Summary
Животные модели тяжелого острого панкреатита позволяют изучать патофизиологические изменения на начальной стадии, облегчая наблюдение за эволюцией воспалительных явлений. Здесь мы приводим протокол индукции тяжелого острого билиарного панкреатита ретроградной инфузией таурохолата натрия в проток поджелудочной железы анестезированных мышей C57BL/6.
Abstract
Индукция билиарного острого панкреатита путем инфузии таурохолата натрия широко используется научным сообществом благодаря представлению клинического состояния человека и воспроизведению воспалительных событий, соответствующих наступлению клинического билиарного панкреатита. Тяжесть повреждения поджелудочной железы может быть оценена путем измерения концентрации, скорости и объема введенной желчной кислоты. Это исследование предоставляет обновленный контрольный список материалов и методов, используемых в воспроизведении протокола, и показывает основные результаты этой модели острого панкреатита (АП). Большинство предыдущих публикаций ограничились воспроизведением этой модели на крысах. Мы применили этот метод на мышах, что дает дополнительные преимущества (т.е. наличие арсенала реагентов и антител для этих животных наряду с возможностью работы с генетически модифицированными штаммами мышей), которые могут иметь отношение к исследованию. Для индукции острого панкреатита у мышей мы представляем систематический протокол с определенной дозой 2,5% таурохолата натрия со скоростью инфузии 10 мкл / мин в течение 3 мин у мышей C57BL / 6, которая достигает максимального уровня тяжести в течение 12 ч после индукции и выделяет результаты с результатами, которые подтверждают метод. При практике и технике общее расчетное время, от индукции анестезии до завершения инфузии, составляет 25 минут на животное.
Introduction
У человека наличие желчных камней является наиболее частой причиной панкреатита из-за непроходимости терминального участка холедохала, прерывая течение выделений поджелудочной железы и вызывая интенсивный воспалительный процесс в поджелудочной железе, с повышением концентрации пищеварительных ферментов в сыворотке крови и медиаторов воспаления1,2.
Для объяснения развития острого панкреатита (АП) были предложены две различные теории. Теория «общего канала» предполагает, что камни, присутствующие в желчном пузыре, препятствуют дистальной системе общих желчных протоков, позволяя секреции желчи течь ретроградно в проток поджелудочной железы. Вторая теория (теория «обструкции протоков») предполагает, что обструкция протока поджелудочной железы избытком желчных камней вызывает закупорку потока секреции поджелудочной железы в двенадцатиперстную кишку, вызывая протоковую гипертензию3. Хотя механизмы, приводящие к острому билиарному панкреатиту, до конца не изучены, исходом является интенсивный воспалительный процесс. Извержение пищеварительного фермента и самопереваривание поджелудочной железы приводят к гистопатологическим изменениям, увеличению воспалительных цитокинов (IL-1β, IL-6, TNF-α) в асцитической жидкости и сыворотке крови, увеличению белков острой фазы4,5,6.
Тяжелый острый панкреатит – это состояние, которое заслуживает клинического внимания из-за вовлечения нескольких органов и высокого риска смертности. Животные модели для размножения острого панкреатита (АП) важны, поскольку они объясняют патофизиологические механизмы заболевания и помогают в мониторинге эволюции воспалительных событий, начиная с начальных стадий заболевания. Обычно это невозможно в клиниках2,7. Кроме того, доступ к тканям поджелудочной железы прост в доклинических исследованиях, что способствует выяснению изменений, связанных с клиническими условиями8, наряду с возможностью работы с изогенными видами, устранения нежелательных переменных и отражения клинического сходства с результатами, наблюдаемыми в человеческом состоянии9.
Билиарные и небилиарные модели индукции острого панкреатита у видов крыс и мышей часто изучались в научной литературе. Небилиарные методы индукции включают введение супрамаксимальных стимулирующих доз холецистокинина секретагога или его аналога церулеина10; введение практически летальных доз L-аргинина; или введение диеты с дефицитом холина, дополненной этионином11. Хотя эти методы легко воспроизвести и привести к воспалению поджелудочной железы, они не воспроизводят механизмы, которые теоретически запускают АП (то есть рефлюкс секреции желчи в проток поджелудочной железы). Метод, который обращается к билиарной модели, основан на ретроградной инфузии желчных кислот в проток поджелудочной железы и требует хорошо подготовленных исследователей для выполнения этого протокола. Было опубликовано несколько исследований с использованием этого метода на крысах (по-видимому, по техническим причинам, поскольку эти эксперименты включают хирургические процедуры)12,13. Тем не менее, подход на мышах может предложить более интересные результаты в исследовании воспаления3,14,15. В этом исследовании мы покажем контрольный список шагов, которые необходимо соблюдать для размножения тяжелого острого панкреатита путем инфузии таурохолата натрия у обезболенных мышей C57BL/6.
Для работ, которые предполагают необходимость экспериментов с антителами и анализа экспрессии гена и белка, использование мышей предпочтительнее из-за большего арсенала материалов для этих животных и возможности работы с изогенными и нокаутирующими видами, среди прочих, которые могут быть использованы в отношении исследований16. Мыши C57BL/6 — инбредный штамм мышей, первоначально разработанный для изучения противоопухолевой активности и иммунологии. Этот штамм все чаще предпочитается исследователями за то, что он изогенен, что обеспечивает большую воспроизводимость результатов, что может подразумевать использование меньшего количества животных в эксперименте и меньшую изменчивость результатов между одной и той же группой17,18.
Perides et al. (2010)14 опубликовали протокол индукции АП у мышей путем инфузии таурохолата натрия. Здесь мы обновляем эту модель, используя более высокую концентрацию таурохолата натрия (2,5%) у мышей C57BL/6 с определенным объемом и скоростью инфузии (рисунок 1). Максимальный уровень тяжести достигается в течение 12 ч после индукции у мышей. Повышение концентрации IL-6 как в сыворотке крови, так и в брюшной полости коррелирует с прогрессированием АП. При практике общее расчетное время от индукции анестезии до завершения инфузии, составляет 25 мин на животное. Важно, чтобы этот эксперимент проводил обученный исследователь. Чтобы убедиться, что раствор правильно введен в общий желчный проток, выполните несколько пилотных тренировок с использованием метиленового синего вместо таурохолата натрия.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Этот протокол был одобрен Комитетом по этике использования животных Медицинской школы USP, Num. Проект: 1343/2019-CEUA: FMUSP. Для этого протокола использовали мышей C57BL/6 в возрасте 6 недель с массой тела 20 ± 2 г (n = 9/группа).
1. Лапаротомия
- Обезболивать животных ксилазином (10 мг/кг) и раствором кетамина (80 мг/кг) подкожно (0,1 мл/10 г массы тела) с помощью шприца 1 мл и иглы 13х0,45мм 26г 1/2. Проверьте достаточную глубину анестезии, зажав палец ноги. Контролируйте температуру тела с помощью подогреваемых прокладок. Убедитесь, что все хирургические материалы стерильны.
- Очистите область живота 5% раствором повидона-йода и используйте триммер для удаления волос между грудью и нижней частью живота (примерно 2 см2). Очистите хирургическую область 70% спиртом.
- Обездвижите животное на хирургической доске с помощью хирургической ленты. Ножницами разрезать 5 мм кожи горизонтально, на верхней части живота и на 1 см ниже мечевидного отростка. Повторите разрез на брюшине. Это приведет к лапаротомии с минимальным обнажением полости.
2. Определение местоположения и обнажение поджелудочной железы
- С помощью втягивающего устройства потяните печень к голове мыши, ~ 1 см от кишечника.
- Найдите область поджелудочной железы, в которую будет введен таурохолат натрия (головка поджелудочной железы). Расположите двенадцатиперстную кишку со ссылкой на печень - ниже печени, с правой стороны (слева, когда мышка смотрит). Двенадцатиперстная кишка является первой частью тонкой кишки и соединена с конечной частью желудка.
- С помощью щипцов поднимите печень к голове животного и осторожно потяните участок тонкой кишки. Зафиксируйте два боковых конца тонкой кишки полипропиленовым швом 6-0, чтобы лучше рассмотреть дистальную часть общего желчного протока.
3. Индукция тяжелого острого панкреатита
- Временно закупорите проксимальный общий желчный проток микрососудом, чтобы предотвратить утечку ретроградной инфузии в печень. Общий желчный проток можно увидеть на стороне печени двенадцатиперстной кишки, и его соединение с двенадцатиперстной кишкой будет казаться белым. Обнажите орган вне брюшной полости.
- Проколите периампулярную область (белесую часть стенки тонкой кишки) для доступа к общему желчному протоку с помощью иглы 0,4 мм, соединенной с полиэтиленовой трубкой диаметром 0,54 мм.
- Сделать временную окклюзию дистального общего желчного протока с 8-0 шов для предотвращения утечки раствора таурохолата натрия в двенадцатиперстную кишку.
- Запустите инфузионный насос и запрограммируйте 2,5% раствор таурохолата натрия (разведенный в 0,9% физиологическом растворе) с постоянной скоростью 10 мкл/10 г массы тела в течение 3 мин.
- После инфузии удалите микрососудчатый зажим, временный 8-0 шов и инъекционная игла из желчного протока поджелудочной железы для восстановления физиологического потока желчи.
- В конце зашить брюшную полость 6-0 неабсорбирующим монофиламентным полипропиленовым швом. Время между лапаротомией и конечным швом должно составлять максимум 30 мин (см. Рисунок 1).
- После операции поместите животных в полиэтиленовые коробки, выложенные древесной стружкой и водой и пищей ad libitum.
- Относитесь к контрольным мышам так же, как и к экспериментальным мышам, но убедитесь, что инфузия состоит только из физиологического раствора. Выполните хирургическую процедуру и инфузию физиологического раствора (10 мл / мин, в течение 3 мин) в контрольной группе (SHAM) для устранения воспалительного смещения, вызванного хирургическим вмешательством и канюляцией.
- Применяют трамадол 12,5 мг/кг подкожно каждые 8 часов, начиная с послеоперационного восстановления.
4. Методы анализа
- Через 12 ч после индукции АП обезболивают животных ксилазином (10 мг/кг) и кетамином (80 мг/кг) для сбора примерно 250 мкл крови через орбитальное сплетение.
- Осторожно удерживайте кожу на спине, способствуя легкому выпячиванию глазного яблока, и расположите его глазом вверх.
- Заложить в глаз животного каплю глазной мази, содержащей местный анестетик.
- Поместите конец капиллярной трубки в медиальный угол глаза и аккуратно вставьте его под глазное яблоко, с углом ~30°-45°. Вращайте капиллярную трубку до тех пор, пока не начнется кровоток. Помните, что не обязательно использовать силу для процедуры.
- Как только сбор закончится, обеспечьте гомеостаз, закрыв веки легким сжатием марлей. Выбросьте капиллярную трубку в контейнер для острых предметов19.
- Центрифугируют сыворотку (700 х г, 15 мин) и запасают супернатант для дозирования амилазы и IL-6 (этапы 4.7 и 4.8).
- Усыпление мышей путем удушья CO2 .
- Используйте иглу 27 Г для введения 4 мл ледяного 1x PBS в брюшинную полость. Заглушают кожу живота и следят за тем, чтобы игла медленно проталкивалась в брюшину, чтобы не проколоть какие-либо органы. После инъекции нежно массируйте брюшину в течение 10 с, чтобы удалить клетки, прилипшие к брюшине.
- С помощью ножниц и пинцета сделайте небольшой разрез (0,5 см) на внутренней коже и мускулатуре, чтобы обнажить брюшную полость. Вставьте луковичную пипетку в брюшину и соберите жидкость. Будьте осторожны, чтобы не аспирировать жировую ткань или другие органы.
- Соберите как можно больше жидкости и отложите собранную клеточную суспензию в трубки, хранящиеся на льду. Выбросьте луковицу пипетки в контейнер для острых предметов20. Центрифугируют перитонеальную жидкость (250 х г, 5 мин) и запасают супернатант для дозирования IL-6 (этап 4.9).
- Соберите область поджелудочной железы, прилегающую к двенадцатиперстной кишке (<5 мм).
- Обработать поджелудочную железу, зафиксировав 10% формалин и включив его в парафин.
- Окрашивают слайды гематоксилином и эозином для гистопатологических анализов под световой микроскопией. Используйте протокол Шмидта21 (отек поджелудочной железы, ацинарная клетка, травма / некроз, воспаление поджелудочной железы) для оценки степени АП.
- Измеряйте амилазу (U/dL) с помощью коммерчески доступных комплектов в соответствии с рекомендациями производителя.
- Измеряйте Ил-6 с помощью анализов Luminex с помощью коммерческих комплектов в соответствии с рекомендациями производителя.
- Храните супернатант сыворотки и перитонеальной жидкости, полученный на стадиях 4.1 и 4.4, в морозильной камере при -80 °C, если это необходимо.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Тяжесть панкреатита была оценена между 0-3 по шкале Шмидта21, где ноль соответствует отсутствию, 1 соответствует мягкому присутствию (<25%), 2 соответствует умеренному присутствию (от 25 до 50%) и 3 соответствует интенсивному присутствию (> 50%) (таблица 1). Выполненные измерения включали активность амилазы плазмы, отек поджелудочной железы, ацинарную клетку, травму / некроз, воспаление поджелудочной железы (путем гистологического анализа окрашенных H & E участков) и концентрацию цитокинов IL-6 в сыворотке и жидкости PerC. После 12 ч тяжелой АП группы АПТА наблюдалось увеличение концентрации амилазы в сыворотке крови (6194 ± 336,7 Ед/дл) по сравнению с фиктивной группой (3845 ± 135,7 Ед/дл). В то же время группа APTA показала повышенную концентрацию цитокинов IL-6 в сыворотке и жидкости PerC (рисунок 2). На рисунке 3 показано репрезентативное окрашивание гематоксилин-эозина фиктивной и APTA группы.
Рисунок 1: Схемы индукции тяжелого острого панкреатита 2,5% таурохолатом натрия у мышей C57BL/6. (А) желчного пузыря; (B) общий желчный проток; (C) проток поджелудочной железы; (D) портальная жила; (E) микрососудчатый зажим; (F) место прокола (игла, прикрепленная к полиэтиленовой трубке и подключенная к инфузионному насосу); (G) временная фиксация иглы в общем желчном протоке. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2: Репрезентативные результаты после 12 ч тяжелого острого панкреатита. (А) Концентрация амилазы в сыворотке крови животного (ЕД/дл). (B) Концентрация цитокинов IL-6 в сыворотке и жидкости PerC. Различия между группами оценивались с помощью непарного анализа t-теста * p <0,05, если APTA ≠ фиктивной (n = 9 / группа). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
| Интерстициальный отек | Воспалительная инфильтрация | Некроз паренхимы | Паренхимное кровоизлияние | |
| ПРИТВОРСТВО | 1±0* | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
| АПТА | 3±0* | 3±0 | 3±0 | 3±0 |
| *П<0,05 если ШАМ≠АПТА. |
Таблица 1: Гистологические изменения в ткани поджелудочной железы через 12 ч тяжелой АП. Поджелудочную железу обрабатывали и анализировали по шкале Шмидта21. Результаты были выражены как среднее ± SEM, а различия между группами оценивались с помощью теста Student t. * p <0,05, если APTA ≠ SHAM; (n=9/группа).
Рисунок 3: Репрезентативное окрашивание гемоматоксилин-эозина в ткани поджелудочной железы после 12 ч тяжелой АП. Гистологические изменения в (A) SHAM и (B) APTA ткани поджелудочной железы (окрашивание гематоксилин-эозин - 40-кратное увеличение). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Способ индуцирования острого панкреатита ретроградной инфузией таурохолата натрия уже показан у крыс22,23,24. Три подобные работы, опубликованные в 2008, 2010 и 2015 годах, послужили справочным материалом для протокола3,14,15. В этой работе мы перечислим все критические шаги для воспроизведения этого метода на мышах C57BL/6 и некоторые возможности для его проверки.
Критическим шагом в этом тесте является блокирование желчного протока на уровне хилума с помощью микрососудчатого зажима (шаг 3.1), чтобы избежать рефлюкса таурохолата натрия в печень. Этот шаг требует большого внимания, так как воротная жила находится рядом с протоком (рисунок 1D), поэтому необходимо позаботиться о том, чтобы не заблокировать ее вместе. Иглу следует вводить только в самую дистальную часть протока. Если он вводится глубоко в проток, он может вызвать разрыв с кислотой, перетекающей в железистую паренхиму и / или в другие протоки14. Убедитесь, что внутри полиэтиленовой трубки есть воздух, чтобы предотвратить обструкцию общего желчного протока.
Эта модель требует разреза в брюшной полости мыши. Введение канюли через отверстие протока поджелудочной железы требует опыта, но это может быть достигнуто с помощью обучения15,25. Важно подчеркнуть, что тяжесть панкреатита в данной модели пропорционально зависит от концентрации, объема инфузии, давления инфузии и времени индукции АП. Таким образом, необходимо использовать постоянную инфузионную машину с контролируемым объемом и давлением.
Для этого исследования мы стандартизировали концентрацию 2,5% со скоростью инфузии 10 мкл/мин в течение 3 мин и постоянным давлением. Через 12 ч АП наблюдалось повышение воспалительных показателей и некроза тканей поджелудочной железы, при этом животные умирали в течение 16 ч после индукции АП.
Хотя основными причинами АП являются потребление алкоголя или камни в желчном пузыре, эти модели экспериментально не воспроизводимы26. В настоящее время наиболее используемый протокол индукции АП у мышей включает 7 внутрибрюшинных инъекций церулеина (50 мкг/кг массы тела) с интервалом 1 ч27. Церулейн также использовался для индуцирования легкого или умеренного острого панкреатита. Вариабельность в этой модели ограничивает ее использование при изучении деструктивных последствий заболевания, которые придают клиническую заболеваемость и смертность10. Модели, которые вызывают высокую смертность за короткое время, актуальны для изучения тяжелой АП (некротизации), так как они могут оценить эффективность новых лекарств или вмешательств. Среди этих моделей геморрагическая индукция АП у молодых самок грызунов (от 4 до 6 недель) с помощью диеты с дефицитом холина28 и L-аргинин (например, 3 х 3 г / кг или 2 х 4 г / кг) на основе индукции острого панкреатита у мышей, но правильная дозировка L-аргинина для индуцирования АП должна быть проверена каждой лабораторией и в каждом штамме мыши29. В 2015 году исследование показало, что внутрипротоковая инфузия таурохолата с последующей дистальной перевязкой общих желчных протоков приводит к тяжелой, некротической модели панкреатита у мышей3. Однако эта модель не полезна для тестирования эффективности препарата и вмешательств из-за его необратимого состояния.
Результаты, обнаруженные в этом исследовании, коррелируют с недавней литературой, такой как повышение концентрации амилазы в сыворотке крови и IL-6, связанное с прогрессированием заболевания. Не исключено, что в будущем измерение таких белков, как TNF-α, IL-1β и миелопероксидаза, станет клинико-прогностическим параметром при тяжелом остром панкреатите30,31,32.
В заключение, протокол, используемый в настоящем исследовании для индуцирования АП у мышей путем инфузии таурохолата натрия непосредственно в общий желчный проток, приводит к тяжелому острому панкреатиту с некрозом ткани поджелудочной железы, который может наблюдаться даже через 12 ч после индукции с повышением цитокина IL-6 в сыворотке и перитонеальной жидкости и с высокой летальностью (100% смертность через 16 ч, данные не показаны).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторам нечего раскрывать.
Acknowledgments
Авторы благодарят программу последипломного образования в медицинской клинике Университета Сан-Паулу; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) и Медицинская школа Университета Сан-Паулу (FMUSP).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.4 mm needle | INTRAG MEDICAL TECH | 90183210 | 30G |
| 0.54 mm polyethylene tube | Tygon | 730010 | - |
| Styrofoam block | - | - | - |
| masking tape for mounting the mouse | Missner | 1236 | - |
| Infusion pump scheduled to 10µL / min. | Havard aparatus-Peristaltic Pump Series | MA1 55-7766 | Model 66 Small Peristaltic |
| Scissors and forceps | |||
| Antiseptic providine iodine | Pfizer | 12086OR | antisepsis |
| 70% ethanol | SIGMA | 459836 | Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O |
| Razor blade | Lord | bdk9a1ghk6 | For trichotomy |
| Sodium taurocholate | Sigma-Aldrich | 86339- 1G | CAS NUMBER- 345909-26-4 |
| microvessel clip | Medicon Surgical | 56.87.35 | Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 - 40 g |
| 6-0 prolene | Bioline | 5162 | Suture line |
| Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL | Cristália | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay | MERCK | MCYTOMAG-70K | Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples. |
| Amylase Assay | Labtest | 11 | |
| Desmarres retractor 13-mm width |
ROBOZ | RS-6672 |
References
- Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
- Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats. Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).
- T, L., et al. Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice. Pancreas. 44 (3), (2015).
- Botoi, G., Andercou, A. Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis. Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).
- Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis. Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).
- Feng, C., et al. Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis. Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).
- Fang, D. Z., et al. Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats. International Immunopharmacology. 80, (2020).
- Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A.
- Wan, M. H., et al. Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research. HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).
- Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).
- Wang, N., et al. Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1. International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).
- Ma, Z. H., et al. Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis. Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).
- Souza, L. J., et al. Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis. Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).
- Perides, G., Acker, G. J. v, Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).
- Wittel, U. A., et al. Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice. Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).
- Tao, L., Reese, T. A. Making mouse models that reflect human immune responses. Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).
- Vandamme, T. F. Use of rodents as models of human diseases. Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).
- Song, H. K., Hwang, D. Y. Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches. Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).
- Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), CRC Press. (2010).
- Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).
- Schmidt, J., et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy. Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).
- Liu, D. L., et al. Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis. International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).
- Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. The effects of bile acids on pancreatic ductal cells. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).
- Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors. Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).
- Lerch, M. M., Gorelick, F. S. Models of acute and chronic pancreatitis. Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).
- Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice. Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).
- Kui, B., et al. New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis. PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).
- Xue, J., et al. Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis. Nature Communication. 6, 7158 (2015).
- Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas. Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).
- Rao, S. A., Kunte, A. R. Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis. Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).
