为获取原发性卵巢癌细胞固体样品的方法

该程序的总体目标是从实体临床标本中分离和表征原代卵巢癌细胞。这是通过首先收集卵巢肿瘤标本并将其放入培养皿中来完成的。第二步是将样品切成小块，并将小块转移到装有消化试剂的锥形管中进行孵育。

接下来，细胞浆液通过过滤器，仅收集细胞进行离心，最后一步是弃去上清液并将细胞重悬于培养基中孵育过夜。最终，上皮性卵巢癌细胞将在培养物中生长数周，从而允许下游应用。这种方法可以帮助回答卵巢癌领域的关键问题，例如每个患者的最佳治疗方案是什么。

这项技术的影响延伸到卵巢癌的治疗，因为它使我们能够使用更真实的细胞培养物，这些细胞培养物对基因作极易受到基因作的影响，对药物筛选测试更有用。首先，补充 500 毫升 delcos、改良鹰、培养基或 DMEM，其中含有 10% 胎牛血清或 FBS 和 1% 青霉素、链霉素或 ps。将培养基储存在 4 摄氏度。

从手术室收集样本，并将其在冰上运输到仍在运输容器内的实验室。将样品放入生物安全罩中。将样品从 50 mL 锥形管转移到装有 10 mL 新鲜冰冷 PBS 的 60 mm x 60 mm 培养皿中。

接下来，进一步使用无菌剃须刀片，将样品切成两毫米或更小的块。然后在 15 升锥形管中用圆盘糊管处理 DMEM。将切碎的组织转移到 DMEM dispa two 混合管中。

然后将样品在 5% 二氧化碳和 37 摄氏度下孵育 30 分钟。每 5 分钟手动搅拌一次细胞浆液，以确保最佳消化。孵育后，将细胞浆液转移至放置在 50 mL 锥形管顶部的 70 微米网状细胞过滤器。

使用注射器柱塞轻轻地对网片施加压力，丢弃残留在网片顶部的任何未结合的组织，并将获得的细胞悬液收集在 50 毫升无菌锥形管中。接下来，离心。锥形管在 320 倍 G 下在 4 摄氏度下保持 7 分钟。

弃去上清液，将细胞沉淀重悬于含有 10% FBS 和 1%ps 的 10 毫升 DMEM 中。然后将细胞悬液转移到培养皿中，并在 5% 二氧化碳和 37 摄氏度下孵育悬液。初始铺板后 24 小时更换培养基，以去除培养物中存在的细胞碎片和大部分红细胞。

最后，在接下来的两周内每三天更换一次培养基，之后原代 EOC 细胞的培养物即可用于下游应用。电镀后立即。上皮性卵巢癌细胞或 EOC 细胞表现为单细胞悬液，并且与红细胞和细胞碎片成团

铺板 3 天 后 EOC 细胞培养显示半贴壁 EOC 细胞簇和较少的红细胞污染。初始铺板后一周，EOC 细胞培养物变成漩涡状细胞簇，铺展在组织培养塑料上。典型的上皮鹅卵石形态可以在 EOC 细胞的汇合单层中观察到培养 14 天。

看完这个视频后，您应该对如何从实体临床标本中分离和表征原发性卵巢癌细胞有了很好的了解。