基因转移到老年人的鸡胚前OVO电穿孔

介绍将在以后的孵化阶段（比汉堡和汉密尔顿阶段（HH）22岁以上）的鸡胚胎的基因转移方法。这种方法克服缺点

该程序的总体目标是在体内将基因转移到老年鸡胚胎中，以研究老年发育阶段的基因功能和调节。这是通过在孵化第 2.5 天左右首先敲碎一个鸡蛋，然后将整个胚胎转移到培养皿系统中来实现的。第二步是注射质粒，将目标基因编码到胚胎的适当部分。

注射质粒后，将电极放在胚胎旁边并进行 X ovo 电穿孔，最后一步是收集电穿孔的胚胎进行分析。最终，免疫组化用于检测胚胎中转移基因的表达。今天，我们将向您展示如何使用鸡 BUL 进行 X 椭圆形电穿孔。

该技术的主要优点是 X over 电穿孔可以克服用于老年鸡胚胎基因转移的 in over 电穿孔问题。成功的鸡胚胎 X 卵培养需要使用新鲜的受精蛋。不要使用在 12 摄氏度下储存超过一周的鸡蛋。

孵化 2.5 天后，将鸡蛋长边放在 37.5 摄氏度、60% 湿度的强制通风孵化器中。当胚胎大约处于汉堡包和汉密尔顿时。第 17 阶段，从孵化器中取出鸡蛋。

用铅笔标记每个鸡蛋的顶部，以指示每个鸡蛋破裂的方向。将约 20 毫升无菌蒸馏水倒入直径为 145 毫米的干净大培养皿中。将直径为 94 毫米的小无菌培养皿放入大培养皿中。

接下来，将每个鸡蛋的底部靠在锋利的金属边缘上敲碎。小心地打开鸡蛋，将其全部内容物转移到小培养皿中。为确保胚胎的良好质量，鸡蛋的全部内容物应以正常圆形形式保存在培养皿系统中，而不会损伤绒蛋白膜。

将每个鸡蛋的内容物转移到小盘子中后，用盖子盖住大盘子。将培养皿系统放入另一个培养箱中，在 X ovo 电穿孔之前在 37.5 摄氏度和约 60% 湿度下进一步培养。使用极微电极从直径为 1.0 mm 的玻璃管中拉出玻璃毛细管。

将玻璃毛细管的尖端掰成合适的直径。接下来，为电穿孔设置适当的参数，例如针对胚胎的不同组织和大小的不同电压。根据目标组织和胚胎的大小将适当的电极连接到电上。

制备含有质粒的质粒溶液，编码靶基因和标记基因。在该演示中，钙粘蛋白 7 或 CAD 7 是靶标，绿色荧光蛋白或 GFP 是标记物。加入固绿至终浓度为 0.1%，以将质粒溶液标记为绿色。

最后，使用口吸管将质粒溶液加载到玻璃毛细管中。来自孵化 6 天的 X 卵培养物的鸡胚胎用于 X 卵电穿孔。要开始此过程，请使用细镊子小心地撕开视柱盖上的泰伦膜和羊膜，并在柱盖表面加入三滴无菌 0.9% 氯化钠溶液。

使用口腔移液器，将质粒溶液从玻璃毛细管注入盖腔中。将带有钨针阴极和矩形板阳极的电极放在盖板旁边。立即使用电脉冲对顶盖施加电脉冲。

将编码 GFP 和 CAD 7 的质粒电穿孔到 E 6 的鸡盖中后两到三天，用盖子盖住大培养皿，并将其放回培养箱中，收集盖层并固定用于免疫染色。结果显示在图 E 8 处。GFP 蛋白在 tum 中强烈表达，如此处的这些整个安装图像所示。

图 A 是明场图像。图 B 是 A GFP 图像，图 C 出现。图像此外，在 E 的顶盖切片中，图 D 中以绿色显示的 9 个 GFP 蛋白和 E 图中以红色显示的 CAD 7 个蛋白质共表达，如图 F 中黄色所示。

看完这个视频，你应该对如何将基因转移到老鸡胚胎中以及你的实验好运有了很好的了解。