通过电凝建立的阻塞性慢性胰腺炎模型

本协议描述了一种模拟慢性阻塞性胰腺炎的新方法，该方法涉及胰管的可视化和胰管的电凝以引起胰管阻塞。

建立慢性胰腺炎动物模型的方法有很多种，包括腹腔注射钠和结扎胰管，这些方法都有其局限性。我们团队最近开发了一种新的小鼠慢性胰腺炎电凝模型，该模型的优点是不需要长时间注射药物或难以掌握的方法。而且他们很容易建立慢性胰腺炎模型。

利用电凝术诱导小鼠慢性胰腺炎提供了一种更方便的实验模型，为该领域的未来研究提供了一条有前途的途径。首先，将麻醉的小鼠放在加热垫上以保持体温。使用修剪器剃掉胸部和下腹部之间的毛发。

接下来，用剪刀在中央腹部做一个两厘米长的切口，然后在上腹部和剑突之间做一个一厘米长的切口。使用扩腹器定位胰腺区域进行电凝。使用无菌棉签，从左上腹部后部识别十二指肠，然后转动它以观察连接肝脏的胆管。

使用微血管夹暂时闭塞近端胆总管，以防止逆行输注到肝脏中。将 0.25 x 0.35 毫米的聚乙烯管连接到 0.25 毫米的针头上，刺穿壶腹周围区域，瞄准十二指肠头。将管子插入并将其穿过胆管的一半，然后停止进入。

启动输液泵，注入0.2%亚甲蓝溶液，直到胰管变蓝。输注后，将聚乙烯管拉出并取下微血管夹。用无菌棉签固定胰腺，将电凝刀对准蓝色区域。

设置好电凝的作参数后，以纯铜为电极材料，在避开血管的同时对胰腺进行治疗两到三秒。继续电凝，直到亚甲蓝染色区域变色为黄色或棕色。当胰腺中不再可见蓝色染色溶液时，停止电凝。

手术后，将鼠标放入衬有床上用品的聚乙烯盒中。胰管电凝后，麻醉小鼠并将其放在作平台上。要通过眼眶丛收集血液，请轻轻握住背部皮肤，使眼球轻微突出。

然后，将毛细管的末端放在眼角，以 30 至 45 度角轻轻插入眼球下方。旋转毛细血管，直到血液开始流动。采血后，用纱布轻轻按压闭上眼睑。

将血液以 1， 200g 离心 15 分钟，并将上清液收集在新管中。按照制造商的建议，使用市售试剂盒测量淀粉酶、胆红素和透明质酸。接下来，将安乐死的小鼠放在设定在四摄氏度的手术台上。

使用剪刀和镊子在腹壁上做一个 V 形切口，露出腹腔。取出胰腺，分成三部分染色。将胰腺固定在4%多甲醛溶液中，然后将固定的胰腺包埋在石蜡中进行切片。

将石蜡块切成0.5毫米厚的切片，并用苏木精和伊红以及马森染色剂进行染色，以进行免疫组织化学分析。在光学显微镜下观察染色的胰腺组织。苏木精-伊红染色显示电凝组胰腺腺泡细胞散在，有慢性胰腺炎的证据。

在第 28 天，观察到胰腺腺泡细胞组织恢复和病理逆转的迹象。Masson染色显示，与假手术组相比，电凝组的纤维化明显更多。免疫组化染色显示电凝组α1型、1型胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白水平升高，慢性胰腺炎程度较高。

电凝组的透明质酸水平升高，在第 21 天左右达到峰值，而假手术组则保持稳定。电凝组的胆红素水平在第 14 天显着升高，在第 21 天左右达到峰值，而假手术组没有变化。电凝组的淀粉酶水平在第 14 天飙升，随后在第 28 天下降，假组几乎没有变化。