脑切片中神经元细胞的同步光学和电生理监测

首先在灌注室中的网状网格上灌注充气的人工脑脊液或 aCSF。

转移含有表达荧光蛋白的神经元的脑切片，并用铂金接线装置将其锚定。

旋转网格网格以进行对齐。

多通道探头朝切片降低。

调整滤光片立方体以实现荧光蛋白可视化。

旋转切片以对齐探头。

调整组织表面以下的探头高度。

现在，灌注aCSF并专注于荧光标记的神经元。

使用高倍物镜，聚焦于组织并调整激发光。

使用适当的滤光片观察神经元中的荧光。

调整物镜，为贴片移液器腾出空间并施加正压。

接下来，将移液器放置在神经元附近以形成膜凹坑。

最后，施加弱吸力以形成膜密封，然后施加强吸力以破坏膜并从目标神经元获得电记录。

要将多通道探针放置在离体脑组织载玻片中，以每分钟三到六毫升的速度灌注鼓泡的实验ACSF，并将包含感兴趣区域的脑切片转移到显微镜灌注室中的网状网格上。用铂金竖琴固定大脑切片。旋转网格，使多通道探头远端的电极触点线大致垂直于 PL 表面。

在显微纵器的宽视场照明和精细控制下，将多通道探头降低到切片表面。使用适当的滤光片立方体来可视化皮质传入神经轴突末端中表达的荧光报告蛋白。

如有必要，旋转切片以更精确地将探头与 PL 表面对齐。将探头放置在切片平面正上方，沿x轴距离最终目标位置200微米，在被记录的组织区域之外至少留出一个通道。慢慢地，将探头沿其纵轴插入切片中。

为尽量减少对组织的损伤，请仅将探头推进到尖锐尖端在组织表面下方可见的程度。将实验性ACSF源切换到袋装对照溶液，并识别荧光标记的细胞以进行靶向膜片钳记录。将孔径限制在最小直径，并接合高倍水浸物镜，注意避免多通道探头和物镜接触。将组织聚焦。

光线集中在与多通道探头相邻但不重叠的组织区域上。使用适当的滤光片组，以允许对表达 Cre 依赖性荧光标记物的细胞进行成像。抬起物镜，为降低贴片移液器创造足够的空间。

入装有内部溶液的贴片移液器并安装在电极支架上。使用一毫升注射器施加相当于大约 0.1 毫升空气的正压。将贴片移液器放入溶液中，在视觉引导下使吸头聚焦，并从目标细胞获得全细胞记录。