频繁采集小鼠尾尖血样以评估脉动性黄体生成素分泌

频繁采集尾尖血样的总体目标是从清醒、未麻醉且行为正常的小鼠中获取全血样本，用于检测脉冲式促黄体生成素（LH）的分泌情况。该方法可通过提供一种可靠的方案来评估小鼠促黄体生成素的脉冲分泌，从而帮助回答生殖神经内分泌学领域中的关键科学问题。该技术的主要优势在于，通过频繁操作和适应性训练，可确保在急性或慢性实验处理后获得稳定且可靠的促黄体生成素脉冲测量结果。

在采血前五周，从周一到周五每天对小鼠进行抓取操作。在最后两周，周六和周日也需对小鼠进行抓取操作。小鼠抓取操作应在生物安全柜中进行。

将第一只小鼠从笼中取出，放置于生物安全柜内合适的表面上。用一只手轻轻抓住小鼠尾根部以固定小鼠，另一只手则用力从尾根向尾尖方向摩擦小鼠尾部的腹面。

总共进行六次，然后将小鼠放回笼中。此为一组操作。等待六分钟后，再进行另一组操作。

按照此模式，在每组之间设置间隔时间，每次操作训练进行四组操作。总计每次训练 session 可提供 24 次尾部抓握操作。如果在采样期间的实验处理中包含其他额外的操作方法（例如抓颈背部皮肤或腹腔注射），则也应在操作训练期间使小鼠适应此类操作活动。

在计划采血日前两周，将小鼠以两只为一组共同饲养，以尽量减少采血期间对小鼠的干扰。采血前准备0.6毫升微量离心管用于血液储存。标记离心管，并为每次采集3微升血液的样本，预先在每管中分装57微升ACES缓冲液。

制备完成后，将试管置于 4°C 保存。在生物安全柜内准备好以下物品：移液器吸头、废液桶、计时器、实验记录本、装有采血管的冰桶、锋利的无菌剪刀、永久性记号笔和小块纱布。开始采血前 45 分钟，将第一只小鼠从笼中取出，并放置于合适的表面上。

然后标记尾巴，以便快速将该小鼠与其笼中同伴区分开来。现在使用剪刀剪去尾尖一到两毫米。剪尾后，小心地轻轻按摩尾巴，直到尾端形成一滴血珠。

然后采集三微升血液，并将血液和吸头弃入废液桶中。接下来确保血液流动已经停止。如有需要，用无菌纱布轻轻按压。

然后将小鼠放回笼中，静置6分钟。在接下来的45分钟内，每隔6分钟用力轻擦尾部，以采集额外的血液样本。若未形成血滴，可用浸有生理盐水的纱布轻轻擦拭尾部，以帮助清除血凝块。

在采样前阶段，弃去所有血样。45分钟后开始采样阶段。取样时，将3 µL血液转移至收集管中，通过倒置混匀试管，然后放回冰上。

随后根据需要持续进行采样。采样结束后，可选择对小鼠实施安乐死，或确保其尾部血液完全停止流出，然后为小鼠提供一个洁净的笼子。接着将血液样本转移至储存盒中，并在负二十摄氏度（-20 °C）条件下保存，直至进行后续分析。

通过频繁采集血液样本测定促黄体生成素（LH）水平，以评估对急性心理社会应激挑战的反应。实验选用成年雌性C57黑六小鼠，对其进行卵巢切除术后，在90分钟内采集血液样本，以建立LH脉冲式分泌的治疗前基线。在90分钟采样期间，实验组动物被置于啮齿类动物束缚装置中，并转移至新笼子，而对照组则留在其原居笼中，不施加束缚处理。

分析结果显示，对照组动物在整个采样期间均表现出清晰且明确的LH脉冲。相比之下，实验组小鼠因受到束缚所致的心理社会应激，其LH脉冲性分泌迅速且明确地受到抑制。在准备使用该技术时，重要的是要记住尽量减少环境干扰，例如噪音或其他研究人员的干扰，这些因素可能引起小鼠应激，从而干扰LH的脉冲性分泌。

自陈实验室的Stein博士及其他研究人员开发该技术以来，这一方法开始为神经内分泌学领域的研究者铺平道路，使其能够在分子和遗传工具复杂且实用的物种中探索黄体生成素（LH）脉冲的调控机制。