一种研究间充质干细胞调控巨噬细胞吞噬作用的检测方法

选取含有间充质干细胞（MSCs）的多孔板中的特定孔。

加入巨噬细胞并进行孵育，以促进共培养孔中MSC与巨噬细胞之间的相互作用。

向所有孔中加入与 pH 敏感型荧光染料偶联的酵母细胞壁成分——酵母聚糖。

巨噬细胞清道夫受体与酵母聚糖结合，触发其被吞噬进入吞噬体，随后吞噬体与溶酶体融合形成吞噬溶酶体。

吞噬溶酶体内的酸性pH环境会导致荧光团发出荧光。

在共培养孔中，间充质干细胞（MSCs）伸出隧道纳米管（TNT），即连接巨噬细胞的细胞质突起。MSC的线粒体通过TNT进入巨噬细胞，增加巨噬细胞内功能性线粒体的总数。

线粒体数量增加可增强三磷酸腺苷（ATP）的生成，从而为吞噬作用的增强提供所需的能量。

记录内化荧光素偶联酵母聚糖随时间变化的荧光强度。

共培养组的荧光强度高于仅含巨噬细胞的孔，表明间充质干细胞增强了巨噬细胞的吞噬作用。

轻轻吸出含有间充质干细胞的实验孔中的培养基。根据培养板的设计，使用多通道微量移液器向相应的实验孔中加入100微升经处理的和对照的巨噬细胞悬液，并按所示方法孵育过夜。向含有1毫克酵母聚糖颗粒的小瓶中加入1毫升活细胞成像培养基，然后将培养基与颗粒的混合物收集至玻璃培养管中。

用额外的 1 毫升成像溶液冲洗小瓶后，将冲洗后的成像液转移至玻璃管中。然后加入 3 毫升额外的成像溶液，以获得浓度为 0.2 mg/ml 的酵母聚糖颗粒悬浮液。使用涡旋振荡器以短脉冲快速涡旋 30 至 60 秒。随后，使用探头式超声波破碎仪对悬浮液进行超声处理，共施加 60 次快速脉冲。吸除培养基后，用 100 微升活细胞成像溶液冲洗实验孔及试剂空白孔。

接下来，吸出孔板中的活细胞成像溶液，并加入 100 µL 的酵母聚糖悬浮液。使用触摸屏界面打开荧光读板仪的板架。将无盖的孔板放入板架中，确保 A1 孔位于左上角。使用触摸屏关闭板架，然后点击顶部菜单中的绿色 “读取” 按钮。