研究间充质干细胞对巨噬细胞吞噬作用调节的测定

在选定的孔中取装有间充质干细胞或间充质干细胞的多孔板。

引入巨噬细胞并孵育，促进间充质干细胞-巨噬细胞在共培养孔中的相互作用。

将酶聚糖（一种酵母细胞壁成分）与 pH 敏感荧光团偶联到所有孔中。

巨噬细胞清除剂受体与酶聚糖结合，触发其吞噬体内，吞噬体与溶酶体融合形成吞噬溶酶体。

吞噬溶酶体内的酸性 pH 值导致荧光团发出荧光。

在共培养孔中，间充质干细胞投射出隧道纳米管或 TNT，即与巨噬细胞桥接的细胞质延伸。间充质干细胞线粒体通过 TNT 进入巨噬细胞，增加功能性线粒体的总数。

体数量升高会增加三磷酸腺苷或 ATP 的产生，从而增加吞噬作用的能量需求。

记录内化荧光团偶联的酶聚糖随时间变化的荧光强度。

与仅具有巨噬细胞的孔相比，共培养显示荧光增加，表明 MSC 介导的巨噬细胞吞噬作用增强。

含有间充质干细胞的实验孔中轻轻吸出培养基。使用多通道微量移液器根据板设计在适当的实验孔中加入100微升处理后的巨噬细胞和对照巨噬细胞悬液，并如图所示孵育过夜。将一毫升活细胞成像培养基加入装有一毫克酶聚糖颗粒的小瓶中，并将培养基颗粒混合物收集到玻璃培养管中。

用额外的一毫升成像溶液冲洗小瓶后，将冲洗后的成像介质转移到玻璃管中。然后，加入3毫升额外的成像溶液，以达到0.2mg / ml的酶聚糖颗粒悬浮液。使用快速脉冲涡旋 zymosan 悬浮液 30 至 60 秒。然后，使用探头超声仪对悬浮液进行 60 次快速脉冲超声处理。吸出培养基后，用100微升活细胞成像溶液冲洗试剂空白孔中的实验孔。

接下来，从孔中吸出活细胞成像溶液，并加入100微升酶聚糖悬浮液。使用触摸板界面打开荧光读数器的板托盘。将不带盖的盘子放在带有 A1 孔的托盘中，位于左上角。使用触摸板关闭托盘，然后单击顶部菜单中的绿色"阅读"按钮。