通过电凝建立的阻塞性慢性胰腺炎模型
2025年10月31日
本协议描述了一种模拟慢性阻塞性胰腺炎的新方法，该方法涉及胰管的可视化和胰管的电凝以引起胰管阻塞。
建立慢性胰腺炎动物模型的方法有很多种，包括腹腔注射钠和结扎胰管，这些方法都有其局限性。我们团队最近开发了一种新的小鼠慢性胰腺炎电凝模型，该模型的优点是不需要长时间注射药物或难以掌握的方法。而且他们很容易建立慢性胰腺炎模型。
利用电凝术诱导小鼠慢性胰腺炎提供了一种更方便的实验模型，为该领域的未来研究提供了一条有前途的途径。首先，将麻醉的小鼠放在加热垫上以保持体温。使用修剪器剃掉胸部和下腹部之间的毛发。
接下来，用剪刀在中央腹部做一个两厘米长的切口，然后在上腹部和剑突之间做一个一厘米长的切口。使用扩腹器定位胰腺区域进行电凝。使用无菌棉签，从左上腹部后部识别十二指肠，然后转动它以观察连接肝脏的胆管。
使用微血管夹暂时闭塞近端胆总管，以防止逆行输注到肝脏中。将 0.25 x 0.35 毫米的聚乙烯管连接到 0.25 毫米的针头上，刺穿壶腹周围区域，瞄准十二指肠头。将管子插入并将其穿过胆管的一半，然后停止进入。
启动输液泵，注入0.2%亚甲蓝溶液，直到胰管变蓝。输注后，将聚乙烯管拉出并取下微血管夹。用无菌棉签固定胰腺，将电凝刀对准蓝色区域。
设置好电凝的作参数后，以纯铜为电极材料，在避开血管的同时对胰腺进行治疗两到三秒。继续电凝，直到亚甲蓝染色区域变色为黄色或棕色。当胰腺中不再可见蓝色染色溶液时，停止电凝。
手术后，将鼠标放入衬有床上用品的聚乙烯盒中。胰管电凝后，麻醉小鼠并将其放在作平台上。要通过眼眶丛收集血液，请轻轻握住背部皮肤，使眼球轻微突出。
然后，将毛细管的末端放在眼角，以 30 至 45 度角轻轻插入眼球下方。旋转毛细血管，直到血液开始流动。采血后，用纱布轻轻按压闭上眼睑。
将血液以 1， 200g 离心 15 分钟，并将上清液收集在新管中。按照制造商的建议，使用市售试剂盒测量淀粉酶、胆红素和透明质酸。接下来，将安乐死的小鼠放在设定在四摄氏度的手术台上。
使用剪刀和镊子在腹壁上做一个 V 形切口，露出腹腔。取出胰腺，分成三部分染色。将胰腺固定在4%多甲醛溶液中，然后将固定的胰腺包埋在石蜡中进行切片。
将石蜡块切成0.5毫米厚的切片，并用苏木精和伊红以及马森染色剂进行染色，以进行免疫组织化学分析。在光学显微镜下观察染色的胰腺组织。苏木精-伊红染色显示电凝组胰腺腺泡细胞散在，有慢性胰腺炎的证据。
在第 28 天，观察到胰腺腺泡细胞组织恢复和病理逆转的迹象。Masson染色显示，与假手术组相比，电凝组的纤维化明显更多。免疫组化染色显示电凝组α1型、1型胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白水平升高，慢性胰腺炎程度较高。
电凝组的透明质酸水平升高，在第 21 天左右达到峰值，而假手术组则保持稳定。电凝组的胆红素水平在第 14 天显着升高，在第 21 天左右达到峰值，而假手术组没有变化。电凝组的淀粉酶水平在第 14 天飙升，随后在第 28 天下降，假组几乎没有变化。
概述
本协议概述了一种通过电凝血诱导小鼠慢性阻塞性胰腺炎的新型建模方法。与传统方法相比，这种方法简化了诱导慢性胰腺炎的过程。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 生物学
- 慢性胰腺炎研究
背景
- 慢性胰腺炎是一种具有有限有效建模方法的衰弱性疾病。
- 传统模型通常需要复杂的程序或长期药物给药。
- 电凝血为诱导慢性胰腺炎提供了一种侵入性较小的替代方法。
- 本研究旨在改进模型以提高重复性和易用性。
研究目的
- 开发一个可靠的小鼠慢性胰腺炎电凝血模型。
- 评估电凝血后胰腺组织的病理变化。
- 评估与慢性胰腺炎相关的生化标志物。
使用的方法
- 对麻醉的小鼠进行胰管电凝血。
- 注入亚甲基蓝以可视化胰管。
- 使用苏木精-伊红和Masson染色对胰腺组织进行组织学分析。
- 测量血清淀粉酶、胆红素和透明质酸水平。
主要结果
- 在电凝血的小鼠中观察到慢性胰腺炎的组织学证据。
- 与假手术组相比，纤维化增加。
- 生化标志物显示出显著变化，表明病情的严重程度。
- 随着时间的推移，观察到胰腺腺泡细胞的恢复迹象。
结论
- 电凝血模型有效地诱导小鼠慢性胰腺炎。
- 这种方法为未来研究提供了一种更简单和可重复的方法。
- 研究结果有助于理解慢性胰腺炎的病理生理学。
常见问题
Executive Industry Relevance
Robust preclinical models of chronic pancreatitis are essential for target validation and mechanistic de-risking in early-stage drug discovery. The electrocoagulation-based mouse model offers a reproducible and operationally accessible platform for evaluating disease mechanisms and candidate interventions. This model addresses key limitations of traditional approaches, supporting predictive confidence and translational continuity in pancreatic disease research portfolios.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of fibrotic and inflammatory pathways relevant to chronic pancreatitis.
- Supports functional target validation by recapitulating hallmark pathological features.
- Facilitates mechanistic de-risking through quantitative biochemical and histological outputs.
Screening & Assay Development
- Provides a standardized in vivo system for evaluating candidate therapeutics targeting pancreatic fibrosis and inflammation.
- Delivers reproducible quantitative readouts, including serum amylase, bilirubin, and hyaluronic acid levels.
- Enables histological assay development using HE and Masson staining for fibrosis assessment.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant endpoints observed in human chronic pancreatitis.
- Supports continuity from discovery through preclinical validation by modeling progressive and reversible pathology.
- Facilitates risk-adjusted advancement decisions based on biomarker and histopathological alignment.
Pipeline & Workflow Integration
This electrocoagulation model integrates into the discovery-to-preclinical continuum for pancreatic disease research and therapeutic evaluation.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing of fibrotic and inflammatory mechanisms in a controlled in vivo context.
- Screening: Provides a reproducible platform for quantitative assessment of candidate interventions.
- Analytics: Supports comparative analysis of biochemical and histological markers across experimental conditions.
- Translational Research: Models disease progression and partial recovery, mirroring clinical trajectories.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable and accessible model for cross-program application in pancreatic research portfolios.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in target and pathway evaluation.
- Operational Value: Streamlines model establishment and standardizes data outputs for cross-study comparability.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision quality and capital allocation by providing robust preclinical evidence.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of pancreatic disease programs based on translationally relevant data.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency and familiarity with small animal handling.
- Necessitates access to electrocoagulation instrumentation and histological analysis infrastructure.
- Demands standardized protocols for reproducibility across research teams.
- Adaptation to other rodent strains or disease models may require protocol optimization.
- Model outputs are limited to chronic pancreatitis features and may not capture all aspects of human disease heterogeneity.
