生物活性亲水球状蛋白的纳米脂质体制备与表征

在从库伦塔纯化的亲水蛋白中，将逐步进行用挤出技术制备脂质纳米胶囊，以捕获48千吨球状。纳米胶囊的所有表征程序包括扫描电子显微镜，还将遵循动态光散射。封盖程序可能面临一些挑战，从脂质选择到实现高效封装，保持夹住分子的生物活性。

将介绍的议定书可以克服其中一些困难。使用分析平衡称量脂体成分。使用适合旋转蒸发器的体积烧瓶将脂质成分溶解在氯仿中，以避免材料损失。

以 150 RPM 搅拌混合物 15 分钟。使用旋转蒸发器去除氯仿。将容积烧瓶口调节到标准位置，以获得最佳效率，同时与加热浴中的水接触。

根据描述的协议设置参数。大约 25 分钟后，取出烧瓶，并适当丢弃蒸发的溶剂。形成薄而不透明的薄膜，易于可视化。

在含有塔林的硫酸铵溶液中，以每毫升一毫克的速度使脂质膜水合。搅拌混合物40分钟，在4摄氏度下孵育过夜。然后，在25摄氏度的室温下对悬浮液进行一分钟的声波化。

为了减小囊泡尺寸并避免聚集，请将聚碳酸酯膜放在两个预湿过滤器支架之间，并放入支架中。将一个空注射器插入设备，用一毫升脂质悬浮液填充另一个注射器，并将其插入另一侧。通过 2 微米聚碳酸酯孔膜进行 12 循环挤出。

缓慢地将样品从一个注射器推送到另一个注射器。最后，由于尺寸缩小，脂质悬浮体在游览过程中应变得清晰。在此步骤中，大约 2 毫升的样品可能会丢失。

通过超离心分离脂质体。首先，将样品称入钛管中，平衡管。检查要填充的最小体积，如有必要，使用硫酸铵调整体积。

将钛管放入回转铲斗中。打开离心机门，将转子放在内部。关闭离心机门，按下真空，等待真空从 200 到小于 20 微米。

调整超离心显示屏中的参数。按召回，检查条件，然后开始运行。90 分钟后，通过单击真空按钮释放真空并打开离心机门。

从内部拆下转子。保持冰上的超离心样品，然后通过将管倒置，将上流液从颗粒中分离，变成一次性的 59 mil 离心机，以将上流液与颗粒分离。将含有未增盖蛋白质的上清液储存在四摄氏度。

这将用于确定封装效率。颗粒呈现为半透明果冻。悬浮颗粒和热 HEPES 缓冲盐水溶液。

有关详细信息，请查看协议。通过彼得森的规程确定封装效率，以避免脂质干扰蛋白质定量。样品应用三次分析。

在微福管中，用水稀释唇膏上足总或BSA，以每毫升1毫克的速度稀释，最终体积为1毫升。加入DOC并孵育10分钟。加入1毫升72%TCA，混合好。

在室温下以3000克离心15分钟。小心地丢弃上流水干，避免管子向下，放在吸水纸上，让它干燥。将颗粒悬浮在一毫升水中。

彻底混合，确保颗粒溶解。然后，将样品转移到试管。加入一毫升试剂 A，在室温下混合并孵育 10 分钟。

加入5毫升的试剂B，在室温下混合并孵育30分钟，防止光线。确定 750 纳米的吸光度并计算封装效率。大小平均值和大小分布由动态光散射决定。

将脂质纳米囊转移到一次性尺寸的库子中。将库放在设备内。设置设备参数。

为了确定稳定性，请将脂质体储存在四摄氏度，并定期检查尺寸分布和尺寸平均值。通过扫描电子显微镜进行脂体表征，根据Murta和Ramasamy的三钙进行。用胶带将玻璃盖滑到培养皿底部。

用聚-L-莱辛涂覆滑。将湿滤纸放在培养皿内，以保持水分和孵育一小时。用蒸馏水冲洗。

加入一滴样品，让样品在室温下干燥一小时。要修复样品，请用磷酸盐缓冲液中准备的谷胱甘肽覆盖它们。将湿滤纸放在培养皿内。

密封培养皿很重要。在4摄氏度下孵育48小时。用相同的磷酸盐缓冲液冲洗盖滑三次，每次五分钟。

通过将乙醇浓度从35%到绝对乙醇的不断增加的溶液中洗涤，使样品脱水如下。用六甲基二苯醚化学干燥样品10分钟。六甲基二甲基二甲酸酯应小心地在烟罩内操作。

样品应允许在干燥器内或室温下在烟罩内干燥过夜。使用碳导电胶带将干燥样品安装在根管上。用金子溅出存根。

使用扫描电子显微镜 SEM 记录 SEM 图像，在低真空模式和低电压下记录 SEM 图像，20 千伏。图一描述了纳米脂体制剂。磷脂、掺杂剂、钉和化学，主要的脂质成分，首先溶解在氯仿中，以获得脂质膜。

脂质膜随后在盐水缓冲液中补液，含有亲水蛋白，塔林，被诱捕，孵育应在夜间预制。然后，将声波和挤出用于生成小单酰气囊。超离心步骤将脂质制剂与自由脂质和未吸光蛋白分离。

而上一液用于确定诱捕效率。使用上述方法生产的纳米光子体尺寸分布范围从 51 纳米到 396 纳米，平均尺寸为 155 纳米。制备是均匀的，因为政治分散指数为168。

如果通过2微米孔径膜挤出脂质体，可达到83%的高夹住效率。通过扫描电子显微镜对形态学纳米体特征进行了评价。脂质体最终应像活细胞一样进行治疗，以获得更高质量的图像。

固定和干燥程序对于确保在真空条件下支持超过 20 千伏的小型完整囊泡的可视化非常重要。图 2A 和 2B 显示 121 纳米范围内的圆形脂质体囊体，分析为 20 千伏。图 2C 和 2D 显示准备不足的样本。

处理不当的样品只能观察较大和损坏的囊泡，无法抵抗真空和/或电压条件。协议描述，在这里，允许生产可重复的囊泡显示圆形，小表面，平均大小约150纳米。该方法可用于诱捕复杂和大分子，作为四元蛋白，表现出亲水校正器。

自诱不足率高于80%，泄漏率很低，低于1.5%，当纳米胶囊储存在4摄氏度时。我们希望这个视频将帮助你在大分子的封装，如泰瑞。