利用活细胞荧光显微镜成像细菌形态变化

先将细菌培养液固定在琼脂糖板下，置于玻璃底盘中。

细菌细胞膜被荧光染料标记。

这些细菌还被设计成表达一种针对特定mRNA的反义RNA，从而抑制关键细胞分裂蛋白的产生。

在倒置荧光显微镜的物镜中加入一滴浸入油。

将天线放入金属外壳，固定在显微镜台上。

将物镜抬高直到油接触天线，然后对焦电池。

使用成像软件设置Z叠，以便在多深度拍摄图像。

开始获取荧光延时图像。

当细胞对反义RNA表达做出反应时，它们无法分裂，形成肿胀的形状。

膜组织被破坏，导致荧光不均匀且局部，表明细胞分裂有缺陷。

成像样品时，使用粗调节对焦旋钮确保物镜完全降低，然后在显微镜软件中初始化显微镜。将折射率1.517的油滴入100X油浸物镜，并将装有样品的玻璃底盘转移到金属外壳棺材中。

轻轻将碟放入舞台夹中，用粗调旋钮抬起物镜，直到油接触到碟的玻璃底部。用目镜和微调旋钮将样本调到对焦状态，然后切换到相机模式。在Resolve 3D窗口的成像软件中，选择“设计/运行实验”图标。

会出现一个新的对话框，标题为“设计/运行实验”。在对话框中打开“设计和剖面”标签，设置Z堆叠数和样品厚度。要测量样品中单元厚度，可以通过Resolve 3D对话框中的上下箭头逐步调整Z平面，使单元模糊的部分作为图像采集的上下限。

在解析3D对话框中调整光强透射百分比和曝光持续时间后，点击点列表打开点列表。在“设计”和“延时摄影”标签页中，选择“延时摄影”复选框，输入延时摄影参数。选择访问点列表选项，并在文本框中输入要图像的点，用逗号或连字符分隔，以实现完整序列。

然后，在“运行”标签中编辑文件名和文件位置，在“开始实验”对话框中选择“播放”以开始实验。