新生儿小鼠益生菌的研究

益生菌研究，在新生儿小鼠使用加夫奇。简介，这个视频协议将详细说明在新生儿鼠的出生日，将益生菌的设置和程序。肠道的无菌集合，用于肠道微生物群分析，也详见本协议。

一些具有代表性的结果，也包含在此协议中，以介绍一些类型的数据，可以从遵循此过程派生。新生儿小鼠食管内咽，生命日二。将大坝的笼放在同一个罩子中，实验笼放在加热垫上，加热垫设置为中等水平，大约为38摄氏度。

从家庭笼子里取出一些土壤嵌套，用戴手套的手擦巢，将筑巢材料的气味转移到手套上。这减少了异味的转移，处理时对小狗。这反过来又降低了由于异味而被大坝遗弃或吃人的风险。

当幼崽被送回家庭笼子，经过程序。创建一个圆锥形的抱巢，并放在新的无菌实验笼中，该笼已经预热。将所有的幼崽从家里的笼子里转移到实验笼子里。

将幼崽移入锥形筑巢，放入实验笼中。拆下大坝的笼子，并放置它，远离加瓦区。这减少了大坝的压力条件，通过阻止大坝听到小狗，做程序。

打开注射器包装，便于访问。以无菌方式拆下自动夹紧的注射针，并将其连接到注射器的头部。针头用70%乙醇和水清洗，然后进行高压灭。

不同的喂养针组，用于处理和控制组之间，避免交叉污染。将益生菌染料溶液放入注射器中，用手指反转并轻拂以去除气泡，并在注射器内的体积中空位。将柱塞拉回去清除液体，从针头的死空间，然后压抑柱塞，排出空气和气泡，这一点很重要，要保证，没有气泡被磨光，进入动物。

调整注射器中所需的体积，一天两只鼠标，不超过30微升应加糖。在针头上看到的黑色标记表示最大长度，表明针头可以插入鼠标。此长度是通过外部测量、鼻子和 xiphoid 过程之间的长度获得的。

将注射器放在无菌表面上，将幼崽从实验笼中取出，并观察是否有健康迹象。这些健康迹象包括，定期呼吸和皮肤的粉红色。将幼崽放在无菌观察表上，放在加热垫上。

使用用于溶解益生菌的溶剂润滑进料针的外部表面。这里是葡萄糖水，这设施顺利进入针，进入动物的食道。用拇指和食指把小狗的皮弄乱。

抓住注射器在你的主导手，在一个位置，让你插入针，并按下柱塞，而无需调整你的手指。以 45 度角插入喂食针的灯泡，直到到达嘴的背面。用针头将手从你手中旋转，同时将针头的灯泡握到位，一旦针头与躯干平一样，它就会开始滑动。

确保注射器没有施加额外的压力，以刺激运动。吞咽的过程会很慢，耐心是关键。随着小狗年龄的增长，吞咽针头，会变得越来越快和容易。

喂料针已预先标记，以防止灯泡进入胃部。一旦标记接近鼻子，阻止针头的运动，并慢慢提供益生菌溶液。分娩完成后，慢慢取出针头。

将鼠标放在加热垫上，观察恢复情况。喘息反射解决和心率上升，健康的粉红色再次出现，45秒后未解决的喘息反射，表示一个失败的gavage和鼠标必须安乐死。格瓦格染料应该通过苍白的皮肤可见，染料应该只在通常发现乳点的区域可见。

将染料限制在胃部，表示一个成功的盖夫。如果染料在胸腔或胃以外的任何其他腔中发现，则必须对小鼠进行安乐死，因为它表示牙垫失败。需要最小的压力，要擦伤一天的生命两只老鼠。

擦伤到硬的迹象可能包括，不能呼吸，明显的喘气，并坚持舌头长期。几个建议，你的擦伤的手手指的背面，手掌上拿着注射器，这确保了幼崽的位置是稳定的，在手术和针头，不移动周围的动物。在咽中，针头的重量，将促进滑动，让针被幼崽吞咽，而不施加任何外部压力。

把幼崽回到大坝的笼子里，按照你的日程安排进行监测。收集用于殖民化分析的肠道样本。动物被人道地安乐死，方法通过动物护理和使用议定书批准。

手术台上衬着无菌吸水垫。这些工具已经使用70%乙醇和250摄氏度的热节拍灭菌进行灭菌。动物的对外服务，用70%乙醇消毒。

用钳子和剪刀将外皮切成四个象限，同时格外小心，不要撕裂胸膜。把皮肤塞到一边，使内酮暴露得很好。使用不同的、新的无菌工具，切开胸膜，并格外小心，不要撕裂，在这个过程中，内脏器官。

找到幼崽的胃，并夹在十二指肠。使用两个无菌钳子，定位胃，并定位胃的十二指肠端。夹在十字路口，胃和十二指肠。

使用两个新的无菌钳子运行肠道，使用一个钳子抓住十二指肠，而使用另一个撕开任何结缔组织，保持肠道完好无损。当你解开，把肠子，在无菌的吸水垫覆盖动物。如果你碰巧撕裂肠子，在解开过程中，标记它撕裂的区域，使肠道的方向是完好无损的。

夹紧直肠端，并在两个夹子上切割。将完整的肠子放在正确方向的无菌标记铝箔上。标记肠道的任何部分，这是后续分析所必需的。

使用优化的提取程序从这些肠道中提取DNA，并进行QPCR分析以量化益生菌。DNA从新鲜肠道中提取，或者使用冷冻盒在80摄氏度的负80摄氏度内储存肠道。代表性的结果， 乳酸杆菌植物， 殖民化与加夫奇每天和每隔一天。

在老鼠的肠道中观察到更高的LP信号，每隔一天被磨光一次，而老鼠每天被感染。因此，是随后的实验被建立，每隔一天使用加瓦奇。乳酸杆菌植物性甘树鼠，与无瓦鼠共同居住。

在未经治疗的小鼠中观察到LP的可变信号，这些小鼠与LP gavaed小鼠同居。LP的殖民化传播，有可能与垃圾伴侣，因此治疗条件，被笼子分开，我们随后的实验。结论，该程序可用于向新生小鼠提供精确量的液体。

肠道的采样可以外推，通过其他分析方法探索微生物群的变化。该视频的范围是提供一个平台，让研究人员使用新生儿小鼠模型，了解观察到的效果背后的机制，以及益生菌的早期给药。特别感谢科尔曼实验室小组，动物护理服务，英属哥伦比亚大学，使这项研究成为可能。