探索昆虫蛹炎症细胞动力学的光转化技术

0 views • 3:44 min • July 8th, 2025

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从一个玻璃底培养皿开始,该培养皿含有转基因果蛹,携带标记的受伤上皮细胞,其细胞表面蛋白表现出绿色荧光。

蛹的免疫细胞——或血细胞在细胞质中表达光可转化的绿色荧光团,在细胞核中表达红色荧光蛋白,促进细胞追踪。

受伤的细胞释放化学引诱剂或炎症分子,将血细胞吸引到受伤部位。

共聚焦显微镜显示被绿色上皮细胞包围的受伤区域。

愈合过程中,伤口附近带有红色细胞核的绿色血细胞会延伸膜突起——丝状伪足和片状伪足,并向受伤区域迁移。

随着时间的推移

,随着趋化剂的扩散,远处的血细胞向伤口迁移,产生免疫细胞波。

405纳米波长照亮迁移血细胞的亚群。这不可逆地将血细胞的光转化荧光团从绿色转换为红色。

这些光转化的血细胞修复受伤的上皮细胞并远离伤口部位,将光转化的血细胞与非光转化的血细胞区分开来,并阐明炎症细胞的动力学。

伤及瞳孔翼缘后,快速将玻璃底培养皿转移到适当的显微镜上进行延时成像。然后,打开相应的图像捕获软件。

在软件中,打开适当的激光器,并调整其功率和增益偏移,以获得足够的荧光信号,而不会出现像素饱和。通常,5% 到 20% 范围内的最低激光功率最适合最大限度地减少光漂白。

在低倍率下聚焦于整个瞳翼,或在高倍率下聚焦于伤口,以研究伤口修复。为了捕获修复上皮和炎症细胞募集,首先,使用控制面板上的精细焦点调整将显微镜设置为记录 z 堆栈。从受伤的上皮细胞扫描到下面的细胞外空间,其中包含迁移的血细胞。

接下来,将软件设置为每 3 微米或以更紧的间隔记录通过瞳孔翼的 z 切片。对于延时成像,至少每 30 秒记录一次 z 堆栈,持续至少一小时。

当使用光可转换探针在成像过程中选择性地光转换和标记细胞子集时,请打开成像软件中的相应模块以执行光转换并激活 405 纳米激光器。然后,使用选择工具在 FRAP 软件中选择要进行照片转换的单元格。

接下来,将照片转换的时间过程设置为单个迭代帧,并将 405 纳米激光设置为 20% 激光功率,然后单击"开始 实验"进行照片转换。完成后,退出 FRAP 模块并返回原始成像屏幕。在那里,将激光调整到正在使用的荧光团,并使用延时记录对光转换和非光转换的细胞进行成像。

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Last updated: 4 July 2026