使用原子力显微镜表征小鼠脑组织的机械性能

在预热的培养基中取一个涂有生物粘合剂的培养皿，其中有固定的小鼠脑切片。

放在预热的原子力显微镜或 AFM 载物台上以保持生理条件。

一滴介质滴在位于 AFM 头上方的 AFM 悬臂的球形珠子上。

接下来，重新定位 AFM 头并将其浸入介质中。

激光束对准悬臂，以使用光电二极管跟踪悬臂偏转。

降低 AFM 探针，直到它接触脑组织表面。

对于蠕变顺应性测量，对 AFM 探头进行编程以施加恒定力。

当悬臂弯曲时，这种力会导致组织变形。激光检测悬臂

弯曲并测量组织刚度。

对于力松弛测量，将组织压痕到固定深度并保持它。

激光跟踪悬臂弯曲，以测量组织阻力和随时间的松弛，从而能够精确评估组织的机械性能。

小心地将标称弹簧常数为每米 0.03 牛顿和直径为 20 微米的硼硅酸盐珠的 AFM 探针装入探针支架。将安装在培养皿中的脑切片放在已预热至37摄氏度的AFM载物台安装加热器上。

然后，加入约 2 毫升预热的培养基。

接下来，小心地在 AFM 探针上滴一滴介质，以防止它在将其降低到脑切片周围的介质中时因表面张力而破裂。然后，将 AFM 头重新定位到载物台上。并开始降低头部，直到它浸没在介质中。

使用光学显微镜移动载物台，使感兴趣区域位于校准的 AFM 探针下方。然后，降低 AFM 探针以与组织表面接触。为了进行蠕变柔性实验，请在软件的函数编辑器中构造一个施加的力函数。

该函数包括 0.1 秒斜坡到 0.05 纳牛顿，保持 20 秒，然后 1 秒斜坡下降到 0 纳牛顿。该软件将在施加力功能期间记录AFM探针压痕到组织中的数据。运行蠕变柔性实验后，通过在软件中创建应用压痕函数来进行力松弛实验。运行此功能时，软件会收集有关 AFM 探针在压进组织时所承受的力的数据。