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- 角质形成细胞是存在于表皮或皮肤最外层的最突出的细胞。它们在真皮上以多层形式排列，与各种其他细胞类型（如黑色素细胞、树突状细胞和默克尔细胞）相关。
要分离角质形成细胞，首先要从人体皮肤中取出表皮组织。接下来，用酶消化缓冲液处理。缓冲液中的酶降解表皮组织中的细胞外基质蛋白，从而启动细胞解离。现在，添加合适的培养基并机械破坏组织。
要将解离的细胞释放到悬浮液中，请通过过滤器过滤表皮细胞悬液以去除任何细胞团块或碎片。离心使表皮细胞沉淀，并将其与含酶的上清液分离。去除上清液并使用首选的角质形成细胞生长培养基重悬细胞。将细胞培养所需的持续时间。
在培养过程中，优化的培养基通过促进角质形成细胞相对于其他表皮细胞类型的选择性生长来丰富角质形成细胞的扩增。在下面的方案中，我们将展示从成人皮肤组织中分离角质形成细胞的过程。
- 从接受整形手术的健康成年志愿者那里收集 10 厘米 x 15 厘米的皮肤样本。将皮肤样本运输到装有冷却元件的泡沫塑料盒中，保持皮肤凉爽。如有必要，将皮肤样品在 4 摄氏度下储存过夜。使用消毒过的剪刀、手术刀和镊子，去除皮肤下方的脂肪。
然后，使用针头，将皮肤切片扣在板顶部的无菌盖上。用干燥、消毒的纱布垫清洁皮肤。然后，在消毒的纱布垫上加入 70% 乙醇。接下来，使用足刨器，切掉皮肤切片的上表皮层，并将其转移到 9 厘米的培养皿中。
然后，立即将 25 毫升先前制备的 DPBS/胰蛋白酶/葡萄糖溶液加入培养皿中。将样品在 37 摄氏度下孵育 30 分钟。使用移液器从培养皿中取出 DPBS/胰蛋白酶/葡萄糖溶液，并加入 10 毫升 RPMI-1640 加 2% FBS 以灭活胰蛋白酶。
现在，用两个镊子，通过轻轻刮擦和搅动皮肤切片的表皮和真皮隔室，将表皮细胞释放到培养基中。通过金属过滤器过滤表皮细胞悬液，并将滤液收集到 50 毫升管中。将剩余的皮肤切片加入含有 10 毫升不含 FBS 的 RPMI-1640 的 50 毫升试管中，涡旋 10 秒。
通过金属过滤器将此悬浮液过滤到含有表皮细胞悬液的 50 毫升试管中。然后，添加 DPBS 至总体积为 50 mL。在室温下以 450 x g 离心细胞悬液 10 分钟。然后，去除上清液，并根据细胞沉淀的大小，将表皮细胞沉淀重悬于约 10 毫升的 37 摄氏度 KSFM 中。
使用台盼蓝染色方法，在显微镜下计数细胞。然后，将 8 乘以 10 的 10 与 12 毫升 37 摄氏度 KSFM 一起转移到第 6 个细胞中。轻轻摇动培养瓶以确保细胞均匀分布。将角质形成细胞在 37 摄氏度、100% 湿度和 5% CO2 的培养箱中孵育。两天后更换培养基，然后每周更换 3 次。
