用于访问视网膜下腔的另类和验证注射法通过一经巩膜后路

本研究的总体目标是描述一种新型视网膜下注射技术，该技术可用于靶向病毒载体、药物或诱导多能干细胞进入小鼠的视网膜下间隙。这种方法可以回答视觉科学和眼科领域的关键问题，例如评估新型治疗干预对视网膜变性的疗效。该技术的主要优点是可用于将材料输送到视网膜下空间，效率高、损伤小，视网膜结构和功能恢复快。

演示该程序的是我实验室的技术人员 Sachin P。要开始此过程，请修剪麻醉小鼠的胡须以促进可视化，并用循环水垫将动物的体温保持在 37 摄氏度。接下来，用 2.5% 去氧肾上腺素滴眼液扩张其瞳孔。

然后，使用甲基纤维素滴眼液以防止干燥，并尽量减少麻醉引起的短暂性白内障。手术前对器械进行消毒。然后，在生物安全柜中制备稀释的荧光素。

用适量的荧光素填充注射器。接下来，进行脚趾捏捏以确保动物被深度麻醉，并放置鼠标，使要注射的眼睛朝上，在解剖显微镜下清晰可见。用一对细尖镊子轻轻捏住颞结膜。

然后，使用弯曲的 Vannas 剪刀做一个大约 90 度的圆周切口。在下面的 Tenon 胶囊上重复该过程。之后，用细尖镊子切开周围的结缔问题，同时向鼻部旋转眼球。

在距离视神经约 0.5 毫米的地方向注射部位工作，并非常小心地避免破坏眶后窦。一个关键步骤是暴露注射部位，这需要眼睛旋转，而不会损坏眼睛本身或相关结构，特别是避免损坏眼眶血囊。在此过程中，用 22.5 度的眼科刀片轻轻刮擦眼罩，在注射部位的牙膜上做一个小切口。

这个切口应该足够大，以便针尖穿过粘膜。接下来，将斜面 33 号针头插入硬化切开术，斜面朝向并与视网膜平行。通过均匀的压力缓慢按压柱塞，注入所需量的 0.01% 荧光素。

请注意，当针头位于视网膜下间隙时，按下柱塞时会感到轻微的阻力。如果针头刺穿视网膜，则不会有阻力，但如果针头没有穿透巩膜或 RPE，则阻力很高。另一个关键步骤是针对视网膜下间隙的注射。

这必须在不穿透神经感觉视网膜到玻璃体腔的情况下完成。等待几秒钟后再取出针头，以尽量减少回流。随后，用无菌盐水冲洗眼睛，并确保眼睛已旋转回正常位置。

然后，在注射眼睛的角膜表面涂上一层厚厚的三联抗生素眼霜。之后，将鼠标放在干净的单独笼子中进行恢复。在麻醉恢复期间监测其呼吸和温度，并检查其是否能维持胸骨斜躺。

进行额外的适当术后监测和治疗，包括皮下注射卡洛芬，以进行术后疼痛管理。这是注射部位圆顶形气泡的 3D 重建。然后用密集的白色填充圆顶状水泡，以显示视网膜脱离的范围和边缘。

OCT 的视网膜横截面可以用白色看到，而 RPE 和光感受器水平的充满液体的空间是黑色的。在此图中，显示了注射前、注射后 10 分钟和注射后 4 周在最大视网膜脱离部位的代表性 OCTB 扫描。该图显示了 0.3 μL 注射液中扁平水泡的形成和分辨率。

这张图片显示了 0.5 μL 注射液中圆顶水泡的形成和分辨率，而这张图片显示了 1 μL 注射液中圆顶泡泡的形成和分辨率。最后，这是注射部位严重脉络膜疤痕和视网膜变薄的例子。Bleb 分辨后视网膜仍可保持正常功能。

在 9 种照明强度下，显示了 0.3 μL、0.5 μL 和 1 μL 注射的注射前和注射后 4 周的暗视杆介导反应的波形。一旦掌握，这项技术可以在每只眼睛 10 到 15 分钟内完成。在尝试此程序时，在开始之前评估眼睛的健康状况很重要。

排除角膜或晶状体混浊的眼睛，或深陷的眼睛，这些手术将非常困难。在此程序之后，可以执行其他方法，例如 OCT 和眼底成像，以评估注射质量。