使用透射电子显微镜对小鼠脑切片进行超微结构分析

取嵌入树脂块中的四氧化二鋇固定小鼠大脑切片。

获取剖面图像并将其与预先准备好的图集图像对齐以识别感兴趣区域。

块上标记该区域的边界。

加热树脂使其软化并切除标记区域。

样品粘在玻璃固定杆上并修剪。

使用超切片机，制备半薄和超薄切片。

半薄和超薄切片分别转移到玻璃载体和镍网格上。

用与核酸、富含核糖体的细胞质和细胞外基质结合的染料对半薄切片进行染色。

清洗切片并在光学显微镜下检查它们以确认目标区域的存在。

透射电子显微镜下观察超薄切片。

四氧化锇增强了细胞膜和细胞器膜的电子密度，与电子密度较低的细胞质具有高对比度，从而能够可视化细胞超微结构。

要绘制感兴趣区域，请从先前准备好的图像图集中选择包含感兴趣区域的图像。在剖面图像上勾勒出感兴趣区域的边界。在显微镜下将这些边界光学叠加到嵌入的标本上，并使用一英寸 26 号针将这些区域边界划到树脂标本上。然后，将试样加热至 95 摄氏度以软化树脂。

接下来，从烤箱中取出温热的树脂样本，并使用剃须刀片切除感兴趣的区域。将标本粘在适当口径的丙烯酸玻璃固定杆上，并修剪安装的标本以进行半薄和超薄切片。使用超微切片机获取半薄 0.7 微米和超薄 70 纳米切片，将半薄切片收集在玻璃载体上，将超薄切片收集在镍网格上。

PBS中用1%甲苯胺蓝染色半薄切片四分钟，然后在去离子水中洗涤几次，然后通过光学显微镜检查切片。然后可以通过 180 kV 的透射电子显微镜直接评估超薄切片，无需进一步修改。