Summary
Förfarandet beskriver isolering av villi från mus intestinala epitel genomgår dedifferentiering för att bestämma deras organoid formning potential.
Abstract
Clonogenicity av organoider från intestinala epitel tillskrivs förekomsten av stamceller däri. Musens lilla intestinala epitel är indelat i krypter och villi: stammen och prolifererande celler är begränsade till krypterna, medan villi epitel innehåller endast differentierade celler. Därför kan de normala tarmkrypterna, men inte villi, ge upphov till organoider i 3D-kulturer. Förfarandet som beskrivs här är endast tillämpligt på villus epitel som genomgår dedifferentiering som leder till stemness. Metoden som beskrivs använder Smad4-förlust-av-funktion:β-catenin gain-of-function (Smad4KO:β-cateninGOF)villkorlig mutant mus. Mutationen gör att tarm villi dedifferentierar och genererar stamceller i villi. Intestinala villi som genomgår dedifferentiering skrapas av tarmarna med hjälp av glasrutschbanor, placeras i en 70 μm sil och tvättas flera gånger för att filtrera bort lösa celler eller krypter före plätering i BME-R1 matris för att bestämma deras organoidbildande potential. Två huvudkriterier användes för att säkerställa att de resulterande organoiderna utvecklades från det dedifferentierande villusfacket och inte från krypterna: 1) mikroskopiskt utvärdera den isolerade villi för att säkerställa frånvaron av några tjudrade krypter, både före och efter plätering i 3D-matrisen och 2) övervakning av tidsföringen för organoid utveckling från villi. Organoid initiering från villi förekommer endast två till fem dagar efter plätering och verkar oregelbundet formad, medan krypt-härledda organoider från samma intestinala epitel är uppenbara inom sexton timmar efter plätering och verkar sfäriska. Begränsningen av metoden är dock att antalet organoider som bildas och den tid som krävs för organoidinitiering från villi varierar beroende på graden av dedifferentiering. Beroende på mutationens specificitet eller förolämpningen som orsakar dedifferentieringen måste därför det optimala stadiet där villi kan skördas för att analysera deras organoida formningspotential bestämmas empiriskt.
Introduction
Tarmkrypterna men inte villi, bildar organoider när de odlas i Matrigel eller BME-R1 matris. Dessa organoider är självorganiserande strukturer, ofta kallade "mini-gut" på grund av närvaron av de olika differentierade härstamningar, stamceller och stamceller som finns i tarmepiteleriet in vivo. Potentialen att bilda organoider från krypter tillskrivs närvaron av stamceller1. Intestinala villi består å andra sidan endast av differentierade celler och kan därför inte bilda organoider. Mutationer2 eller tillstånd som tillåter dedifferentiering av villus epitel kan dock leda till stamceller i villi2,3. Denna ödesförändring som resulterar i stemness i villi epitel kan bekräftas genom plätering av dedifferentiering villus epitel i 3D matris för att bestämma deras organoid-formning potential som en indikator på de-novo stemness i villus epitel. Därför är den kritiska aspekten av detta förfarande att säkerställa frånvaro av kryptförorening.
Smad4KO:β-cateninGOF villkorlig mutation orsakar dedifferentiering i intestinala epitel som kännetecknas av uttryck av spridning och stamcellsmarkörer i villi, och så småningom bildandet av kryptliknande strukturer i villi som kallas ectopic krypter Förekomsten av stamceller dessa dedifferentierade villi bestämdes av uttrycket av stamcellsmarkörer i ectopic krypter (in vivo) och mutant villis förmåga att bilda organoider wh pläterad Matrigel3. Nedan nämnda förfarande utarbetar den metod som används för att bekräfta stemnessen hos det dedifferentierande intestinala epitelet i Smad4KO:β-cateninGOF mutanta möss. Ett viktigt inslag i denna metod för att isolera villi var användningen av skrapning av tarmlumen, i motsats till EDTA-kelatmetoden4. Till skillnad från i EDTA-kelatmetoden behåller villi-isoleringen genom att skrapa majoriteten av det underliggande mesenchymet och gör det möjligt att justera trycket på skrapning för att ge villi utan tjudrade krypter. Skraptrycket är subjektivt för operatören, därför måste det optimala trycket för att ge villi utan krypter fastbundet bestämmas empiriskt av operatören. Den kritiska aspekten av detta förfarande är att säkerställa frånvaron av kryptförorening genom mikroskopisk undersökning av villi både före och efter plätering i BME-R1 matrisen.
Intestinal villi skrapas bort från tarmlumen med glasrutschbanor och placeras i ett 70 μm-filter och tvättas med PBS för att bli av med lösa celler eller eventuella krypter innan de pläteras i BME-R1-matrisen. Metoden betonar följande kriterier för att undvika kryptkontaminering: a) begränsa villi-skörden av den proximala halvan av årondenum där villi är längst, b) minimera antalet villi-avgivande skrapsår, c) tvätta filtret som innehåller villi genom en serie PBS i en sex-brunns skål och d) bekräfta frånvaron av kryptkontaminering genom mikroskopisk undersökning före och efter plätering i BME-R1 matris. Villi isolering genom att skrapa, snarare än genom EDTA chelation, förhindrar fullständig förlust av den underliggande mesenchyme som kan genischsignalerna 5,6,7,8, om det behövs, för organoid initiering från villus epitel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla de musexperiment som genomfördes, inklusive användning av Tamoxifen och dödshjälp genom livmoderhalsförskjutning, hade godkännande av institutional animal care and use committee vid Stevens Institute of echnology.
1. Möss
OBS: Generationen av Smad4f/f; Catnblox(ex3)/+; Villin-CreERT2 möss har tidigare beskrivits3. Vuxna honmöss mellan åtta och tolv veckor användes.
- Inducera Smad4 KO:β-cateninGOF mutationen i Smad4f/f; Catnblox(ex3)/+; Villin-CreERT2 med intraperitoneal injektion av Tamoxifen i majsolja i fyra dagar i följd.
- Offra miceby livmoderhalscancer förskjutning tio dagar efter den första tamoxifen injektionen.
- Spraya buken med 70% etanol för att förhindra att muspäls kommer in i peritonealhålan.
- Öppna bukhålan med dissekeringssax för att exponera tarmarna. Isolera tarmarna med hjälp av saxen och tången.
OBS: Samtidig förlust av Smad4 tillsammans med vinst av funktion mutation av β-catenin (Smad4 KO;β-cateninGOF) i intestinala epitel uppnåddes genom injiceraSmad4f/f; Catnblox(ex3)/+; Villin-CreERT2 möss varje dag i fyra dagar i följd med 0,05 g Tamoxifen/kg kroppsvikt i majsolja. Dessa möss skördas tio dagar efter den första tamoxifeninjektionen för att säkerställa närvaron av celler som uttrycker stamcellsrelaterade markörer i den dedifferentierande villin.
2. Duodenisolering och förberedelse
- Dissekera ut den proximala halvan av åronden.
- Spola årondenumet med 5 ml iskallt PBS i en 10 ml spruta för att rensa luminalhalten.
- Öppna åronet längsgående med en vinklad sax och lägg årondenum platt på en 15 cm Petri-tallrik på is med årondens lumen vänd mot operatören.
3. Villi isolering genom att skrapa
- Innan du påbörjar skrapningen, placera en 70 μm nätsil i en av brunnarna på en 6-brunns vävnadskulturplatta. Fyll alla brunnar med 4 ml 1x PBS och placera 6-brunns vävnadskulturplattan på is (Figur 1).
- Skrapa villi enligt följande med två mikroskopiska glasrutschbanor: den ena för att hålla ner årondenumet och den andra för att skrapa (Figur 1B1).
- Skrapa den lysande sidan av årondenum ytligt fram och tillbaka två gånger för att ta bort slemmet. Tryck så att detta steg tar bort slemskiktet, men inte villi.
- Skrapa tolvfingertarmen igen, fram och tillbaka två gånger med samma tryck som i 3..1, under vilket villi kan ses samla på bilderna (Figur 1B2). Detta är det optimala trycket (som måste bestämmas empiriskt av operatören) för att ge villi utan krypterna fastsprickade.
- Använd ett 1 ml överföringsrör som innehåller PBS för att överföra villan (som samlas in på skjutbanan från steg 3.2.2) till en 70 μm nätsil placerad i en 6-brunns skål. Villi samlas in så här, efter varje skrapsår (figur 1B2).
- Tvätta villan som samlats i silen på 70 μm (från steg 3.3) genom att överföra silen (med villi) genom en serie brunnar i en 6-brunnsskål som innehåller kall PBS (~ 4 ml/brunn). Detta för att ta bort lösa krypter, om några.
- Använd en p1000-rörledning och överför villi-fjädringen i PBS (~ 3 ml) från silen på 70 μm till ett nytt 15 ml-rör på is.
- Använd en 0,1% BSA-belagd trubbig p200 rörspets för att aspirera 50 μL volym av villi-fjädringen på en glasrutschbana. Räkna antalet villi i droppen på 50 μL under 4x förstoring för att bestämma koncentrationen av villi i PBS-suspensionen. Om det till exempel finns 10 villi i den undersökta suspensionen på 50 μL är villikoncentrationen 0,2 villi/μL. Det här är också rätt tid att bekräfta frånvaron av tjudrade krypter.
- Beräkna den volym villi suspension som krävs för att plätera vid en koncentration av 0,5 villi/μL BME-R1 matris. Lägg till ytterligare 100 μL för att ta hänsyn till rörfel och den volym som krävs för mikroskopisk undersökning för att säkerställa villis renhet.
VARNING: Trycket som används i de två första skraporna, som tar bort slemmet men inte villi, bör användas i de efterföljande skraporna under vilka villi kommer att släppas. Begränsa antalet fram- och från-skrapningar till två efter att villi-frisättningen först har observerats. Denna åtgärd undviker frisättning av villi med krypterna fastsprickade. Det är viktigt att mikroskopiskt utvärdera villi för att säkerställa frånvaron av de tjudrade krypterna.
4. Plätering av villi på BME-R1 matris
- Använd en 0,1% BSA-belagd p200 trubbig rörspets, överför till ett mikrocentrifugrör den volym villi (från steg 3.6) som krävs för att plätera med en densitet av ~ 6 villi per brunn i 12,5 μL BME-R1 matris. Användningen av BSA-belagd trubbig spets vid denna punkt säkerställer att villi, som är för stora för en spetsig spets, aspirerar utan att blockeras eller förloras från att fastna på sidorna av spetsen.
- Snurra ner villan i 2 min vid 200 x g i en kyld centrifuge (4 °C) och ta bort supernaten.
- Upprepa steg 4.2 för att ta bort eventuell rest PBS och gå vidare till nästa steg under en laminär flödeshuv.
- Återanvänd villi pelleten försiktigt i önskad mängd kall BME-R1 tinade på is.
- Använd en p20-rör, plåt 12,5 μL/brunn av villan i BME-R1 matris i 3D i en förvärmd 96-brunns U-bottenplatta.
- Inkubera plattan i en inkubator för vävnadskultur vid 37 °C i 15 minuter för att möjliggöra stelning av BME-R1-matrisen.
- Tillsätt 125 μL/brunn av förvärmda ENR-medier (Epidermal tillväxtfaktor/Noggin/R-spondin1) : avancerade DMEM F-12-medier, kompletterade med 1x Penicillin: Streptomycin, 10 mM HEPES, Glutamax, 50 ng/mL EGF, 100 ng/mL Noggin, 5% konditionerade medier från HEK293-T celler som uttrycker R-Spondin1, 1x N2, 1x B27, 1 mM N-acetyl cystein och 0,05 mg/mL Primocin.
- Inkubera den pläterade villi i en vävnadskulturinkubator som upprätthålls vid 37 °C med 5% CO2, och ändra media varannan dag.
- Kassera alla brunnar där organoider uppträder före två dagars plätering, eftersom den tidigaste tidpunkt då villi-härledda organoider förväntas är efter två dagar.
OBS: Alla villi som har hälften eller mer än hälften så lång som villi räknas som en villus. Till skillnad från kryptbaserade organoider förväntas inte villi-härledda organoider inom 24 timmar efter plätering. Den organoidinitierande villi verkar mörka och krympa före bildandet av organoider. Därför bör alla brunnar med organoider som utvecklas inom en dag efter plätering kasseras för att undvika rimligheten av att ha härletts från rimlig kryptförorening. Den metod som används för att framställa de konditionerade medierna finns tillgänglig på begäran.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den avgörande faktorn för hur framgångsrikt förfarandet lyckas är att förhindra kryptförorening. Organoid utveckling från villi (och inte från någon förorenande krypter) säkerställs genom att bekräfta fyra huvudkriterier: 1) säkerställa renheten hos den skördade villi genom mikroskopisk undersökning före och efter plätering villi i BME-R1, 2) plätering av begränsat antal villi per brunn för att möjliggöra visualisering av alla pläterade villi individuellt, 3) på utveckling av organoid dagligen; Bilder av tidskursen visar utvecklingen av organoid från villi (figur 3), och 4) som visar kinetiken och morfologiska utseendet hos de organoider som initierar från villi. De organoider som initierar från villi verkar oregelbundet formade först och tar två till fem dagar innan de kan ses under 4x förstoring i motsats till de kryptbaserade organoiderna (odlade genom att isolera krypter med hjälp av EDTA/PBS-kelatmetoden1,4) som förekommer över natten som sfäriska strukturer med väldefinierade gränser (figur 2).
Den optimala tiden för att offra mössen för att testa villis organoidbildande potential är efter dedifferentiering av villi-epitel express stamcellsmarkörer och påbörja utvecklingen av ectopic krypter i villi in vivo (cirka 10 dagar efter Tamoxifen injektion av Smad4f/f; Catnblox(ex3)/+; Villin-CreERT2 möss). Dessa möss har en tamoxifen inducible cre-recombinase som orsakar Smad4 förlust samtidig med β-catenin aktivering med tamoxifen. De ectopic krypterna utvecklas helt inom två veckor efter induktion av mutationen, medan stamcellerna i villus epitel visas inom en vecka efter induktion av mutation in vivo. Antalet villi som bildar organoider när de pläterats i Matrigel har rapporterats variera mellan 2% och 12%3. Skörden av den muterade musen för plätering av villi runt den tidpunkt då stamceller finns (ungefär en vecka efter induktionen av veckrekombinas) förlänger den tid som krävs för villi-härledda organoider, medan fördröjer skörden till senare än tio dagar efter att veckinduktionen ökar risken för kontaminering.
Figur 1:Experimentell uppsättning och villiskrapning från intestinalt epitel. A) PBS-fylld spruta (syrg) med slangar och filter (Fltr) i PBS. B) Villi-isolering genom att skrapa( B1) och överföra till ett filter (B2). Pilen pekar villi som samlats in på bilden. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 2: Skillnad i utseendet på de organoider som kommer från krypterna kontra det dedifferentierade villi-epitelet från samma mustarmar: A) Tecknad film som visar villus och krypter. B) Hela fästet (i PBS) av villi som bereds genom skrapning (övre panelen) och krypter som bereds av EDTA-kelat (nedre panelen). C) Villi-härledda (övre panelen) och krypt-härledda (nedre panel) organoider från samma mus intestinala epitel i BME-R1 (skalstänger, 500 um). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 3: Tidsförrättning för organoidbildning från den dedifferentierande villi. Organoidinitiering från två olika villi visas (de boxade regionerna förstoras i mitten och bottenpanelerna). Villi med organoid-bilda potential verkar tät, möjligen på grund av bevarandet av den underliggande mesenchyme. Organoidinitiering från villus är uppenbar vid dag två (fast pil) från en av villi (låda med bruten gräns), medan i den andra villus (låda med fast gräns) visas organoiden dag fyra (pil). Den övre lådan på dag 6-panelen visar en utvecklad villi-härledd organoid. Skalbar, 100 μm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denna metod kan bekräfta självförnyelsekapaciteten hos dedifferentiering av villi epitel som förvärvar stamcellsmarkörer in vivo. Det normala intestinala epitelet kan ge upphov till organoider från kryptan men inte villi-facket, när det odlas i 3D på grund av närvaron av stamceller i krypterna1. Således bekräftar organoidbildning från det dedifferentierade villi epitel odlat i 3D-kulturer stamcellsbildning från cellens ödesåtervändning. Rapporter om cell öde återföring i intestinala epitel som härrör från mutationer och/eller skada ökar2,3,9,10,11,12. Denna metod är därför tillämplig i liknande scenarier där dedifferentierande villi epitel express stamcellsmarkörerna in vivo.
Vi bekräftade utvecklingen av organoiderna från villi av Smad4KO:β-cateninGOF mutant genom tidskursen visar utveckling av organoid från villi (Figur 3). Den mest kritiska aspekten är att vidta försiktighetsåtgärder mot kryptförorening, vilket skulle leda till falska positiva resultat. Följande åtgärder vidtogs för att säkerställa att villiberedningen var ren före och efter plätering: a) isolering av villi från den proximala halvan av åronden där villi är längst, b) minimera antalet skrapningar och justera skraptrycket så att villi utan fastknöjda krypter, c) tvätta villan med PBS efter att ha placerat dem i en 70 μm nätsil för att utesluta lösa krypter eller celler d) mikroskopisk undersökning av den skördade villi före och efter plätering, och e) minimera antalet villi pläterade per brunn så att de kan visualiseras individuellt i den pläterade matrisen.
Flera överväganden gjordes för att optimera proceduren. För det första skördade vi villi från det proximala årondenumet där villi är längst. Den fysiska avgränsningen mellan differentiering och de proliferativa facken i tunntarmen gör att vi kan anta skrapning för att mekaniskt separera villi från krypterna. Denna metod kan således endast antas i de fall där uppdelningen mellan differentierings- och proliferativt utrymme är strikt avgränsad - vilket är fallet i tunntarmen men inte i tjocktarmen. För det andra optimerade vi tiden för villi isolering efter induktion av mutationen baserat på graden av dedifferentiering observeras in vivo. Dedifferentiering i den villkorliga Smad4KO:β-cateninGOF mutanten kännetecknas av utseendet in vivo av stamcellsmarkörer och utomkvedshavandeskap i villus epitel inom sju respektive tiodagar 3. Således minskar den tid som krävs för att initiera organoider från mutant villi som tiden förflutit efter induktion av mutationen ökar. Därför, medan du anpassar denna metod till andra dedifferentieringsmodeller av tarmarna, bör den optimala tiden för att offra mössen för villi-isolering bestämmas empiriskt beroende på typen av mutation eller skada och graden av efterföljande dedifferentiering in vivo. För det tredje valde vi att isolera villi genom att skrapa snarare än med EDTA-kelatmetoden för att behålla det underliggande mesenkymet, eftersom epitelial-mesenchymala korssamtal har varit inblandade i tarmstamcellsfunktionen i tarmarna5,6,7,8,13. Villi som initierar organoiderna verkar huvudsakligen mörka möjligen på grund av närvaron av det underliggande mesenkymet (figur 2B och 3). Vi verifierade uttrycket av stamcells tillhörande markör CD4414,15, och tarmspecifika transkriptionsfaktorn Cdx216,17,18,19,20 bekräftar epitelial ursprunget för villi-härledda organoider ( FigurS1).
Jämfört med in vivo-metoder är organoider mer mottagliga för genetisk manipulation och screening. Eftersom vi observerar fenotypiska skillnader mellan de organoider som kommer från krypterna och villi av samma Smad4KO:β-cateninGOF intestinal epitel (Figur 2B), spekulerar vi molekylära skillnader mellan de två, som för närvarande undersöks. Således är denna metod användbar för att undersöka konsekvenserna av dedifferentiering-orsakar mutationer och dess differentierade effekter i föregångaren kontra differentiering fack.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar inga intressekonflikter.
Acknowledgments
Denna publikation stöddes av Award Number K22 CA218462-03 från NIH National Cancer Institute. HEK293-T-cellerna som uttryckte R-Spondin1 var en generös gåva från Dr. Michael P. Verzi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Advanced DMEM F-12 media | Gibco | 12634010 | |
| 3,3-diaminobenzidine | Vector Labs | SK-4105 | |
| 96 well U-bottom plate | Fisher Scientific | FB012932 | |
| ABC kit | Vector Labs | PK4001 | |
| Angled scissor | Fisher Scientific | 11-999 | |
| Animal-Free Recombinant Human EGF | Peprotech | AF-100-15 | |
| B-27 Supplement (50X), minus vitamin A | Gibco | 12587010 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) Protease-free Powder | Fisher Scientific | BP9703100 | |
| CD44 antibody | BioLegend | 1030001 | |
| Cdx2 antibody | Cell Signaling | 12306 | |
| Corn oil | Sigma-Aldrich | C8267-500ML | |
| Corning 70-micron cell strainer | Life Sciences | 431751 | |
| Cultrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Extract, Type R1 | R&D | 3433-005-R1 | |
| Dissection scissors | Fisher Scientific | 22-079-747 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 17-456-209 | |
| Glutamax (100X) | Gibco | 35050-061 | |
| HEK 293-T cells expressing RSPO-1 | Gift from Dr. Michael Verzi | ||
| HEPES (1M) | Gibco | 15630-080 | |
| Histogel | Thermoscientific | HG-4000-012 | |
| Mesh filter | Fisher Scientific | 07-201-431 | |
| Micrscope glass slide | VWR | 89218-844 | |
| N-2 Supplement (100X) | Gibco | 17502048 | |
| N-acetyl cysteine | Sigma-Aldrich | A9165 | |
| p200 Blunt tips | VWR | 46620-642 | |
| Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL) | Gibco | 15140-122 | |
| Primocin (50mg/mL) | Invivogen | ant-pm-1 | |
| Quality Biological Inc PBS (10X) | Fisher Scientific | 50-146-770 | |
| Recombinant Murine Noggin | Peprotech | 250-38 | |
| Signal diluent | Cell Signaling | 8112L | |
| Tamoxifen | Sigma-Aldrich | T5648-1G | |
| 6-well tissue culture plate | Fisher Scientific | 50-146-770 |
References
- Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
- Schwitalla, S., et al. Intestinal tumorigenesis initiated by dedifferentiation and acquisition of stem-cell-like properties. Cell. 152 (1-2), 25-38 (2013).
- Perekatt, A. O., et al. SMAD4 Suppresses WNT-Driven Dedifferentiation and Oncogenesis in the Differentiated Gut Epithelium. Cancer Research. 78 (17), 4878-4890 (2018).
- Roche, J. K. Isolation of a purified epithelial cell population from human colon. Methods in Molecular Medicine. 50, 15-20 (2001).
- Aoki, R., et al. Foxl1-expressing mesenchymal cells constitute the intestinal stem cell niche. Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 2 (2), 175-188 (2016).
- Seiler, K. M., et al. Tissue underlying the intestinal epithelium elicits proliferation of intestinal stem cells following cytotoxic damage. Cell and Tissue Research. 361 (2), 427-438 (2015).
- Stzepourginski, I., et al. CD34+ mesenchymal cells are a major component of the intestinal stem cells niche at homeostasis and after injury. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (4), 506-513 (2017).
- Roulis, M., et al. Paracrine orchestration of intestinal tumorigenesis by a mesenchymal niche. Nature. 580 (7804), 524-529 (2020).
- Haramis, A. P., et al. De novo crypt formation and juvenile polyposis on BMP inhibition in mouse intestine. Science. 303 (5664), 1684-1686 (2004).
- Madison, B. B., et al. Epithelial hedgehog signals pattern the intestinal crypt-villus axis. Development. 132 (2), 279-289 (2005).
- van Es, J. H., et al. Dll1+ secretory progenitor cells revert to stem cells upon crypt damage. Nature Cell Biology. 14 (10), 1099-1104 (2012).
- Tetteh, P. W., et al. Replacement of Lost Lgr5-Positive Stem Cells through Plasticity of Their Enterocyte-Lineage Daughters. Cell Stem Cell. 18 (2), 203-213 (2016).
- Baulies, A., et al. The Transcription Co-Repressors MTG8 and MTG16 Regulate Exit of Intestinal Stem Cells From Their Niche and Differentiation Into Enterocyte vs Secretory Lineages. Gastroenterology. 159 (4), 1328-1341 (2020).
- Zeilstra, J., et al. Stem cell CD44v isoforms promote intestinal cancer formation in Apc(min) mice downstream of Wnt signaling. Oncogene. 33 (5), 665-670 (2014).
- Gracz, A. D., et al. Brief report: CD24 and CD44 mark human intestinal epithelial cell populations with characteristics of active and facultative stem cells. Stem Cells. 31 (9), 2024-2030 (2013).
- Gao, N., White, P., Kaestner, K. H. Establishment of intestinal identity and epithelial-mesenchymal signaling by Cdx2. Developmental Cell. 16 (4), 588-599 (2009).
- Verzi, M. P., Shin, H., Ho, L. L., Liu, X. S., Shivdasani, R. A. Essential and redundant functions of caudal family proteins in activating adult intestinal genes. Molecular and Cellular Biology. 31 (10), 2026-2039 (2011).
- Verzi, M. P., Shin, H., San Roman, A. K., Liu, X. S., Shivdasani, R. A. Intestinal master transcription factor CDX2 controls chromatin access for partner transcription factor binding. Molecular and Cellular Biology. 33 (2), 281-292 (2013).
- Grainger, S., Hryniuk, A., Lohnes, D. Cdx1 and Cdx2 exhibit transcriptional specificity in the intestine. PLoS One. 8 (1), 54757 (2013).
- Stringer, E. J., et al. Cdx2 determines the fate of postnatal intestinal endoderm. Development. 139 (3), 465-474 (2012).
