelser i kjernefysiske-til-cytoplasmatiske translokasjon i U2OS celler12. Videre har vi oppdaget at ICP0 C-terminus og uttrykk for sent virale proteiner samarbeide å overvinne kjernefysiske oppbevaring og tilrettelegge cytoplasmatiske translokasjon12. For tiden bruker vi denne protokollen til skjermen for sent virale proteiner involvert i ICP0 kjernefysiske-til-cytoplasmatiske translokasjon.
Protokollen ble opprinnelig utviklet for å studere dynamisk smugling av ICP0 i HSV-1-infeksjon. Som vist i figur 1, tidlig i HSV-1-infeksjon, colocalized ICP0 med ND10, der flere sentrale komponenter av mobilnettet Begrensende faktorer og ND10 komponenter som PML og Sp1008, er degradert. Etter nedverdigende ND10 viktige bestanddeler, ICP0 diffunderer kjernen og sent i infeksjon, ICP0 er translocated til cytoplasma. Fordi ICP0 gjennomgår de novo syntese på infeksjon, den første protein abundancy er svært lav, og deretter en robust viral syntese vil raskt skjule bevegelsen av noen molekyler, som gjør det vanskelig å spore en enkelt molekyl med Live bildeteknologi. Derfor velger vi bevisst ikke å bruke live bildebehandling. I stedet adoptert vi over protokollen for å studere den stabil stat ICP0 lokaliseringen på ulike infeksjon poeng, som serverte i sporing ICP0 timelige bevegelse i en befolkning på HSV-1-infiserte celler.
En høy signal-til-bakgrunn ratio i AC confocal analyse er to viktige trinn bemerkelsesverdig i den våte-benk delen av denne protokollen. Først kan 4-og forskjøvet lysbildene flere eksempler håndteres på ett enkelt lysbilde. Det sparer mye bruk av dyrebare reagenser som virus og antistoffer. Men fordi volumet i hver brønn er så liten, kan gjenværende buffer ikke helt fjernet under buffer endringer forstyrre den påfølgende reagensen. Derfor i hver skru av bufferen, er en grundig aspirasjon nødvendig før du legger den nye bufferen. Andre, basert på våre erfaringer, omfanget av cellen crosslinking og membran permeabilitet er viktig for klarhet i fluorescens signaler. Vi har satt et empirisk antall 10 min for både paraformaldehyde og ikke-ionisert surfactant behandlinger. Vi fant den tiden mye lengre eller kortere enn 10 min kan redusere signal-til-bakgrunn forholdet. Som vist i figur 1 og figur 2og en tidligere studie12, er profilen oppnådd i vårt forsøk krystallklart. Fremtredende blå signalet som tydelig skiller kjernefysisk grensen er nøkkelen til å fastslå subcellular distribusjon av ICP0. I beregningsorientert del av denne protokollen er en viktig skritt å sette en konstant terskel å fjerne bakgrunnen. En vellykket farging med høy signal-til-bakgrunn ratio er nøkkelen til en lavere terskel linje og bedre signal kontrast. Holder en konstant terskel for alle prøvene i samme forsøket, men er grunnlaget for kvantitative dokumentasjon av ICP0 (figur 2 og Figur 3).
Protokollen kan også tjene som et generelt verktøy å studere subcellular handel for andre virus eller cellular proteiner når en egnet live bildebehandling metode mangler. I live tenkelig teknikk holdes celler på optimale fysiologiske miljø å opprettholde celle metabolske status14,15. En grunnleggende forutsetning for levende celle imaging er fluorescently merke målet protein, som kan oppnås ved fusing målet protein med et fluorescerende koden16, eller for å levere en fluorophore konjugert molekyl bestemt mål protein17 . Uansett kan problemer stige hvis fusjon av fluorescerende koden endres egenskapen target protein eller fluorophore konjugert molekyl har problemer med å krysse cellemembranen. Photobleaching som fører til celle skade i prosessen er en annen bekymring i live bildebehandling18. Derfor fortsette nye strategier for å overvinne begrensning av live bildebehandling å være grensen av teknologiutvikling. Protokollen vi beskrevet her gir timelige analyse av steady state AC confocal bilder, som kan tjene som et verktøy når en skikkelig live bildebehandling metode er tilgjengelig. Metoden er enkel og pålitelig. Det gir klare påvisning av protein subcellular lokalisering med minimum bakgrunn. Bruke AC confocal programvare, er vi kvantitativt analysere andelen celler med ulike distribusjonene av målet protein i en celle befolkning og dokumentere bevegelsen av målet protein i ulike celle faser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Vi takker økonomisk støtte fra en NIH stipend (RO1AI118992) til Haidong Gu. Vi takker mikroskopi, tenkelig & cytometri ressurser (MICR) Core anlegget ved Wayne State University for kundestøtte.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cells and viruses | |||
| Human Embryonic Lung fibroblasts (HEL Cells) | Dr. Thomas E. Shenk (Princeton University) | HEL cells were grown in DMEM supplemented with 10% FBS | |
| HSV-1 viral Stock (Strain F) | Dr. Bernard Roizman Lab | ||
| Medium | |||
| Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) | Invitrogen | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Sigma | F0926-500ml | |
| Medium-199 (10x) | Gibco | 11825-015 | |
| Reagents | |||
| 4- well 11 mm staggered slide | Cel-Line/Thermofisher Scientific | 30-149H-BLACK | |
| 16% Paraformaldehyde solution(w/v) Methanol free | Thermo Scientific | 28908 | |
| Triton X-100 | Fisher reagents | BP151-1C0 | |
| Bovine Serum Abumin (BSA) | Calbiochem | CAS 9048-46-8 | |
| Horse Serum | Sigma | H1270 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, pH7.4) | Dr. Haidong Gu lab | ||
| NaCl | Fisher Bioreagent | BP358-212 | |
| KH2PO4 | Fisher Bioreagent | BP362-500 | |
| KCl | Fisher Scientific | BP366-500 | |
| Na2HPO4 | Fisher Bioreagent | BP332-500 | |
| Blocking buffer (PBS with 1% BSA and 5% Horse serum ) | Dr. Haidong Gu lab | ||
| Rabiit Anti-ICP0 antibody | Dr. Haidong Gu lab | ||
| PML (PG-M3)-Mouse monoclonal IgG | santa Cruz Biotechnology | SC-966 | |
| Alexa Fluor 594-goat anti-rabbit IgG | invitrogen | A11012 | |
| Alexa Fluor 488-goat anti-mouse IgG | invitrogen | A11001 | |
| Vectashield Mouting medium with DAPI | Vector laboratories | H-1200 | |
| Pasteur pipette | Fisher Brand | 13-678-20D | |
| Nail Polish | Sally Hansen | ||
| Equipment | |||
| Confocal Microscope | Leica SP8 | ||
| Confocal Software | Leica LAS X Application suite | ||
| Excel software | Microsoft Excel | ||
| HERAcell 150i CO2 incubator | Thermo Scientific | Order code 51026282 |
References
- Whitley, R., Kimberlin, D. W., Prober, C. G., et al. Pathogenesis and disease. Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. Arvin, A., et al. , Cambridge University Press. Cambridge, UK. (2007).
- Roizman, B., Knipe, D. M., Whitley, R. J., et al. Herpes simplex viruses. Fields' Virology. Knipe, D. M. , 6th Edition, Lippincott-Williams & Wilkins. USA. 1823-1897 (2013).
- Gu, H. Infected cell protein 0 functional domains and their coordination in herpes simplex virus replication. World Journal of Virology. 5 (1), 1-13 (2016).
- Lopez, P., Van Sant, C., Roizman, B. Requirements for the nuclear-cytoplasmic translocation of infected-cell protein 0 of herpes simplex virus 1. Journal of Virology. 75 (8), 3832-3840 (2001).
- Kawaguchi, Y., Van Sant, C., Roizman, B. Herpes simplex virus 1 alpha regulatory protein ICP0 interacts with and stabilizes the cell cycle regulator cyclin D3. Journal of Virology. 71 (10), 7328-7336 (1997).
- Mullen, M. A., Ciufo, D. M., Hayward, G. S. Mapping of intracellular localization domains and evidence for colocalization interactions between the IE110 and IE175 nuclear transactivator proteins of herpes simplex virus. Journal of Virology. 68 (5), 3250-3266 (1994).
- Maul, G. G., Everett, R. D. The nuclear location of PML, a cellular member of the C3HC4 zinc-binding domain protein family, is rearranged during herpes simplex virus infection by the C3HC4 viral protein ICP0. Journal of General Virology. 75 (6), 1223-1233 (1994).
- Chelbi-Alix, M. K., de The, H. Herpes virus induced proteasome-dependent degradation of the nuclear bodies-associated PML and Sp100 proteins. Oncogene. 18 (4), 935-941 (1999).
- Zheng, Y., Samrat, S. K., Gu, H. A Tale of Two PMLs: Elements Regulating a Differential Substrate Recognition by the ICP0 E3 Ubiquitin Ligase of Herpes Simplex Virus 1. Journal of Virology. 90 (23), 10875-10885 (2016).
- Lanfranca, M. P., Mostafa, H. H., Davido, D. J. HSV-1 ICP0: An E3 Ubiquitin Ligase That Counteracts Host Intrinsic and Innate Immunity. Cells. 3 (2), 438-454 (2014).
- Zheng, Y., Gu, H. Identification of three redundant segments responsible for herpes simplex virus 1 ICP0 to fuse with ND10 nuclear bodies. Journal of Virology. 89 (8), 4214-4226 (2015).
- Samrat, S. K., Ha, B. L., Zheng, Y., Gu, H. Characterization of Elements Regulating the Nuclear-to-Cytoplasmic Translocation of ICP0 in Late Herpes Simplex Virus 1 Infection. Journal of Virology. 92 (2), e01673-e01617 (2018).
- Gu, H. What role does cytoplasmic ICP0 play in HSV-1 infection? Future Virology. 13 (6), (2018).
- Ettinger, A., Wittmann, T. Fluorescence live cell imaging. Methods Cell Biology. 123, 77-94 (2014).
- Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. Live-cell microscopy - tips and tools. Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).
- Chudakov, D. M., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. Fluorescent proteins as a toolkit for in vivo imaging. Trends in Biotechnology. 23 (12), 605-613 (2005).
- Teng, K. W., et al. Labeling proteins inside living cells using external fluorophores for microscopy. Elife. 5, e20378 (2016).
- Stephens, D. J., Allan, V. J. Light microscopy techniques for live cell imaging. Science. 300 (5616), 82-86 (2003).
