小鼠下颌骨髁突的形态学及细胞分析方法

本实验的总体目标是使用 X 光片和组织学分析中的形态测量来观察小鼠下颌髁软骨压缩负荷的影响。这些指标可以帮助回答有关啮齿动物下颌骨髁内结构和细胞变化的关键问题。此处显示的技术的主要优点是它们可用于分析其他小型出生或参与的动物。

对于此协议，已分离、解剖的小鼠下颌骨可供使用。在培养皿上，将下颌骨转移到 X 射线柜系统中。然后，以 26 KB 电压拍摄 X 光片 5 秒钟。

现在，在分析软件中打开图像以进行形态测量。首先，使用单位按钮设置比例尺。接下来，使用标记样式 2 选择六个解剖点。

首先，选择下颌骨髁的最后点作为第一点。接下来，选择第二点的切割过程。然后，选择 sigmoid 缺口处最深的点作为点 3。

接下来，选择下颌支凹陷处最深的点，点 4，然后选择髁关节面的最前点，点 5。现在，选择髁关节面的最后点作为点 6，然后使用长度工具继续进行长度测量。接下来，使用垂直线工具从第 3 点到第 4 点测量髁头长度，即从第 1 点到第 3 点和第 4 点之间的线的垂线长度。

然后，测量第 1 点和第 2 点之间的下颌长度。最后，测量髁头宽度，位于第 5 点和第 6 点之间。要保存数据，请复制屏幕右侧的测量列表。

在包埋固定但未脱钙的下颌骨之前，将它们浸泡在 PBS 中的 30% 蔗糖中过夜。第二天，解剖掉多余的软组织并小心切开下颌骨髁。现在，将样品放入塑料模具中，髁的内表面靠在模具底部，样品平行于模具底部。

然后，将它们浸入包埋树脂中，并用一块干冰冷却树脂。接下来，在模具上涂上更多的包埋树脂。将它们转移到冷的 2 甲基丁烷中，通过冰箱或干冰冷却。

冷却后，将标本储存在零下 20 摄氏度或零下 80 摄氏度进行切片。为了量化髁矢状切片 MCC 中 Col10a1 的表达，请在图像分析软件包中打开组织学图像，并使用套索工具选择感兴趣的区域。在这种情况下，将选择 MCC 区域。

记下区域中的像素数，该像素数在直方图框中报告。接下来，通过调整颜色范围选择 Col10a1 红色像素。使用吸管工具从图像中选择一个红色像素，然后单击 OK.然后，记录区域中的红色像素数，如直方图框中报告的那样。

区域中红色像素的分数表示 Col10a1 的表达量。现在，使用相同的基本技术，量化 MCC 和软骨下骨中的 TRAP 活动。首先，选择软骨下骨区域的软骨作为要分析的区域并记下总像素。

然后，选择 ELF97 基板生成的黄色像素。记下正像素的数量并计算 TRAP 正像素的分数。现在，量化通过 DEPI 以蓝色复染的 EDU 阳性细胞。

再次选择感兴趣的区域，然后量化其中的蓝色像素。还可以使用此方法确定同一区域中 EDU 正像素的数量。对小鼠进行压缩 TMJ 负荷的形态测量表明，负荷显着增加了下颌骨和髁突头的长度。

然而，负荷不会导致髁宽的显着变化。胶原蛋白分布的定量显示，上负荷动物的 Col10a1 表达和 MCC 显着增加。另一方面，Col2a1 表达与对照没有太大差异。

髁突和负载小鼠软骨下区域的 TRAP 活性增加，亚增殖也增加。EDU 染色表示增殖细胞的数量。通过评估甲苯胺蓝染色区域和距离图来量化 MCC 中的蛋白多糖分布。

加载组髁突 MCC 中的距离映射显着增加。然而，组间蛋白多糖染色面积无统计学差异。看完这个视频，你应该对如何分析啮齿动物下颌髁的细胞和结构变化有了很好的了解。