Summary
क्रोनिक अग्नाशयशोथ (सीपी) एक ऐसी बीमारी है जो अग्न्याशय की सूजन और फाइब्रोसिस की विशेषता है, जो अक्सर असभ्य पेट दर्द से जुड़ी होती है। यह लेख 2,4,6 -त्रिनीट्रोबेनजेन सल्फोनिक एसिड (टीएनबीएस) के साथ पित्त वाहिनी जलसेक के माध्यम से सीपी के माउस मॉडल को उत्पन्न करने की तकनीक को परिष्कृत करने पर केंद्रित है।
Abstract
क्रोनिक अग्नाशयशोथ (सीपी) एक जटिल बीमारी है जिसमें अग्नाशय की सूजन और फाइब्रोसिस, ग्रंथि शोष, पेट दर्द और अन्य लक्षण शामिल हैं। सीपी का अध्ययन करने के लिए कई कृंतक मॉडल विकसित किए गए हैं, जिनमें से पित्त वाहिनी 2,4,6 -त्रिनीट्रोबेनजेन सल्फोनिक एसिड (टीएनबीएस) जलसेक मॉडल सीपी में देखे गए न्यूरोपैथिक दर्द की विशेषताओं को दोहराता है। हालांकि, चूहों में पित्त वाहिनी दवा जलसेक तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है। यह प्रोटोकॉल सीपी माउस मॉडल की पीढ़ी के लिए पित्त वाहिनी टीएनबीएस जलसेक की प्रक्रिया को दर्शाता है। टीएनबीएस को डुओडेनम में वेटर के एम्पुला के माध्यम से अग्न्याशय में संचार किया गया था। इस प्रोटोकॉल ने प्रक्रिया के दौरान दवा की मात्रा, शल्य चिकित्सा तकनीकों और दवा हैंडलिंग को अनुकूलित किया। TNBS-इलाज चूहों सीपी की विशेषताओं के रूप में शरीर के वजन और अग्न्याशय वजन में कटौती, दर्द से जुड़े व्यवहार में परिवर्तन, और असामान्य अग्नाशय आकृति विज्ञान से परिलक्षित दिखाया । इन सुधारों के साथ, टीएनबीएस इंजेक्शन से जुड़ी मृत्यु दर कम थी। यह प्रक्रिया न केवल अग्नाशय रोग मॉडल पैदा करने में महत्वपूर्ण है बल्कि स्थानीय अग्नाशय की दवा वितरण में भी उपयोगी है।
Introduction
क्रोनिक अग्नाशयशोथ (सीपी) एक पुरानी भड़काऊ बीमारी है जो अग्न्याशय, फाइब्रोसिस, पेट दर्द, और एक्सोक्राइन और एंडोक्राइन दोनों कार्यों के अंतिम नुकसान की शोष द्वारा विशेषता है1। वर्तमान चिकित्सा और शल्य चिकित्सा उपचार उपचारात्मक नहीं हैं, लेकिन रोग का परिणाम हैं कि लक्षणों को दूर करने के लिए शुरू कर रहे हैं: रिफ्रैक्टरी पेट दर्द, अंतःस्रावी और एक्सोक्राइन रोग। इसलिए, अधिक प्रभावी उपचार की तत्काल आवश्यकता है2. पशु मॉडल रोग की बेहतर समझ विकसित करने और संभावित चिकित्सीय की जांच करने के लिए एक आवश्यक उपकरण प्रदान करते हैं3. सीपी के लिए कई माउस मॉडल विकसित किए गए हैं, जिनमें से सेरूलिन और/या अल्कोहल मॉडल आमतौर पर उपयोग किए जाते हैं । सेरूलिन, अग्न्याशय के स्राव को उत्तेजित करने वाला एक ओलिगोपेप्टाइड, को एक सीपी मॉडल को पुन: उत्पन्न करने के लिए दिखाया गया है जिसमें अग्नाशय शोष, फाइब्रोसिस, अन्य4के बीच है। एक अन्य आम मॉडल एल-आर्जिनिन के सीरियल इंजेक्शन का उपयोग करता है, जो मानव रोगियों में देखे गए एक्सोक्राइन अपर्याप्तता का उत्पादन करता है5। सीपी को पूर्ण या आंशिक अग्नाशय वाहिनी लिगेशन, साथ ही अग्नाशय वाहिनी उच्च रक्तचाप6,7से भी प्रेरित किया जा सकता है। सीपी के लिए उपलब्ध पशु मॉडलों की विविधता के बावजूद, इनमें से कोई भी मॉडल प्रभावी रूप से सीपी रोगियों द्वारा अनुभव किए गए पेट दर्द को पुन: उत्पन्न नहीं करता है8।
पिछले अध्ययनों से पता चला है कि 2,4,6 - त्रिनीट्रोबेनजेन सल्फोनिक एसिड (टीएनबीएस) का स्थानीय अग्नाशय इंजेक्शन सीपी रोगियों द्वारा अनुभव किए गए लगातार दर्द को दोहराता है9,10,11। TNBS-इलाज चूहों पेट अतिसंवेदनशीलता और वृद्धि हुई दर्द से संबंधित व्यवहार के रूप में के रूप में अच्छी तरह से दर्दनाक उत्तेजनाओं के लिए एक "सामांयीकृत अतिसंवेदनशीलता" का प्रदर्शन किया, एक घटना है कि सीपी रोगियों में देखा गया है10। सीपी दर्द की सटीक नकल करने के अलावा, टीएनबीएस मॉडल मानव स्थिति की अन्य रोग विशेषताओं जैसे फाइब्रोसिस, मोनोन्यूक्लियर सेल घुसपैठ और फैटी ऊतक10, 12के साथ acinar कोशिकाओं केप्रतिस्थापनको भी दोहराता है। हालांकि, पित्त वाहिनी के माध्यम से TNBS जलसेक चूहों में एक तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण प्रक्रिया है कि मौत का कारण हो सकता है । हमारे ज्ञान के लिए, यह दिखाने के लिए कोई दृश्य प्रोटोकॉल नहीं है कि पित्त वाहिनी जलसेक कैसे किया जाता है। इस लेख में, हम सीपी माउस मॉडल उत्पन्न करने के लिए टीएनबीएस के पित्त डुक्शन जलसेक की प्रक्रिया को प्रदर्शित करते हैं। यह प्रक्रिया सीपी और अन्य अग्नाशय के रोगों के अध्ययन के लिए मूल्यवान पशु मॉडल उत्पन्न करने में मदद करेगी और इसका उपयोग अग्न्याशय13में अन्य सामग्रियों (जैसे वायरस, कोशिकाओं) को डालने के लिए किया जा सकता है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
सभी प्रक्रियाओं दक्षिण कैरोलिना के चिकित्सा विश्वविद्यालय और राल्फ एच जॉनसन मेडिकल सेंटर में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समितियों के अनुमोदन के साथ आयोजित किया गया । C57BL/6J पुरुष चूहों की उम्र के 8-10 सप्ताह के बीच इस अध्ययन में इस्तेमाल किया गया । चूहों को एक मानक 12 प्रकाश/12 काले चक्र के तहत रखा गया था जिसमें विज्ञापन libitumaccess से भोजन और पानी तक था ।
1. इंजेक्शन के लिए TNBS समाधान की तैयारी
- 0.9% खारा में 10% इथेनॉल तैयार करें। स्टॉक टीएनबीएस (सामग्री की तालिकादेखें) को 10% इथेनॉल के 1 मिलील में 7.5 μL TNBS के 7.5 माइक्रोन जोड़कर 7.5 mm की अंतिम एकाग्रता में भंग करें।
सावधानी: TNBS एक रासायनिक खतरा प्रस्तुत करता है । एक धुएं हुड के अंदर समाधान तैयार करें और टीएनबीएस के साथ सीधे संपर्क से बचने के लिए दस्ताने, चश्मे और एक प्रयोगशाला कोट जैसे व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरणों का उपयोग करें। - 31 गेज सुई के साथ इंसुलिन सिरिंज में 0.75% TNBS समाधान के 50 μL लोड करें। खारे में 10% इथेनॉल के 50 माइक्रोन को वाहन नियंत्रण के समान आकार की सिरिंज में लोड करें। सीरिंज को बर्फ पर रखें और जरूरत तक उन्हें रोशनी से बचाएं।
2. माउस की तैयारी और सर्जरी
- पेट सर्जिकल क्षेत्र से बालों को शेव करें।
- सर्जरी से पहले एनाल्जेसिक (जैसे, बुप्रेनोरफिन 0.1 मिलीग्राम/किलोग्राम आईपी) की एक पूर्व-खाली खुराक इंजेक्ट करें।
- 1.5-2% आइसोफ्लाणे और 1 एल/मिन ऑक्सीजन के साथ सामान्य संज्ञाहरण के तहत माउस को प्रेरित और बनाए रखें। उंगलियों को चुटकी देकर और जानवर को पलटा की कमी के लिए देख कर एनेस्थेटाइजेशन की पुष्टि करें।
- सर्जरी के दौरान माउस को गर्म सर्जिकल पैड पर रखें। माउस संज्ञाहरण के अधीन होने पर प्रत्येक आंख पर पशु चिकित्सा मरहम लगाएं।
- 2% आयोडीन के साथ सर्जिकल क्षेत्र 3x पोंछते द्वारा सर्जिकल साइट कीटाणुरहित, 70% शराब(सामग्री की मेज) केबाद।
- 0.5-1 सेमी चीरा उत्पन्न करने के लिए माइक्रो कैंची के साथ एक लेप्रोटॉमी करें।
- धीरे-धीरे डुओडेनम का पर्दाफाश करें और कपास झाड़ू(सामग्री की तालिका)का उपयोग करके आम पित्त वाहिनी का पता लगाएं।
- लिवर और पित्ताशय की थैली(चित्रा 1A,बी)में टीएनबीएस या वाहन समाधानों के प्रवाह को रोकने के लिए समीपस्थ आम वाहिनी के ऊपर एक सीधे माइक्रो हीमो क्लिप(सामग्रीकी तालिका) रखें।
- धीरे-धीरे डुओडेनम का पर्दाफाश करें और सुई को वेटर के पैपिला के माध्यम से अग्नाशय वाहिनी में डालें।
- एक बार सुई वाहिनी के अंदर है, सुई के आसपास के डुओडेनम पर एक घुमावदार माइक्रो हीमो क्लिप(सामग्री की मेज)रखें(चित्रा 1A)जगह में सुई को सुरक्षित करने और इंजेक्शन समाधान को डुओडेनम में प्रवेश करने से रोकें।
- धीरे-धीरे समाधान (TNBS या वाहन) को एक मिनट के दौरान अग्नाशय वाहिनी में डालें।
नोट: TNBS के लिए समय की एक मिनट से अधिक धीरे संचार की जरूरत है, और यह जलसेक गति को नियंत्रित करने के लिए आसान है जब अग्न्याशय एक 5/16 इंच और 31G सुई के साथ एक इंसुलिन सिरिंज के साथ व्याप्त है । पित्त वाहिनी को चुभने से बचने के लिए हाथ को यथासंभव स्थिर रखें। यदि TNBS सफलतापूर्वक इंजेक्शन है, पीले रंग अग्न्याशय के अंदर दिखाई दे सकता है । - जलसेक के बाद, ध्यान से जिगर के पास माइक्रो क्लैंप को हटा दें, और फिर सुई और डुओडेनम पकड़े हुए माइक्रो क्लैंप को हटा दें।
- ध्यान से डुओडेनम को अपनी मूल स्थिति में वापस करें।
- बंद होने से पहले पेट की गुहा में गर्म बाँझ खारा (36-37 डिग्री सेल्सियस) के 0.5 एमएल छोड़ दें, ताकि डुओडेनम को अपनी मूल स्थिति में लौटने में मदद मिल सके और पेरिस्टालसिस की वसूली में सहायता की जा सके।
- 5-0 सिलाई के साथ निरंतर सीवन का उपयोग करके मांसपेशियों की परत में चीरा बंद करें। 4-0 सिलाई के साथ बाधित सीवन का उपयोग करके त्वचा को बंद करें।
- संज्ञाहरण से वसूली की अनुमति देने के लिए एक हीटिंग पैड पर चूहों युक्त पिंजरे रखें।
- पुष्टि करें कि चूहों गर्म और उन्हें होल्डिंग रूम में लौटने से पहले सहज आंदोलन में सक्षम हैं।
- हर 12 घंटे में एनाल्जेसिक (जैसे, बुप्रेनोरफिन 0.1 मिलीग्राम/किलोग्राम यानी) प्रदान करना जारी रखें और 48 घंटे के बाद सर्जरी के लिए पूरक गर्मी।
3. माउस व्यवहार की निगरानी
- 7 दिन के बाद सर्जरी पर टांके निकालें ।
- पहले सप्ताह के बाद सर्जरी के दौरान माउस स्वास्थ्य और व्यवहार दैनिक निगरानी । संकट के संकेतों जैसे कि वोकलिंग, कूबड़ वापस आसन, या कम लोकोमोशन के लिए देखें। हर दूसरे दिन शरीर के वजन को मापें।
- पहले पेट यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता को मापने के लिए वॉन फ्रे मोनोफिलामेंट्स (वीएफ) का उपयोग करें, और 9,14वर्णित सर्जरी के बाद2,3 सप्ताह।
- ऊपरी पेट क्षेत्र 10x हर 1-2 एस के लिए आरोही क्रम में विभिन्न लागू बलों के VFFs लागू करें। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के रूप में पेट (वापसी प्रतिक्रिया) की स्थापना, पीछे हटने, या चाट पर विचार करें।
- यदि सकारात्मक प्रतिक्रिया नहीं देखी जाती है, और यदि सकारात्मक प्रतिक्रिया देखी जाती है तो एक मजबूत उत्तेजना लागू करें। निकासी सीमा वह बल है जिस पर माउस 50% समय का जवाब देता है।
4. अग्नाशय के ऊतकों का संग्रह और हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण
- सर्वाइकल अव्यवस्था द्वारा संज्ञाहरण के तहत चूहों का बलिदान करें, और ध्यान से आंत और अन्य अंगों से अग्न्याशय को काटना।
- अग्न्याशय को 24 घंटे के लिए 10% पैराफॉर्मलडिहाइड में ठीक करें, पैराफिन में एम्बेड करें, 5 माइक्रोन मोटाई के ऊतक वर्गों को काटें, और उन्हें धुंधला करने के लिए ग्लास स्लाइड पर रखें।
- हेमेटॉक्सीलिन-इओसिन करें, और मैसन के ट्राइक्रोम ने मानक विधियों का उपयोग करके धुंधला कर दिया जैसा कि पहले4बताया गया था।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
इस प्रक्रिया से जुड़ी माउस मृत्यु दर को कम करने के लिए पित्त वाहिनी जलसेकप्रक्रियाओंका अनुकूलन किया गया था । टीएनबीएस को पहले 35 माइक्रोन या 50 माइक्रोल की कुल मात्रा में दिया गया था। 50 माइक्रोन की मात्रा में टीएनबीएस का इंजेक्शन पूरे अग्न्याशय तक पहुंच सकता है और अधिक सजातीय रोग फेनोटाइप(चित्रा 1B)को प्रेरित कर सकता है। इसके अलावा, 31G सुई के साथ इंसुलिन सिरिंज का उपयोग कर TNBS के इंजेक्शन बेहतर नियमित रूप से सिरिंज और सुई आकार के सापेक्ष जलसेक गति को नियंत्रित कर सकता है । हौसले से तैयार TNBS बर्फ पर संग्रहीत और दवा की तैयारी के एक घंटे के भीतर इस्तेमाल भी एक घंटे से अधिक समय तक तैयार TNBS की तुलना में बेहतर परिणाम मिले । इन सुधारों के साथ, प्राप्तकर्ताओं की मृत्यु दर को नियंत्रित किया गया था और 10% के तहत बनी हुई थी ।
शरीर के वजन घटाने सीपी की विशेषताओं में से एक है । नियंत्रण समूह में चूहों सर्जरी के बाद पहले 3 दिनों के दौरान अपने मूल शरीर के वजन का लगभग 6% खो दिया है, तो धीरे से बरामद (21 दिन में मूल शरीर के वजन का १०४.६%)(चित्रा 1C)। इसके विपरीत, TNBS प्राप्त चूहों पहले 5 दिनों के दौरान अपने मूल शरीर के वजन का औसत के बारे में 15% खो दिया है और बाद में वजन आ गया (21 दिन में मूल शरीर के वजन का ९९.८%)(चित्रा 1C)। इसके अलावा, नियंत्रण की तुलना में, TNBS चूहों ने टीएनबीएस इंजेक्शन(चित्रा 1D)के बाद 2 और 3 सप्ताह में पेट यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता में वृद्धि दिखाई, जो पेट दर्द10में वृद्धि के साथ जुड़े होने की संभावना थी।
पुष्टि करने के लिए कि पित्त वाहिनी TNBS जलसेक प्रभावी ढंग से मानव सीपी नकल अग्नाशय परिवर्तन प्रेरित, हम TNBS या वाहन से अग्नाशय के ऊतकों का इलाज 3 सप्ताह के बाद सर्जरी में नियंत्रण चूहों का इलाज एकत्र किया । दोनों आकार, और अग्न्याशय के शरीर के वजन के प्रति वजन काफी नियंत्रण(चित्रा 2A,बी)के साथ तुलना में TNBS चूहों में कम थे, गंभीर और दीर्घकालिक सीपी के साथ मनुष्यों में निष्कर्षों के अनुरूप चिह्नित अग्नाशय शोष का सुझाव । इसके अलावा, नियंत्रण चूहों से अग्न्याशय स्पष्ट रूपात्मक परिवर्तनों के बिना सामान्य दिखाई दिया, जबकि TNBS चूहों वसा सेल घुसपैठ और फाइब्रोसिस(चित्रा 2C)की जगह acinar कोशिकाओं के भारी नुकसान के साथ vacuolization दिखाया । ये निष्कर्ष अन्य अध्ययनों की रिपोर्ट9,10के अनुरूप थे .
चित्रा 1:सीपी चूहों के उत्पादन के लिए TNBS पित्त वाहिनी जलसेक। (A)पित्त वाहिनी इंजेक्शन का चित्रण। (ख)स्याही के 50 माइक्रोन के इंजेक्शन के बाद पित्त नली। (ग)टीएनबीएस या वाहन प्राप्त करने वाले चूहों में शरीर के वजन में परिवर्तन का औसत। (घ)TNBS में पेट प्रतिक्रिया सीमा और जलसेक के बाद 3 सप्ताह में चूहों को नियंत्रित । उपलब्ध विश्लेषण सॉफ्टवेयर (जैसे, ग्राफपैड 8.2.1) का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया। डेटा को एसईएम ± मतलब के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग करके समूहों के बीच मतभेदों का विश्लेषण किया गया था, * * पी < 0.01 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2। TNBS-इलाज चूहों में सीपी के लक्षण वर्णन। (ए)अग्न्याशय के नियंत्रण (सीटीआर) और टीएनबीएस चूहों के माइक्रोग्राफ। (ख)सीटीआर और टीएनबीएस चूहों में माउस बॉडीवेट द्वारा विभाजित औसत अग्न्याशय वजन । (ग)सीटीआर और टीएनबीएस चूहों के अग्न्याशय वर्गों के हेमेटॉक्सीलिन और इओसिन धुंधला । स्केल बार = 100 माइक्रोन। डेटा को छात्र के टी-टेस्ट द्वारा 0.01 <, एसईएम ± मतलब के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
क्रोनिक अग्नाशयशोथ को प्रेरित करने के लिए टीएनबीएस का पित्त वाहिनी जलसेक चूहों में तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है, क्योंकि दवा जलसेक 10 के 3-4 दिनों के भीतर चूहों का22.5%तक मर सकता है। यहां, इस रिपोर्ट ने पिछले अध्ययनों के आधार पर प्रक्रिया को परिष्कृत किया और प्रारंभिक माउस मृत्यु दर को <10% तक कम कर दिया । उदाहरण के लिए, बढ़ी हुई दवा की मात्रा (35 माइक्रोन से 50μL तक) यह सुनिश्चित कर सकती है कि दवाएं पूरे अग्न्याशय तक पहुंचें। एक इंसुलिन सिरिंज और एक छोटे सुई आकार (31G) का उपयोग अग्नाशय वाहिनी और पित्ताशय की थैली या पेट में पित्त के रिसाव के लिए संभावित नुकसान को कम कर देता है, जो सबसे अधिक संभावना सर्जरी के बाद पहले कई दिनों के भीतर माउस मौत का कारण होगा । पित्त वाहिनी के दोनों सिरों को क्लैंपिंग करने से टीएनबीएस को पित्ताशय की थैली और आंत में लीक होने से रोका जा सकता है, जिससे मृत्यु दर हो सकती है। हीमो क्लिप इंजेक्शन अग्न्याशय के भीतर TNBS को नियंत्रित करते हैं, प्रभावकारिता में सुधार करते हुए अन्य ऊतकों को नुकसान को कम करते हैं। इसके अलावा 0 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के तापमान पर टएनबीएस स्थिर नहीं है। इसलिए, हौसले से तैयार TNBS का उपयोग करके, सीपी इंडक्शन ने स्थिर परिणाम प्राप्त किए।
यह प्रोटोकॉल प्रभावी रूप से 8-12 सप्ताह की उम्र में पुरुष C57BL/6J चूहों में सीपी को प्रेरित करता है और एक मॉडल उत्पन्न करता है जो क्रोनिक अग्नाशयशोथ के प्रमुख लक्षणों की नकल करता है, जिसमें शरीर का वजन कम होना, अग्नाशय का शोष, फाइब्रोसिस और संभावित पेट दर्द शामिल है। अन्य सीपी माउस मॉडल की तुलना में, टीएनबीएस मॉडल का व्यापक रूप से सूजन10, 15, 16के अलावा एनाल्जेसिक प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग कियाजाताहै। टीएनबीएस मॉडल का अन्य लाभ यह है कि दवा को सीधे अग्न्याशय में इंजेक्ट किया जाता है, जो अन्य अंगों को नुकसान को कम करता है जो अध्ययन17में हस्तक्षेप कर सकते हैं। इस TNBS सीपी माउस मॉडल का उपयोग अन्य क्रोनिक अग्नाशयशोथ मॉडल के साथ रोगजनकता के साथ-साथ उपचार विकल्पों का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है।
इस अध्ययन की एक सीमा यह है कि 8-10 सप्ताह की उम्र के बीच केवल चूहों का उपयोग किया गया था। चूंकि विभिन्न उम्र के चूहों में अंतर अग्न्याशय आकार हो सकता है, जिसके फलस्वरूप टीएनबीएस-सीपी विकास प्रभावित होता है। इसलिए, क्या विभिन्न उम्र/आकारों में चूहों को टीएनबीएस की एक अलग खुराक दी जानी चाहिए, इसका परीक्षण किए जाने की आवश्यकता है । फिर भी, यह अध्ययन अग्नाशय वाहिनी जलसेक को सफलतापूर्वक करने की प्रक्रियाओं को दर्शाता है जो अग्नाशय के रोगों पर केंद्रित अध्ययनों में मदद कर सकता है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
सभी लेखक घोषणा करते हैं कि उनके हितों का टकराव नहीं है ।
Acknowledgments
इस अध्ययन को दिग्गजों मामलों के विभाग (VA-ORD BLR&D मेरिट I01BX004536) द्वारा समर्थित किया गया था, और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान # 1R01DK105183, DK120394, और DK118529 HW के लिए अनुदान । हम तकनीकी अनुभव साझा करने के लिए डॉ होंगजू वू को धन्यवाद देते हैं ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% Neutral buffered formalin v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
| Alcohol prep pads, sterile | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Animal Anesthesia system | VetEquip, Inc. | 901806 | |
| Buprenorphine hydrochloride, injection | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Centrifuge tubes, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| Extra fine Micro Dissecting scissors 4” straight sharp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
| Graefe forceps 4” extra delicate tip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| Heated pad | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7850 | |
| Insulin syringe with 31-gauge needle | BD | 324909 | |
| Iodine prep pads | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Micro clip applying forceps 5.5” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
| Micro clip, straight strong curved 1x6mm | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5433 | |
| Micro clip, straight, 0.75mm clip width | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5420 | |
| Picrylsulfonic acid solution, TNBS, 1M in H2O | Millipore Sigma | 92822-1ML | |
| Polypropylene Suture 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Polypropylene Suture 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Sodium chloride, 0.9% intravenous solution | VWR | 2B1322Q | |
| Surgical drape, sterile | Med-Vet International | DR1826 | |
| Tissue Cassette | Fisher Scientific | 22-272416 | |
| Von Frey filaments | Bioseb | EB2-VFF |
References
- Klauss, S., et al. Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison. The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).
- Liao, Y. H., et al. Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain. Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).
- Gui, F., et al. Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H. The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).
- Sun, Z., et al. Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice. Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).
- Aghdassi, A. A., et al. Animal models for investigating chronic pancreatitis. Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26 (2011).
- Scoggins, C. R., et al. p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).
- Bradley, E. L. Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis. The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).
- Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study. World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).
- Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain. Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).
- Cattaruzza, F., et al. Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).
- Bai, Y., et al. Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats. Molecular Brain. 12 (1), 76 (2019).
- Puig-Diví, V., et al. Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts. Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).
- Zhang, Y., et al. PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment. Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).
- Ceppa, E. P., et al. Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).
- Puig-Divi, V., et al. Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts. Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).
- Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).
- Drewes, A. M., et al. Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms. Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).
