制定通过Nanoprecipitation技术嵌段聚合物纳米粒子

该程序的总体目标是使用纳米沉淀法合成聚合物纳米颗粒。这是通过首先进行 E-D-C-N-H-S 反应以生成 A-P-L-G-A PEG 共聚物来实现的。然后使用 PLGA PEG 共聚物生成纳米颗粒，通过纳米沉淀封装目标药物或货物。

此时，可以通过动态光散射透射电子显微镜或 HPLC 进行基本的生物物理表征，包括尺寸、表面电荷和药物负载效率。这项技术的影响延伸到肿瘤的治疗，因为纳米颗粒可以提供难溶的抗癌疗法，这可能比目前的治疗方法更有效。虽然这种方法可以提供对癌症治疗的见解。

它还可用于研究其他系统，例如细胞运输。纳米颗粒可以与靶向配体偶联，并通过使用演示该技术的成像剂在体内或 vi 体外可视化。今天将是我们实验室的两名技术人员 Rohit Sukumar 和 Natalie Cummings，开始合成 PLGA PEG 共聚物溶解 PLGA，在乙腈中以 5 毫摩尔的浓度羧化，轻轻搅拌。

然后加入足够的 NHS 和 EDC 以获得 25 毫摩尔的浓度，与 PLGA 相比，提供 5 倍的过量，轻轻搅拌溶液约 1 小时，使 PLGA 羧酸盐转化为 PGA NHS。1小时后，加入约10倍体积的洗涤液甲醇沉淀出PGA NHS反应产物，过量的甲醇加入溶液中，以2000倍G离心溶液沉淀，离心后的P-L-G-A-N-H-S弃去SUP natin，以去除痕量的EDC和NHS。这种用甲醇洗涤的过程至少重复 3 次。

洗涤完成后。在真空下干燥 P-L-G-A-N-H-S 30 分钟，以去除洗涤液的任何痕迹。现在红色将 P-L-G-A-N-H-S 沉淀溶解在 aceto NI 试验中，浓度与最初用于溶解 PLGA 的浓度相同。

一旦溶解。将异质双功能 PEG 添加到 PLGA 溶液中。添加 5 毫摩尔的浓度。

将混合物溶液孵育 24 小时，并在 24 小时后不断搅拌。通过添加过量的甲醇沉淀 PLGA PEG 嵌段共聚物反应产物。执行洗涤和离心过程，再进行 3 次以去除所有多余的未反应钉子。

作为合成的最后一步，在真空纳米颗粒沉淀下干燥 PLGA PEG 嵌段共聚物，首先将 PLGA PEG 嵌段共聚物和要封装的药物溶解在 A-P-L-G-A 溶剂中。溶剂的选择至关重要，因为它会影响纳米颗粒的性能。然后将聚合物药物混合物滴加到 3 至 10 体积的搅拌水中，以获得约 3 毫克/毫升的最终聚合物浓度。逐滴。

水相中添加有机溶液对于形成正确尺寸的纳米颗粒至关重要。在减压下继续搅拌 2 小时，使纳米颗粒通过自组装形成并去除微量有机溶剂。搅拌两个小时后。

使用 Amon 过滤器以 2， 700 倍 G 离心 10 分钟，浓缩纳米颗粒。然后用 PBS 洗涤纳米颗粒以去除任何未包埋的药物，然后离心。最后，在 PBS 中重构纳米颗粒此时。

可以进行基本的生物物理表征，包括大小、表面电荷和药物负载效率，以更好地了解纳米颗粒的特性。纳米颗粒可以按照书面方案中的描述储存，以表征 PLGA PEG 纳米颗粒透射电子显微镜用于确认纳米颗粒的大小、分布和结构。粒径一般在纳米范围内。

粒径分布不均匀的大粒径可能表明偶联反应存在错误，或者纳米沉淀法需要优化。此处显示的是药物释放动力学研究，其中紫杉醇负载效率和释放使用标准 HPLC 进行定量。以固定的时间间隔透析已知固定数量的纳米颗粒。

收集透析装置中的内容物，并加入等体积的有机溶剂以溶解纳米颗粒。然后对这些样品进行 HPLC。为了量化紫杉醇含量，一旦掌握，这种纳米沉淀技术可以在三个小时内正确进行。

请记住，在执行此技术时，应始终将有机相缓慢添加到水相中，以防止在显影后产生大颗粒。这项技术为纳米医学领域的癌症研究人员铺平了道路，以探索使用难溶性药物，这些药物曾被认为对接受此手术的癌症患者毒性太大。可以执行其他方法，例如体内功效研究或成像研究，以回答诸如难溶性药物是否有效、全身毒性何时不再是问题，或者靶向配体是否正确地将纳米颗粒靶向其目的地等问题。