用于小鼠采血的面部静脉穿刺

本研究的目的是为小鼠受试者提供一种优化的采血方法。这种方法减少了小鼠小体积采血所需的时间和技能，但仍优先考虑道德和微创实践。采血方法通常过于复杂。

我们希望简化这一切，并表明您可以用最少的时间、精力和材料实现清晰的裂解。与其他技术相比，该协议的主要优势是让研究人员节省了时间。这种方法非常快速，需要很少的材料或专业技能来执行。

首先，使用与收集管上相应标签相匹配的表型标识符标记每个笼卡和鼠标。用永久性记号笔标记小鼠的尾巴，以与管子上的标记相对应。打开手术所需的所有采血针和纱布海绵，并在每个标记的试管中加入一到两毫升裂解缓冲液。

现在用惯用手抓住鼠标的尾巴，将其放在送丝架或平坦的表面上。用非惯用食指和拇指，从尾巴向颈部区域移动，使鼠标颈背。然后用剩下的手指固定尾巴以尽量减少鼠标的移动。

接下来，用惯用手取回一个打开的三毫米柳叶刀。找到嘴巴上方的小无毛点，然后向耳朵画一条直线。在线与外眼角相交的地方停下来。

现在，将采血针插入这个交叉点，以确保充足的血液供应，并使用采血针平坦的侧缘收集一滴血液。然后将整个采血针与收集的血液一起放入含有红细胞裂解缓冲液的标记管中，并轻轻搅拌管，使血液与缓冲液完全混合。使用纱布海绵，轻轻按压穿刺部位 5 至 10 秒，然后将鼠标放回笼子中。

向每个样品管中加入约两毫升含有 0.5 毫摩尔 EDTA 的汉克斯平衡盐溶液。将试管放入离心机中，以400G旋转五分钟。在此期间，准备抗体鸡尾酒。

离心后，从每个管中弃去上清液。然后使用镊子从管中取出采血针，并在每个样品中加入 30 微升抗体混合物。涡旋样品两到三秒，使细胞重悬，并将样品在四摄氏度下孵育25到30分钟。

接下来，打开流式细胞仪并根据实验要求配置流图。使用转移移液器，向每个样品中加入 150 至 250 微升 Hanks 平衡盐溶液或其他培养基。如果需要，使用 100 微升含 DAPI 的培养基以每毫升 1 微克的最终浓度添加 DAPI。

在采集前涡旋每个样品两到三秒钟。最后，检查试剂和流式细胞仪的运行设置以进行数据采集。野生型小鼠的流式细胞术在血小板中没有显示tdTomato信号，而Pf4-Cre报告小鼠显示出明显的tdTomato阳性血小板群体和更大的tdTomato阳性血小板结合细胞。

野生型和Pf4-Cre小鼠的侧向散射图与前向散点图显示细胞碎片，淋巴细胞和粒细胞之间有明显的分离，表明有效的红细胞裂解和保存的样品结构。在MD4Ighel小鼠中检测到CD19阳性IGMA阳性B细胞，而野生型小鼠尽管CD19阳性，但缺乏IGMA信号。