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神经科学
0 次观看 • 4:08 分钟 • July 8th, 2025
首先，在灌流室中的网状网格上灌注含氧的人工脑脊液（aCSF）。
转移含有表达荧光蛋白神经元的脑切片，并用铂金丝装置固定。
旋转网格以进行对齐。
将多通道探针缓慢降至切片上。
调整滤光立方体以观察荧光蛋白。
旋转切片以对齐探针。
调节探头高度至组织表面以下。
现在，灌注 aCSF 并聚焦于荧光标记的神经元。
使用高倍物镜聚焦组织，并调节激发光。
使用适当的光学滤光片观察神经元中的荧光。
调整物镜，为膜片电极留出空间，并施加正压。
接下来，将移液管置于神经元附近，以形成细胞膜凹陷。
最后，施加微弱负压以形成膜封接，随后施加强负压破裂膜片，从而对目标神经元进行电生理记录。
将多通道探针置于 ex 体内 脑组织切片，以每分钟三至六毫升的速度灌注通入氧气的实验用人工脑脊液，将包含目标区域的脑切片转移至显微镜灌流室中的网格支架上。用铂金丝网固定脑切片。旋转网格支架，使多通道探针远端电极触点的连线大致垂直于PL表面。
在宽场照明和精细控制显微操作器的条件下，将多通道探针缓慢下降至脑片表面。启用适当的滤光镜组，以观察皮层传入纤维轴突末梢中表达的荧光报告蛋白。
如有必要，旋转脑片以更精确地使探针与PL层表面对齐。将探针置于脑片平面略上方，在x轴方向距离最终目标位置200 µm处，确保至少有一个通道位于记录组织区域之外。沿探针的长轴方向缓慢将其插入脑片中。
为尽量减少对组织的损伤，仅将探针推进至锐利尖端刚好可见于组织表面下方即可。将实验用人工脑脊液（ACSF）的来源切换至预装袋的对照溶液，并识别出荧光标记的细胞以进行靶向膜片钳记录。将孔径缩小至最小直径，启用高倍水浸物镜，注意避免多通道探针与物镜镜头发生接触。调节使组织进入清晰焦点。
将光源对准多通道探针附近但不重叠的组织区域。启用适当的滤光片组，以实现表达Cre依赖性荧光标记的细胞成像。升高物镜，为降低膜片钳电极留出充足空间。
用内液填充玻璃微电极，并将其安装在电极夹持器上。使用1毫升注射器施加正压，相当于约0.1毫升空气。将玻璃微电极缓慢放入溶液中，在视觉引导下使电极尖端进入焦点位置，并对目标细胞获取全细胞记录。