Name: 固体脂质纳米粒（前哨淋巴结）细胞内定位的应用 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: 学习使用相转化温度法合成超小生物相容性固体脂质纳米粒，并通过动态光散射和差示扫描量热法表征其物理性质，结合荧光显微镜与流式细胞术研究纳米粒与细胞的相互作用。

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本研究工作得到了约翰斯·霍普金斯大学应用物理实验室研究与探索开发部、技术转让办公室以及Stuart S. Janney奖学金项目的资助，同时获得了美国国立卫生研究院国家心肺血液研究所资助项目（资助编号：R21HL127355）的支持。

1. SLNs 的制备
<ol>
	<li>SLNs的合成 
	注意：使用 PIT 方法 1,17,20 制备亚20 nm的固体脂质纳米粒（SLNs） 1.
	<ol>
		<li>使用无菌技术、生物试剂或细胞培养级试剂以及无菌材料（即移液管、刮刀、小瓶 等等。).</li>
		<li>使用生物安全柜进行SLN的合成（图2).</li>
		<li>将0.6 mg荧光染料（Nile Red，NiR，NiR浓度约为0.3 mg/ml）与0.10 g二十一烷（Heneicosane，脂质，脂质浓度为5 wt/wt%）加入一个15 ml小瓶中，共熔于 90 °C，搅拌。</li>
		<li>加入0.11 g聚氧乙烯（10）油醚（表面活性剂，表面活性剂浓度为5.5 wt/wt%）。将所得混合物共熔于 90 °C 并搅拌。</li>
		<li>加入1.79 g无菌水至混合物中，加热至 90 °C，搅拌至形成透明的纳米乳液。 
		注意：在持续搅拌和控制冷却的条件下，可形成固体脂质纳米粒（SLNs）。这些条件促使水包油乳剂发生相转变，形成油包水乳剂。亲脂性分子（如NiR）会分配至脂质液滴中。</li>
		<li>并行制备一种不含荧光染料的纳米乳液，作为对照样品。将0.10 g二十一烷和0.11 g聚氧乙烯（10）油醚加入到一个15 ml小瓶中，共同熔融 90 °C，搅拌。
		<ol>
			<li>加入1.79 g无菌水至混合物中，加热至 90 °C，搅拌至形成透明的纳米乳液。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>使用无菌滤器对每种纳米乳剂进行进一步灭菌 0.2 µm 过滤器</li>
	</ol>
	<img alt="Nanoemulsion diagram with heating, stirring setup for formulation process and phase inversion." src="/files/ftp_upload/53102/53102fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 2"> 
	图2. SLNs 合成示意图。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53102/53102fig2large.jpg" target="_blank">请点击此处以查看此图的放大版本。</a></li>
	<li>粒径与多分散性
	<ol>
		<li>采用动态光散射（DLS）法测定固体脂质纳米粒（SLNs）的粒径及多分散系数 1 使用玻璃比色皿和专用于测量粒径的仪器。</li>
		<li>在测量样品之前，按照生产商提供的标准品制备和测量方案，测定两种已知标准品的粒径。</li>
		<li>将1.5 ml标准溶液加入玻璃比色皿中，并在与样品相同的测量条件下测定标准溶液。 
		注意：对每个标准品均重复上一步骤。</li>
		<li>测量已制备的样品。每份样品使用以下实验参数：运行时间100秒，水的折射率（1.33），水的黏度 20 °C (1.002 mPa·sec) 
		注：该技术利用频率偏移的光来测量纳米颗粒的尺寸。</li>
		<li>报告颗粒的平均直径及粒径分布的多分散性。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>熔点与熔化潜热
	<ol>
		<li>使用配备自动进样器和液氮冷却源的差示扫描量热仪（DSC）研究固体脂质纳米粒（SLNs）的热行为 1.</li>
		<li>将已制备好的SLNs用移液器转移至 40 µl 使用质量约为25 mg的铝盘，并用通用压接机密封铝盘，以尽量减少DSC扫描过程中的水分流失。</li>
		<li>从5到，测量每种纳米乳剂 80 °C.</li>
		<li>从DSC曲线中报告熔点和熔融潜热，其中谷值代表熔点，DSC曲线下方曲线区域的积分除以材料质量即为熔融潜热。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. SLNs 与成纤维细胞和树突状细胞的相互作用
<ol>
	<li>原代人成纤维细胞的培养
	<ol>
		<li>按照说明书，将原代人成纤维细胞在人真皮成纤维细胞培养液（medium 106）中进行培养，并添加低血清生长补充剂（LSGS）试剂盒。将细胞维持在37 °C、5% CO2的湿润环境中，当细胞融合度达到80%时进行传代。</li>
		<li>对于MTT检测和成像分析，将细胞以每孔2 × 104个细胞的密度接种于96孔板中，并在暴露于SLN前于37 °C过夜平衡。</li>
		<li>在时间零点，根据脂质浓度将SLN按指定比例（图4）用完全培养基稀释，并向96孔板中每孔加入10 μl，每个样本设复孔。</li>
		<li>在孵育期间，将细胞维持在37 °C、5% CO2条件下。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>MTT毒性检测
	<ol>
		<li>与SLN共孵育24小时后，按照试剂盒说明书使用MTT法测定细胞活力。</li>
		<li>将细胞洗涤一次后，向每孔加入新鲜培养基（100 μl/孔）。通过在70%甲醇溶液中孵育10分钟处理杀细胞对照孔，随后更换为新鲜培养基。</li>
		<li>向微孔板每孔加入MTT试剂（每孔10 μl），并在37 °C过夜孵育。</li>
		<li>过夜孵育后，按照制造商说明书使用提供的去垢剂溶液（每孔100 μl）溶解细胞内甲臜结晶。</li>
		<li>室温孵育3小时后，使用酶标仪在570 nm波长下测定吸光度值。 
		注意：所用MTT试剂中3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐的浓度应低于1%（w/v）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>荧光显微镜观察
	<ol>
		<li>成纤维细胞给予SLN后，在特定时间点用无菌磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞两次，随后用冷的70%甲醇固定10分钟。</li>
		<li>10分钟后，将甲醇替换为PBS，并使用倒置显微镜配合带通（BP）690/50 nm滤光片组采集图像。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>小鼠骨髓来源树突状细胞的培养
	<ol>
		<li>按照先前描述的方法23,24诱导小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）。简言之，将C57BL/10小鼠骨髓单细胞悬液以每皿2 × 106个细胞的密度接种于100 mm培养皿中，加入重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF，300 U/ml）和重组小鼠IL-4（B细胞刺激因子，200 U/ml）。每3天更换一次培养基。</li>
		<li>第7天，向培养皿中加入负载NiR的SLN，终浓度分别为0.5和5.0 µg/ml脂质，并将细胞在37 °C、5% CO2培养箱中继续孵育所需时间。</li>
		<li>通过吸出培养皿中的全部培养基并收集至50 ml离心管中来收集细胞，随后用含4 mM乙二胺四乙酸（EDTA）的磷酸盐缓冲液（PBS）5 ml彻底冲洗培养皿（以去除松散贴壁的细胞），并将冲洗液一并收集至同一50 ml离心管中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>通过流式细胞术评估SLN的摄取
	<ol>
		<li>测定步骤2.4.3中获得的细胞悬液浓度，并将3 × 105个细胞分装至12 mm × 75 mm的圆底FACS管中。</li>
		<li>每管加入1 ml PBS洗涤细胞，然后在4 °C条件下以400 × g离心5分钟。</li>
		<li>弃去上清液，将沉淀用含抗CD11c-FITC单克隆抗体（终浓度0.25 μg/ml）的100 µl PBS/2 mM EDTA/0.1%牛血清白蛋白（BSA）（染色缓冲液）重悬，在冰上避光孵育30分钟。</li>
		<li>用1 ml PBS洗涤细胞，然后在4 °C条件下以400 × g离心5分钟。</li>
		<li>弃去上清液，每管沉淀用400 µl染色缓冲液重悬。此时细胞即可用于流式细胞仪检测（仪器最好配备蓝色和红色激光器）。</li>
		<li>使用流式细胞分析软件，通过圈选CD11c+细胞群（FITC阳性）并比较SLN相关荧光强度（在PerCP-Cy5.5或APC通道中检测）来评估树突状细胞对SLN的摄取水平。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本研究探讨了固体脂质纳米粒（SLNs）的合成及其在细胞内靶向应用中的适用性。这些生物相容性纳米颗粒作为递送载体，在药物递送、基因沉默和疫苗技术等多种应用中展现出良好前景25-30。采用一种简便的方法合成了超小SLNs，并研究了其与原代皮肤细胞及原代免疫细胞的相互作用。SLNs的设计包含荧光染料（NiR）的包封，用作模型治疗性货物。
采用相转化法（PIT法）制备固体脂质纳米粒（SLN），并通过动态光散射和差示扫描量热法评估所得纳米粒的粒径、多分散系数、熔点及熔融潜热等理化性质。粒径与多分散系数分析结果显示，所制备的SLN粒径极小且多分散性窄，适用于细胞内靶向应用。如先前报道所述，粒径可显著影响纳米粒与细胞的相互作用 12纳米颗粒的尺寸已被证明具有显著影响，可影响摄取效率、内化途径的选择、细胞内定位以及细胞毒性 12文献中记录的细胞-纳米颗粒相互作用的一些总体趋势包括：临界尺寸可能随细胞类型和纳米颗粒表面性质而变化，且小尺寸纳米颗粒通过被动摄取被内化的概率高于大尺寸纳米颗粒 12本研究中对颗粒的热分...

基于纳米颗粒的递送载体在细胞内靶向应用中展现出巨大前景，可提供一种特异性调控细胞信号转导和基因表达的机制。这些载体可负载旨在影响细胞反应并在靶组织中实现预期效果的药物、蛋白质和核酸。已有多种类型的纳米载体被探索用于治疗和诊断目的，包括脂质、聚合物、硅和磁性材料。由于这些系统具有实现局部给药、提高靶组织中药物浓度以及降低全身毒性的潜力，因而具有显著吸引力。
固体脂质纳米颗粒（SLNs）是一种被广泛研究的纳米颗粒递送系统的典型示例，近年来已成为一种具有前景的药物递送载体。SLNs 可方便地用于多种应用，包括生物传感1、化妆品2以及治疗性药物递送3-7。其优势在于完全由可吸收、无毒的脂质组成，因而具有更高的生物相容性。在合成过程中，可将亲脂性药物包载入 SLN 载体中，从而提高药物的溶解度及其适用于肠外给药的特性。SLN 载体还有助于稳定所包封的治疗剂，减少其降解和清除，最大化治疗效果。由于在体温下具有良好的稳定性，这类载体特别适用于长效、控释制剂3,4,8,9。重要的是，将药物包封于脂质纳米颗粒中可改变药物分子固有的药代动力学特征，这一特性为实现治疗指数较窄的药物的可控释放提供了潜在优势。SLN 所载治疗剂的释放速率可根据脂质的降解速率或药物在脂质基质中的扩散速率进行调节。
SLNs 通常被设计为在特定靶组织中蓄积。例如，其尺寸（通常大于 10 nm）有助于在循环系统中滞留，而肿瘤组织的血管通透性有利于颗粒沉积。此外，给药途径已被证明可改变颗粒的生物分布，从而有可能靶向特定的生理结构，如淋巴结10,11。当颗粒沉积于靶组织后，由于细胞膜能够选择性调控离子和分子进出细胞，实现适当的细胞相互作用及纳米颗粒的最终内化仍具挑战性12。为促进细胞摄取，可对纳米载体进行修饰，连接特定配体，包括多肽、小分子和单克隆抗体13,14。已有研究描述了多种纳米颗粒穿越细胞膜的机制，包括被动穿透和主动转运3,12,15。总体而言，研究表明，细胞与纳米颗粒的相互作用受到纳米颗粒理化性质的影响，包括尺寸、形状、表面电荷和表面化学性质，同时也受细胞特异性参数的影响，如细胞类型或细胞周期阶段12。
先前的一项研究表明，可合成用于局部给药的亚10 nm固体脂质纳米粒（SLNs） 16 和生物标志物检测应用 1 采用相转变温度（PIT）法 17这是一种温和的合成方法，其中 2 在逐渐改变温度的过程中，体系组成保持恒定。加热溶液在持续搅拌下冷却至室温，可形成纳米乳液。该过程可制备出粒径更小的固体脂质纳米粒（SLNs）。1 低于先前使用各种脂质纳米颗粒合成方法所报道的结果17-22小于20 nm的最终粒径尺度在细胞内靶向应用中具有优势，因其具有更大的比表面积以及增强细胞相互作用的潜力。
一种用于递送荧光染料或治疗药物的SLNs示意图如图所示 图1. SLN由脂质内核组成（例如，直链烷烃）可允许掺入疏水性化合物（例如，染料或治疗剂）和表面活性剂外层（例如，由水包围的线性非离子表面活性剂。在本研究中，将固体脂质纳米粒（SLNs）负载荧光染料，并用作模型以研究颗粒-细胞相互作用。将原代人皮肤成纤维细胞和小鼠树突状细胞随时间暴露于负载染料的SLN中，以表征其在毒性和颗粒摄取方面的相互作用。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基氯化四氮唑（MTT）实验确定合适的给药剂量。采用荧光显微镜和流式细胞术两种方法检测颗粒摄取情况 体外.
<img alt="脂质纳米颗粒示意图；脂质、表面活性剂、尼罗红染料水溶液、胶束形成。" src="/files/ftp_upload/53102/53102fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图1"> 
图1. 显示固体脂质纳米颗粒（SLN）主要成分的示意图。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53102/53102fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>

<table><tbody><tr><td>尼罗红（NiR）</td><td>Sigma</td><td>19123</td><td>生物试剂，适用于荧光检测，&amp;ge;98.0%</td></tr><tr><td>二十一烷</td><td>Aldrich</td><td>286052</td><td>98%</td></tr><tr><td>Brij O10</td><td>Sigma</td><td>P6136</td><td>Brij 97，C18-1E10，聚氧乙烯（10）油醚</td></tr><tr><td>水</td><td>Sigma</td><td>W3500</td><td>无菌过滤，生物试剂，适用于细胞培养</td></tr><tr><td>注射器滤器 0.2 &amp;micro;m Supor 膜，低蛋白结合</td><td>Life Sciences</td><td>PN4612</td><td>无热原</td></tr><tr><td>Nanotrac Ultra&amp;nbsp;</td><td>Microtrac</td><td>序列号 U1985IS</td><td>仪器</td></tr><tr><td>差示扫描量热仪</td><td>Mettler-Toledo</td><td></td><td>仪器</td></tr><tr><td>原代人成纤维细胞&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>C-004-5C</td><td>新生儿（HDFn）</td></tr><tr><td>Medium 106</td><td>Life Technologies</td><td>M-106-500</td><td>用于人皮肤成纤维细胞培养的无菌液体培养基。</td></tr><tr><td>低血清生长补充剂试剂盒（LSGS 试剂盒）</td><td>Life Technologies</td><td>S-003-K</td><td>完整 LSGS 的所有组分</td></tr><tr><td>MTT 细胞增殖检测试剂盒</td><td>Trevigen</td><td>4890-025-K</td><td>基于四唑盐 3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑溴化物（MTT）还原反应测定细胞增殖的高灵敏度试剂盒</td></tr><tr><td>Safire2 微孔板读数仪</td><td>Tecan</td><td>----</td><td>仪器</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5493</td><td>适用于分子生物学</td></tr><tr><td>重组小鼠 GM-CSF&amp;nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>315-03</td><td>&gt;97%，通过还原条件下的 SDS-PAGE 分析并经银染显色验证。</td></tr><tr><td>重组小鼠 IL-4&amp;nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>214-14</td><td>&gt;97%，通过还原条件下的 SDS-PAGE 分析并经银染显色验证。</td></tr></tbody></table>

用于细胞内靶向应用的固体脂质纳米颗粒（slns）

Solid Lipid Nanoparticles (SLNs) for Intracellular Targeting Applications

基于纳米颗粒的递送载体在细胞内靶向应用中展现出巨大潜力，可提供一种特异性调控细胞信号传导和基因表达的机制。在之前的一项研究中，已证明了超小型固体脂质纳米颗粒（SLN）在局部药物递送和生物标志物检测中的合成方法。固体脂质纳米颗粒（SLN）是已被广泛研究的一类纳米递送系统，已成为一种有前景的药物递送载体。在本研究中，SLN被负载荧光染料，并作为模型用于研究颗粒与细胞之间的相互作用。采用相变温度（PIT）法合成生物相容性超小型纳米颗粒。在开展纳米颗粒-细胞相互作用研究之前，使用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基氯化四氮唑（MTT）实验确定合适的给药剂量。此外，将人原代皮肤成纤维细胞和小鼠树突状细胞在不同时间点暴露于负载染料的SLN中，并利用荧光显微镜和流式细胞术对毒性及颗粒摄取等相互作用特性进行表征。本研究证明，作为一类纳米递送系统，超小型SLN适用于不同类型细胞的细胞内靶向。

采用 PIT 法合成 SLN，并利用水浴测定相转变温度。将样品缓慢加热并轻轻搅拌，直至溶液变得澄清。使用二十一烷脂质制备的 SLN，其相转变温度为 45 °C。表 1 总结了 SLN 的粒径、多分散性、熔点及熔融潜热。根据上述工艺条件制备的空白 SLN 和负载 NiR 的 SLN，其平均粒径分别为 18.59 和 16.87 nm，多分散性分别为 5.83 和 4.47（图 3）。通过在两种不同储存温度（4 和 23 °C）下连续 6 天监测粒径变化，评估 SLN 分散液的稳定性。结果显示，6 天内粒径未发生改变（数据未显示）。
采用差示扫描量热法研究了固体脂质纳米粒（SLNs）的热行为。合成的SLNs中，空白SLNs的熔点为38.0（± 0.4）°C，NiR载药SLNs的熔点为36.8（± 0.2）°C。相比之下，体相脂质的熔点为40.0 °C，表明SLNs相对于体相脂质其熔点有所降低。正如预期，由于受限于纳米尺度以及具有较高的比表面积，纳米粒子的熔点被抑制1。此外，空白SLNs和NiR载药...

本研究描述了一种合成超小生物相容性纳米颗粒群体的方法，以及若干 体外 用于评估其细胞相互作用的方法。

用于细胞内靶向应用的固体脂质纳米颗粒（SLNs）

基于纳米颗粒的递送载体在细胞内靶向应用中展现出巨大前景，提供了一种可特异性调控……的机制

本实验的总体目标是合成超小量的生物相容性纳米颗粒，表征其物理特性，并研究纳米颗粒与细胞的相互作用。首先采用相变温度法合成脂质纳米颗粒，在此过程中，脂质与表面活性剂最初共同熔融。加入特定量的水后，将混合物加热至发生相分离。然后持续搅拌混合物，直至形成纳米乳液，且固体脂质纳米颗粒（SLN）的合成完成。接下来，采用动态光散射（DLS）测定颗粒大小和多分散性。差示扫描量热法（DSC）是另一种用于测定熔点和熔融潜热的技术，以进一步表征颗粒。最终，荧光显微镜和流式细胞术可用于研究颗粒与细胞的相互作用。与现有的高能方法（如超声处理、微流控和高压均质）相比，该技术的主要优势在于其是一种相对温和的合成方法，既简单又具有可扩展性。合成LNS时，将0.6毫克荧光染料或其他疏水性化合物与0.10克直链烷烃或脂质混合。在15毫升小瓶中，将组分于90摄氏度下核心熔融并搅拌，加入0.11克线性非离子表面活性剂。然后将所得混合物在90摄氏度下熔融并搅拌。接着，向混合物中加入1.79克无菌水，加热至90摄氏度，并目视监测溶液直至观察到两相。 现在搅拌混合物，直至形成透明的纳米乳液。同时制备另一份不含荧光染料的纳米乳液作为对照样品。随后使用无菌的0.2微米滤器对每种纳米乳液进行进一步灭菌。采用动态光散射（DLS）技术，使用玻璃样品池在仪器中测量S lns的粒径和多分散性。在测量样品之前，应按照制造商提供的标准品制备和测量方案，测定两种已知标准品的粒径。随后，依次测量各制备好的样品。设定运行时间为100秒，采用水的折射率以及20摄氏度时水的黏度。报告平均粒径和粒径分布的多分散性，以研究SLNs的热行为。首先使用DSC分析：用移液器将SLNs转移至质量约为25毫克的40微升铝坩埚中。使用通用压接机将坩埚密封，以尽量减少DSC扫描过程中的水分损失。在测量每种纳米乳剂时，温度范围从5°C到80°C。根据DSC曲线报告熔点及熔融潜热，其中曲线的谷值代表熔点，曲线下面积的积分为熔融潜热。在DSC曲线图中，除以材料量表示熔融过程的相变热。按照制造商说明，在液体培养基中培养原代人成纤维细胞，用于人皮肤成纤维细胞的培养。添加低血清生长补充剂试剂盒，在37摄氏度、5%二氧化碳的湿润环境中培养细胞，并在细胞融合度达到80%时进行传代，用于后续MTT和成像分析的细胞接种。在96孔板中以每孔20,000个细胞的密度接种。将细胞在37°C下孵育过夜，使其达到平衡，然后在零时间点暴露于SLN。将SLM用完全培养基稀释至所需脂质浓度，每孔加入10 µL至96孔板的各个重复孔中。与SLN孵育24小时后，按照制造商说明书采用MTT法测定细胞活力。洗涤细胞一次，然后每孔加入100 µL新鲜培养基。通过在70%甲醇溶液中孵育10分钟以杀死对照孔，随后更换新鲜培养基。向微孔板的每个孔中加入MTT试剂，每孔10 µL，并在37°C下孵育过夜；过夜孵育后，每孔加入100 µL提供的裂解液，以溶解细胞内形成的甲臜结晶。根据试剂盒说明书，将细胞在裂解液中于室温孵育3小时，然后测定吸光度值。使用微孔板读数仪为显微镜检查做准备。用无菌磷酸盐缓冲生理盐水洗涤成纤维细胞两次。在成纤维细胞给予lns后的特定时间点，用冰冷的70%甲醇固定细胞10分钟。孵育10分钟后，在使用倒置显微镜采集图像之前，将甲醇替换为磷酸盐缓冲液（PBS）。所合成的S型固体脂质纳米粒（SLN）得到的对照S型LNS平均粒径为18.59，多分散系数为5.83；负载尼罗红的SLM平均粒径为16.87纳米，多分散系数为4.47，通过MTT法测定。通过检测细胞代谢的剂量反应效应发现，随着颗粒浓度增加，细胞活力下降。单独暴露于SLN与暴露于载有尼罗红的SLN之间，细胞毒性未观察到明显差异。同时，对细胞进行肉眼观察，以评估其在组织培养中的贴壁情况。聚苯乙烯培养皿中的细胞经成像，以展示具有代表性的细胞形态以及随时间推移对荧光颗粒的摄取情况，所用剂量为每毫升5微克。暴露后两小时即可观察到脂质颗粒的摄取。通过流式细胞术检测尼罗红荧光强度，测定纳米颗粒在小鼠骨髓来源树突状细胞（B MDCs）中的摄取水平。结果显示，所使用的SNS浓度与B MDCs中检测到的荧光强度呈直接正相关。观看本视频后，您应能充分了解如何合成超小规模的生物相容性纳米颗粒，表征其物理特性，并研究纳米颗粒与细胞的相互作用。

solid-lipid-nanoparticles-slns-for-intracellular-targeting

Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

固体脂质纳米粒（前哨淋巴结）细胞内定位的应用

在小鼠中每72小时重复进行眶后静脉注射阳离子脂质体/siRNA/ITSN-1s复合物，持续24天，可高效将siRNA双链递送至小鼠肺微血管系统，使ITSN-1s的mRNA和蛋白表达水平降低75%。该技术在动物模型中具有高度可重复性，无不良反应，且不会导致动物死亡。...

通过阳离子脂质体重复递送特异性siRNA实现小鼠肺组织中Intersectin-1s的长期沉默。利用电子显微镜评估基因敲低效果

关键词：Intersectin-1s，siRNA，阳离子脂质体，肺组织，基因沉默，电子显微镜，基因敲低

我们报道了一种利用碳纳米管对含有自组装纳米结构内核的脂质颗粒进行动力学稳定化的智能应用。制备此类脂质颗粒仅需较低浓度的碳纳米管，因而可将其应用于药物递送等生物医学领域。...

碳纳米管稳定的内源性自组装脂质颗粒的简便制备

本实验方案的目标是利用带有神经靶向肽的阳离子/阴离子脂质体作为中枢神经系统递送系统，使siRNA能够穿过血脑屏障。优化siRNA等治疗方法的递送系统，将为朊病毒病及其他神经退行性疾病提供更多治疗选择。...

使用阳离子和阴离子脂质体将治疗性siRNA递送至中枢神经系统

利用液晶纳米颗粒（LCNP）纳米载体作为载体，将疏水性货物可控地递送至活细胞的质膜。...

靶向液相晶体纳米颗粒载体包封疏水性货物的质膜递送

在此，我们介绍一种基于干膜法制备阳离子纳米脂质体的实验方案，该方法可用于安全高效地递送 体外...

用于高效递送的阳离子纳米脂质体的制备 体外 转录的信使RNA

本文描述了将法卡林二醇包载于脂质包被的74...

人骨髓间充质干细胞对含法尔卡林二醇的新型脂质包被纳米颗粒的摄取

介绍了制备和表征中性电荷、pH响应性siRNA纳米颗粒的理化性质及生物活性的方法。讨论了siRNA纳米药物成功的关键指标，如粒径、形貌、表面电荷、siRNA载药量和基因沉默效果。...

中性电荷、pH响应性聚合物纳米颗粒的制备及其用于细胞质siRNA递送

本研究描述了采用薄膜法进行经典水合以制备纳米脂质体，并随后对纳米颗粒进行表征。一种分子量为47...

用于包载生物活性亲水性球状蛋白质的纳米脂质体的制备与表征

本方案介绍了利用交错人字形微混合器微流控装置制备热敏脂质体的优化参数。该方法还可实现阿霉素和吲哚菁绿的共包封，并通过光热触发释放阿霉素，从而实现可控/触发式药物释放。...

含溶血磷脂的温度敏感脂质体的微流控制备

采用微流控混合平台方法开发用于mRNA和DNA包封的脂质纳米颗粒。...

利用微流控混合平台制备和表征用于基因递送的脂质纳米颗粒

本文演示了一种使用限域撞击射流（CIJ）混合器技术合成脂质纳米颗粒（LNPs）的详细方案，其中包括双射流CIJ和四射流多入口涡流混合器（µMIVM）。CIJ混合器可产生可重复的湍流微混合环境，从而制备出单一分散的LNPs。...

在受限撞击射流混合器中通过湍流合成脂质纳米颗粒

学习使用相转化温度法合成超小生物相容性固体脂质纳米粒，并通过动态光散射和差示扫描量热法表征其物理性质，结合荧光显微镜与流式细胞术研究纳米粒与细胞的相互作用。

用于细胞内靶向应用的固体脂质纳米颗粒（SLNs）

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