Name: 表型鼠标肺功能在体内与肺弥散功能 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-06T10:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 了解如何使用校准气相色谱仪测量小鼠肺弥散功能。该方法通过向麻醉小鼠肺部充入含氖和一氧化碳的气体，保持九秒后收集并分析气体，从而评估多种肺部疾病模型中的肺功能变化。该技术简单、可重复，且可与人类测量结果直接比较，为转化医学研究提供了重要工具。

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本工作由 NIH HL-10342 资助

注意：所有动物实验方案均经约翰斯·霍普金斯大学动物护理与使用委员会批准。
1. 动物准备
<ol>
	<li>按照下文步骤2.3所述方法，使用氯胺酮和赛拉嗪麻醉6只C57BL/6对照小鼠，以准备进行DFCO测量。</li>
	<li>采用与对照组相同的操作步骤，准备表1中所列具有不同肺部病理状态的其他小鼠。建立每种模型所需的具体细节参见相关参考文献。对照小鼠及其他病理组小鼠的年龄均为6至12周。</li>
</ol>
2. 一氧化碳扩散因子（DFCO）的测定
<ol>
	<li>设置仪器附带的气相色谱模块，用于检测氮气、氧气、氖气和一氧化碳的峰。本应用中仅使用氖气和一氧化碳的数据。 
	注意：该仪器使用分子筛色谱柱，载气为氦气，色谱柱膜厚为 12.00 µm，内径为 320.00 µm，长度为 10 m。色谱柱体积为 0.8 ml，但我们使用 2 ml 以确保样品连接管路得到充分冲洗。</li>
	<li>在每个实验日开始时，在对小鼠样品进行测量之前，直接从含有约 0.5% 氖气、0.5% 一氧化碳及余量为空气的混合气体袋中抽取 2 ml 气体样品，并用此样品校准气相色谱仪。</li>
	<li>使用氯胺酮（90 mg/kg）和赛拉嗪（15 mg/kg）对小鼠进行麻醉，并通过无反射性运动确认麻醉效果。在小鼠眼部涂抹兽用眼膏以防止干燥。使用短针套管（成年小鼠用 18 G，幼龄小鼠用 20 G）对小鼠进行气管切开术。 
	注意：DFCO 测量在麻醉后 10 分钟内完成，且在任何机械通气或其他操作之前进行。</li>
	<li>对于年龄超过 6 周的小鼠，使用 3 ml 注射器从混合气体袋中抽取 0.8 ml 气体。将注射器连接至气管套管，迅速充气使肺扩张。使用节拍器计时 9 秒，然后迅速抽出 0.8 ml（呼出气体）。</li>
	<li>将抽出的 0.8 ml 呼出气体用室内空气稀释至 2 ml，静置至少 15 秒。然后将整个样品注入气相色谱仪进行分析。</li>
	<li>在分析第一个 DFCO 样品的同时，用混合气体袋中的另一份 0.8 ml 气体再次充盈小鼠肺部，随后以与第一个样品相同的方式处理该样品。取两次 DFCO 测量值的平均值。 
	注意：对于低至 2 周龄的小鼠，应使用 0.4 ml 的体积，因为 0.8 ml 对幼龄小鼠肺部而言体积过大。建议对 6 周龄以上小鼠使用 0.8 ml 体积；若某些小鼠需使用 0.4 ml 体积，则在同一研究队列中所有小鼠均应一致使用该体积。</li>
	<li>DFCO 的计算公式为 1 – (CO9&#160;/&#160;COc)&#160;/&#160;(Ne9&#160;/&#160;Nec)，其中下标 c 和 9 分别表示注入的校准气体和经过 9 秒屏气后采集气体的浓度。</li>
	<li>使用单因素方差分析（one-way ANOVA）分析并比较各组小鼠之间的差异，并采用 Tukey 校正法评估多重比较的显著性水平。将 p &#60;0.05 视为具有统计学意义。 
	注意：本研究所使用的所有小鼠均参与了涉及后续多次肺通气、肺力学、肺灌洗或组织学检测的实验研究，但这些内容未在此报告。此外，由于所有实验模型中的方法均与对照组小鼠所用方法相同，此处仅展示各种病理模型的结果。有关这些模型的更多信息见补充表格。</li>
	<li>通过深度麻醉过量后实施颈椎脱位或断头法处死动物。如需进一步生物学或组织学处理与分析，可从死亡小鼠中取出肺细胞和/或肺组织。</li>
</ol>

<ol><li>Ogilvie, C. M., Forster, R. E., Blakemore, W. S., Morton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+breath+holding+technique+for+the+clinical+measurement+of+the+diffusing+capacity+of+the+lung+for+carbon+monoxide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">A standardized breath holding technique for the clinical measurement of the diffusing capacity of the lung for carbon monoxide.</a> J Clin Invest. 36 (1 Pt 1), 1-17 (1957).</li>
<li>Miller, A., Warshaw, R., Nezamis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusing+capacity+and+forced+vital+capacity+in+5%2C003+asbestos-exposed+workers%3A+Relationships+to+interstitial+fibrosis+%28ILO+profusion+score%29+and+pleural+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ind+Med%22%5BJournal%5D)">Diffusing capacity and forced vital capacity in 5,003 asbestos-exposed workers: Relationships to interstitial fibrosis (ILO profusion score) and pleural thickening.</a> Am J Ind Med. 56 (12), 1383-1393 (2013).</li>
<li>Enelow, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+consequences+of+alveolar+cell+recognition+by+CD8%28%2B%29+T+lymphocytes+in+experimental+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Structural and functional consequences of alveolar cell recognition by CD8(+) T lymphocytes in experimental lung disease.</a> J Clin Invest. 102 (9), 1653-1661 (1998).</li>
<li>Hartsfield, C. L., Lipke, D., Lai, Y. L., Cohen, D. A., Gillespie, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+mechanical+and+immunologic+dysfunction+in+a+murine+model+of+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary mechanical and immunologic dysfunction in a murine model of AIDS.</a> Am J Physiol. 272 (4 Pt 1), 699-706 (1997).</li>
<li>Wegner, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+adhesion+molecule-1+contributes+to+pulmonary+oxygen+toxicity+in+mice%3A+role+of+leukocytes+revised%5BTitle%5D)+AND+%22Lung%22%5BJournal%5D)">Intercellular adhesion molecule-1 contributes to pulmonary oxygen toxicity in mice: role of leukocytes revised.</a> Lung. 170 (5), 267-279 (1992).</li>
<li>Reinhard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+strain+variation+in+lung+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Inbred strain variation in lung function.</a> Mamm Genome. 13 (8), 429-437 (2002).</li>
<li>Sabo, J. P., Kimmel, E. C., Diamond, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+Clara+cell+toxin%2C+4-ipomeanol%2C+on+pulmonary+function+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of the Clara cell toxin, 4-ipomeanol, on pulmonary function in rats.</a> J Appl Physiol. 54 (2), 337-344 (1983).</li>
<li>Depledge, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiration+and+lung+function+in+the+mouse%2C+Mus+musculus+%28with+a+note+on+mass+exponents+and+respiratory+variables%29%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol%22%5BJournal%5D)">Respiration and lung function in the mouse, Mus musculus (with a note on mass exponents and respiratory variables).</a> Respir Physiol. 60 (1), 83-94 (1985).</li>
<li>Depledge, M. H., Collis, C. H., Barrett, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+measuring+carbon+monoxide+uptake+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">A technique for measuring carbon monoxide uptake in mice.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 7 (4), 485-489 (1981).</li>
<li>Fallica, J., Das, S., Horton, M. R., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+Carbon+Monoxide+Diffusing+Capacity+in+the+Mouse+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Application of Carbon Monoxide Diffusing Capacity in the Mouse Lung.</a> J Appl Physiol. 110 (5), 1455-1459 (2011).</li>
<li>Chaudhary, N., Datta, K., Askin, F. B., Staab, J. F., Marr, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+regulates+epithelial+cell+response+to+Aspergillus+and+resultant+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator regulates epithelial cell response to Aspergillus and resultant pulmonary inflammation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 185 (3), 301-310 (2012).</li>
<li>Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodology+for+the+measurement+of+mucociliary+function+in+the+mouse+by+scintigraphy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy.</a> J Appl Physiol. 90 (3), 1111-1117 (2001).</li>
<li>Yildirim, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palifermin+induces+alveolar+maintenance+programs+in+emphysematous+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Palifermin induces alveolar maintenance programs in emphysematous mice.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181 (7), 705-717 (2010).</li>
<li>Collins, S. L., Chan-Li, Y., Hallowell, R. W., Powell, J. D., Horton, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vaccination+as+a+novel+treatment+for+lung+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vaccination as a novel treatment for lung fibrosis.</a> PLoS One. 7 (2), e31299(2012).</li>
<li>Alessio, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+Tregs+resolve+experimental+lung+injury+in+mice+and+are+present+in+humans+with+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CD4+CD25+Foxp3+ Tregs resolve experimental lung injury in mice and are present in humans with acute lung injury.</a> J Clin Invest. 119 (10), 2898-2913 (2009).</li>
<li>Martinez, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+course+of+patients+with+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">The clinical course of patients with idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Ann Intern Med. 142 (12 Pt 1), 963-967 (2005).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+lethal+intestinal+defect+in+a+mouse+model+of+cystic+fibrosis+by+human+CFTR%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Correction of lethal intestinal defect in a mouse model of cystic fibrosis by human CFTR.</a> Science. 266 (5191), 1705-1708 (1994).</li>
</ol>

无利益冲突，无可披露内容。

在本研究中，我们定义了一种新的指标，用于量化小鼠肺部的气体交换能力。该指标类似于弥散能力，后者是一种常见的临床检测指标，用于测量肺的主要功能，即气体交换能力。弥散能力是唯一一种可在小鼠和人类中均能快速、简便完成的肺功能检测方法。在小鼠肺部疾病检测中，一个主要目标是量化对照组与实验组之间肺功能的变化。为实现这一目标，我们定义并应用了DFCO，以证明其在大多数常见小鼠肺部疾病模型中量化表型变化的能力，包括肺发育过程中的功能变化。
简化小鼠DFCO测量方法所固有的一项假设是，忽略了解剖死腔和器械死腔中未混合吸入气体的影响。然而，如先前所述10，使用0.8 ml的充气容积会在所有测量中引入虽小但一致的误差。该误差的大小取决于充气容积与死腔容积的相对比例。在本方法中，通过消除三通阀或T型连接管中的死腔，并如视频所示，仅用指尖封闭注射器以促进气体转移，从而将此误差降至最低。该操作使各次测量之间具有高度的可重复性。幼龄小鼠所需较小充气容积的影响在图2所示的6周龄小鼠中表现得尤为明显，其中每只小鼠先立即进行0.4 ml的测试，随后紧接着进行0...

小鼠现已成为用于模拟多种肺部疾病的主要实验动物。为了研究这些病理背后的作用机制，需要采用能够量化病理变化的表型分析方法。尽管已有大量小鼠研究对通气力学进行了测量，但这些测量通常与临床上对人类肺功能的标准评估方法无关。这种情况令人遗憾，因为在小鼠和人类受试者中进行等效测量的能力，有助于将小鼠模型的研究结果更好地转化为对人类疾病的认知。
在人体受试者中，最常见且易于进行的测量之一是一氧化碳弥散量（DLCO）1,2，但在小鼠模型中，该测量却很少被实施。在已有报道的研究中3-7，尚未见后续研究跟进，部分原因在于这些实验操作通常较为繁琐，或需要复杂的设备。另一种方法是采用稳态系统中的一氧化碳重复呼吸法，其优势在于能够对清醒状态的小鼠进行一氧化碳扩散的测量。然而，该方法操作极为繁琐，且测量结果可能因小鼠通气水平以及O2和CO2浓度的变化而产生波动8,9。尽管一氧化碳弥散量检测具有多项优势，但上述困难似乎阻碍了其在小鼠肺部病理检测中的常规应用。
为避免小鼠弥散能力测量中的问题，近期已报道了一种在小鼠中进行该测量的简便方法10。该方法通过快速采集与整个吸入气体体积相等的样本，消除了采集未受污染的肺泡气体这一技术难题。该操作可获得高度可重复的测量值，称为一氧化碳弥散因子（DFCO），其对肺部表型的多种病理变化具有敏感性。DFCO 的计算公式为 1 – (CO9&#160;/&#160;COc)&#160;/&#160;(Ne9&#160;/&#160;Nec)，其中下标 c 和 9 分别指注入的校准气体以及在屏气 9 秒后采集的气体中的浓度。DFCO 是一个无量纲变量，取值范围为 0 到 1，1 表示所有一氧化碳被完全摄取，0 表示无一氧化碳摄取。
在本演示中，我们将展示如何进行弥散能力的测定，以及如何将其用于记录几乎所有现有小鼠肺部疾病模型中的变化，包括肺气肿、纤维化、急性肺损伤以及病毒和真菌感染。

<table><tbody><tr><td>气相色谱仪</td><td>Inficon</td><td>Micro GC Model 3000A</td><td>Agilent 提供类似型号</td></tr><tr><td>18 G 鲁尔短针头</td><td>Becton Dickenson</td><td></td><td>其他多个供应商也可提供</td></tr><tr><td>3 ml 塑料注射器</td><td>Becton Dickenson</td><td></td><td>其他多个供应商也可提供</td></tr><tr><td>聚丙烯气体采样袋</td><td>SKC</td><td>1 或 2 L 容量效果良好</td><td>其他气密性采样袋也可使用</td></tr><tr><td>气体钢瓶，含 0.3% Ne、0.3% CO，余量为空气（ME 规格）</td><td>Airgas, Inc</td><td>Z04 NI785ME3012</td><td>此为人类 DLCO 检测中使用的标准混合气体</td></tr><tr><td>稀释于磷酸盐缓冲液中的流感病毒 A/PR8，剂量为每只小鼠 25 TCID50</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>猪胰弹性蛋白酶</td><td>Elastin Products, Owensville, MO</td><td></td><td>5.4 U</td></tr><tr><td>博来霉素</td><td>APP Pharmaceuticals, Schaumburg, IL</td><td></td><td>0.25 U</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Escherichia coli&lt;/em&gt; LPS</td><td>Sigma L2880</td><td></td><td>每克体重 3 &amp;mu;g；O55:B5</td></tr><tr><td>&lt;i&gt;Aspergillus fumigatus &lt;/i&gt;（分离株 Af293）分生孢子取自马铃薯葡萄糖琼脂培养基上成熟的菌落</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠肺功能表型分析 在体 内 肺部弥散能力

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

目前，小鼠是用于模拟多种肺部疾病的主要动物模型。为了研究这些病理背后的机制，需要采用能够量化病理变化的表型方法。此外，为了使小鼠模型具有转化医学意义，这类测量方法应当是在人类和小鼠中均易于实施的检测手段。然而，目前文献中很少有肺功能的表型测量方法可直接应用于人类。其中一项例外是一氧化碳弥散量（diffusing capacity for carbon monoxide），这是临床上常规用于人类检测的指标。在本报告中，我们描述了一种在小鼠中快速、简便测量一氧化碳弥散量的方法。该操作包括对麻醉小鼠进行短暂的肺部充气，使用示踪气体，随后进行1分钟的气体分析。我们已测试该方法检测多种肺部病理的能力，包括肺气肿、肺纤维化、急性肺损伤、流感病毒和真菌性肺部感染，以及监测幼鼠肺部的发育成熟过程。结果显示，在所有上述肺部病理状态下，一氧化碳弥散量均显著降低，而在肺部发育成熟过程中则呈现升高趋势。因此，肺弥散量的测定提供了一种肺功能检测手段，具有广泛的应用价值，能够检测现有大多数肺部病理模型中的表型结构改变。

图1展示了A、B、C、D、E和F组成年小鼠的DFCO测量结果。在曲霉菌和流感感染模型中，DFCO均出现显著下降，纤维化、肺气肿及急性肺损伤模型中也观察到显著降低。图2显示了G组小鼠在2至6周龄期间随着肺部发育，DFCO随时间变化的发育趋势。在此期间，随着肺的发育，DFCO呈现轻微但显著的升高。在6周时间点，使用较小充气容积的影响也十分明显。雌性小鼠的DFCO倾向于略高，但这种差异仅在5周时间点具有统计学意义。
<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:40px;">组别</td>
			<td>病理或状况</td>
			<td>备注</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A</td>
			<td>C57BL/6 对照组（8–10 周），n = 6</td>
			<td>健康小鼠</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B</td>
			<td>经鼻内接种 25 TCID50 流感病毒 A 型（P...

我们介绍了一种快速、简便测量小鼠肺弥散能力的方法，并证明该方法对多种常见肺部疾病的表型变化具有足够的敏感性。由于弥散能力在人类中同样易于测量，因此该指标使小鼠模型具有直接的转化相关性。

小鼠现已成为用于模拟多种肺部疾病的主要动物模型。为研究这些病理背后的机制，表型分析方法……

以下实验的总体目标是学习如何使用经过校准的气相色谱仪来测量小鼠肺部的弥散能力。该方法通过向麻醉小鼠的肺部注入含有氖气和一氧化碳的气体，使气体在肺内停留九秒后回收。从肺部抽出的气体随后被稀释至两毫升，并注入气相色谱仪中进行分析。通过测量氖气和一氧化碳在肺部的不同摄取量来计算弥散能力。该指标可用于评估多种肺部疾病模型中肺功能的损失情况。与其他现有小鼠肺功能检测方法相比，该技术的主要优势在于操作简便、可重复性高，并且其测量结果可直接与人类的类似检测结果进行比较。该方法可用于追踪多种肺部病理状态下肺组织结构的变化。本方案首先设置仪器配备的气相色谱模块，以检测氮气、氧气、氖气和一氧化碳的峰信号。在本应用中，仅需使用氖气和一氧化碳的数据。该仪器使用分子筛色谱柱，并以氦气作为载气。这台特定的气相色谱仪配备0.8毫升色谱柱，每次分析使用2毫升样品，以确保在开始前充分清洗色谱柱。每次进行一系列测量时，均需使用2毫升直接来自气体采样袋的气体对仪器进行校准。首先出现的峰是氖气，然后是氧气和氮气，但本实验步骤中不检测这两种气体。最后出现的是一氧化碳峰，整个气相色谱的检测时间略短于一分钟。首先，使用氯胺酮和赛拉嗪对小鼠进行麻醉。通过脚趾夹捏后无反射性运动来确认麻醉效果。接下来，为保护眼睛，涂抹兽用眼膏，然后使用斯图登套管对小鼠进行气管切开。对成年小鼠使用18号套管针，对非常年幼的小鼠使用20号套管针。接着，启动节拍器，使其每秒钟发出一次可听见的滴答声。对于六周龄以上的小鼠，使用3毫升注射器从混合气体袋中抽取0.8毫升气体。如果小鼠年龄小于四周，使用 0.4 毫升气体，然后将注射器连接至气管插管并迅速充气使肺膨胀。开始在心中默数 1 到 10，与节拍器的滴答声同步。当数到 10 时，迅速抽出 0.8 毫升的气体体积。通过加入室内空气将呼出的气体稀释至2毫升，并称重至少15秒。尽可能快速地充气和排空肺部非常重要。快速充气较为容易，但要精确快速地抽出0.8毫升气体则需要稍加练习，然后将整个样品注入气相色谱仪中。进行分析时，在将样品从动物体内取出以及转移至气相色谱仪的过程中，必须注意避免样品污染。当气相色谱仪正在检测样品时，可通过用手指小心封住进样口来防止污染。用气袋中的混合气体再次向小鼠肺部注入 0.8 毫升气体，然后以与第一个样品相同的方式处理该样品。根据两次测量的平均值计算 DFCO。下标 C 指的是校准气体，下标 nine 指的是从动物采集的样本。在 nine 秒呼吸暂停之后。来自C57黑鼠的名义对照DFCO值约为0.77。在一项使用PR8流感模型的研究中，在弹性蛋白酶处理21天后的肺气肿模型中，第6天和第8天观察到功能进行性丧失。DFCO轻度降低，但在博来霉素诱导的肺纤维化模型中变化更为显著。博来霉素引起的纤维化通路在所有病理模型中导致了最大的一氧化碳弥散量（DFCO）变化。这一点非常重要，因为弥散能力也是人类肺纤维化的可靠指标。CFTR基因在囊性纤维化中起着关键作用，在一项针对缺乏该基因的小鼠研究中，DFCO显著降低。在这些基因敲除小鼠中，真菌感染进一步降低了弥散功能（DFCO）。一种常用的肺损伤模型由脂多糖（LPS）引起。在暴露于LPS的小鼠中，从第1天到第4天，肺功能呈进行性时间依赖性下降，通过DFCO测定进行评估；DFCO的测量可在低至两周龄的小鼠中成功实施。由于肺的体积较小，仅需0.4毫升的较小充气量即可。使用该较小体积测得的深呼气末肺容积（DFCO）能够显示肺成熟过程中预期的增加。一旦掌握该技术，每只小鼠仅需几分钟即可完成操作，然后再进行其他肺功能测量或评估。进行此操作时，务必快速完成充气和放气步骤，并在转移样品时小心操作，以防止污染。

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小鼠肺功能表型分析 在体 内 肺部弥散能力

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