Methodenartikel

Nicht-Terminal-Blut-Stichprobenverfahren bei Meerschweinchen

DOI:

10.3791/51982

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11. Oktober 2014

 ,  ,  , 
1Department of Veterinary Disease Biology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Obwohl ein bekanntes Modell, stellt das Meerschweinchen noch eine Nische in der experimentellen Tierforschung und der begrenzten Daten über die Ausführung der meisten Verfahren zur Verfügung. Hier präsentieren wir Ihnen vier verschiedene Ansätze, um Nicht-Terminal in vivo Blutentnahme Techniken entweder bewusst oder betäubt Meerschweinchen.

Zusammenfassung

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Meerschweinchen besitzen mehrere biologische Ähnlichkeiten zum Menschen und experimentellen Tiermodellen validiert 1-3. Allerdings ist die Verwendung von Meerschweinchen stellt derzeit einen relativ engen Bereich der Forschung und beschreibenden Daten zu spezifischen Methodik ist entsprechend knapp. Die anatomischen Merkmale der Meerschweinchen sind etwas anders als andere Nagetiermodellen, daher Modulation von Stichprobenverfahren für artenspezifische Unterschiede unterzubringen, zB., Im Vergleich zu Mäusen und Ratten, sind notwendig, um eine ausreichende und qualitativ hochwertige Proben zu erhalten. Wie lange und kurze Laufzeit in-vivo-Studien erfordern oft wiederholte Entnahme von Blut die Wahl der Technik sollte auch, um Stress und Unbehagen bei den Tieren zu reduzieren, sondern auch in Betracht gezogen werden, um das Überleben als auch die Einhaltung der Anforderungen der Stichprobengröße und die Zugänglichkeit zu gewährleisten. Venöse Blutproben können bei einer Reihe von Standorten in Meerschweinchen zB erhalten werden., Die Vena jugularis undVenen, jede Technik, die sowohl Vor-und Nachteile von 4,5. Hier stellen wir vier verschiedene Techniken zur Blutentnahme entweder bewusst oder betäubt Meerschweinchen. Die Verfahren sind alle Nicht-Terminal-Verfahren vorgesehen, dass die Probenvolumina und die Anzahl der Proben nicht bei Labortieren 6 nicht Richtlinien für die Blutentnahme überschreiten. Alle beschriebenen Methoden wurden gründlich getestet und angewandt für die in vivo Blutentnahme in Studien innerhalb unserer Forschungseinrichtung wiederholt.

Einleitung

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Das Meerschweinchen ist ein wertvolles und validiert experimentellen Tiermodell aufgrund einer Reihe von biologischen Ähnlichkeiten zum Menschen wie das Erfordernis einer diätetischen Versorgung mit Vitamin C, vergleichbar Plasma-Lipoprotein-Stoffwechselenzyme und Lipoprotein-Profile sowie gemeinsamen Ähnlichkeiten mit der menschlichen Plazenta und pränatalen Entwicklung 1-3,7,8. Dies macht die Meerschweinchen eine attraktive und geeignete Modell für die Untersuchung die Auswirkungen der Ernährung-assoziierten Erkrankungen wie nicht-alkoholische Fettlebererkrankungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und vermeintliche Wirkungen von Vitamin-C-Mangel, sondern auch die Wirkung von zB., Mütterliche diätetische Intervention auf der Entwicklung Nachkommen.

Wiederholte Entnahme von Blut wird häufig sowohl in lang-und kurzfristigen in-vivo-Untersuchungen erforderlich. Aufgrund artenspezifischer anatomischer Unterschiede Modulation der Entnahmetechnik ist notwendig, um Blutproben beim Meerschweinchen im Vergleich zu anderen Tiermodellen erhalten 4,5. Dies beinhaltet Variation im Verlauf der Venen und Arterien, und auch, daß Meerschweinchen nicht einen Schwanz, wodurch unterschiedliche Anforderungen und Möglichkeiten sowohl für die Probenahme und Handhabung. Probenahme aus der Vena oder Fußwurzel Vene, induziert minimalen Beschwerden und Stress im Tier und erfordert keine Narkose 3,9. Diese Technik ermöglicht die wiederholte Proben von kleinen Blutmengen (100-400 ul), zB., Biochemische Marker im Plasma zu bestimmen. Falls eine noch kleinere Größe ausreichend ist (50-100 ul), kann dies sehr einfach durch Durchstoßen der Ohrvene erhalten werden. Diese Technik kann auch in wachen Tieren durchgeführt werden und ist beispielsweise nützlich, wenn die Messung des Blutzucker 10,11. Probenahme aus der Halsschlagader können für die Sammlung von größeren Mengen Blut (1-2 ml), sondern erfordert Anästhesie.

Hier stellen wir vier verschiedene Techniken zur Blutentnahme entweder bewusst oder betäubt Meerschweinchen. Das procedures sind alle Nicht-Terminal-Verfahren vorgesehen, dass die Probenvolumina und die Anzahl der Proben nicht bei Labortieren 6 nicht Richtlinien für die Blutentnahme überschreiten. Es ist im Interesse der guten Wissenschaft sowie des Tierschutzes, dass Stress auf ein Minimum gehalten werden. Folglich kann nur gut ausgebildete und kompetente persönliche sollten die Tierversuche durchführen.

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Protokoll

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Die gezeigten Verfahren wurden nach Protokollen, die von der dänischen Tierversuchsinspektion des Ministeriums für Ernährung, Landwirtschaft und Fischerei zugelassenen geführt.

1. Blutentnahme aus der Vena Lateral oder Tarsal Vein

  1. Führen Sie dieses Verfahren ohne Narkose und die Hilfe von einem Prüfer, ein Umgang mit dem Meerschweinchen und ein Sammeln der Probe.
  2. Rasieren Sie die Fußwurzel Region des Hinterbein mit einem elektrischen Rasierer, bis die Venen sichtbar sind. Stellen Sie sicher, das Gebiet ist groß genug, um fur Eingriffe in die Einstichstelle zu vermeiden.
  3. Legen Sie das Hinterbein in einem lauwarmen Wasserbad und sanft einmassieren das Bein, so dass die Venen erweitert und mehr offensichtlich.
  4. Wischen Sie das Bein mit einem sauberen Handtuch und desinfizieren Sie die Einstichstelle mit Gaze oder einem Wattestäbchen, das mit 70% Alkohol gedämpft.
  5. Hemmen die Meerschweinchen und erweitern das Hinterbein nach unten, während mit leichtem Druck direkt über dem Kniegelenk to Bereitstellung von Stasis.
  6. Punktion der Vene mit einer Nadel 21 G oder Lanzette. Blutentnahme zB., Indem Sie eine Sammlung oder Kapillare. Manipulieren Sie vorsichtig das Bein, um den Blutfluss zu unterstützen.
  7. Frei Stase, sobald die Probe erhalten worden ist. Mit einem Stück Gaze oder Watte mit sanftem Druck auf die Einstichstelle, bis Blutung aufgehört hat.
  8. Schicken Sie das Tier in seinen Käfig und Monitor für 5-10 min zur Blutstillung zu gewährleisten.

2. Blutentnahme aus der Ohrvene

  1. Führen Sie dieses Verfahren ohne Narkose entweder allein oder vorzugsweise mit der Hilfe von einem Kollegen.
  2. Desinfizieren Sie die Rückenfläche des Ohres mit Gaze oder einem Wattestäbchen mit 70% Alkohol gedämpft.
  3. Mit leichtem Druck an der Basis des Ohres zu Stase bieten.
  4. Punktion der Vene mit einer Nadel 21 G oder Lanzette, und sammeln Blut.
  5. Lassen Sie Stase, sobald die Probe erhalten worden ist, mit einem Stück Gaze oder Watte mit GEntle Druck auf die Einstichstelle, bis Blutung aufgehört hat.
  6. Schicken Sie das Tier in seinen Käfig und Monitor für 5-10 min zur Blutstillung zu gewährleisten.

3. Blutentnahme aus der Vena jugularis

  1. Führen Sie diesen Vorgang mit der Hilfe von einem zusätzlichen Ermittler; einen Umgang mit dem Meerschweinchen und ein Sammeln der Probe.
  2. Betäuben das Meerschweinchen mit einem geeigneten Betäubungsmittel für die gesamte Dauer dieses Verfahrens. Eine Mischung von Tiletamin (0,93 mg / kg), Zolazepam (0,93 mg / kg), Xylazin (1,49 mg / kg) und Butorphanol (0,06 mg / kg) verwendet werden.
  3. Legen Sie den narkotisierten Meerschweinchen auf dem Rücken und sanft zurückziehen den Vorderbeinen kaudal.
  4. Rasieren und desinfizieren (zB., Mit 70% Alkohol) dem ventralen Teil des Halses.
  5. Bestreichen Sie die Spritze mit Heparin oder EDTA entweder vor der Probenahme, um das Risiko von Gerinnungs reduzieren.
  6. Abtasten dem Schlüsselbein und legen Sie eine 25 G (oder 23 G) Nadel auf einer 1 ml Spritze ap montiertproximately 1 cm seitlich der Mittellinie auf der Höhe des Schultergelenks. Halten Sie die Spritze in einem leichten Aufwärtswinkel und medial, während ein leichter Unterdruck. Damit eine Beschädigung der darunter liegenden Strukturen wie der Halsschlagader ist ziemlich oberflächlich entfernt. Neigen Sie den Hals der Meerschweinchen leicht nach hinten erhöht Stase der Vene ist.
  7. Lassen Sie die Vorderbeine, wenn die Blutprobe erhalten und zu lindern Stase, bevor die Nadel zurückgezogen wird. Verwenden Sie ein trockenes Stück Gaze oder Watte, um sanften Druck auf die Punktionsstelle.
  8. Zurück, das Tier zu einer Erholung Käfig und zu überwachen, um die Blutstillung und Erholung von der Anästhesie zu gewährleisten.

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Ergebnisse

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Vier verschiedene Ansätze zur nicht-terminale Blutentnahme in vivo Techniken entweder bewusst oder narkotisierten Meerschweinchen wurden vorgelegt. Abbildung 1 zeigt den Verlauf der lateralen Vena saphena und Fußwurzel Vene im Meerschweinchen und mögliche Punktionsstellen. Ohrvenen auf der dorsalen Oberfläche des Meerschweinchens Ohr sichtbar sind in Abbildung 2 dargestellt Diese Adern können zur Blutentnahme verwendet werden, wenn nur ein sehr kleines Volumen erforderlich ist....

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Diskussion

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Im Vergleich zu Mäusen und Ratten, Meerschweinchen sind von Natur aus ängstlich und muss ruhig angegangen und richtig, um Stress zu reduzieren behandelt werden. Aus Tierschutzsicht, mit Sorgfalt handeln, sind natürlich eine Priorität; jedoch wird dies auch das Risiko von Angst damit verbundenen Auswirkungen auf die erfassten Daten beispiels., erhöhte Blutspiegel von Corticosteroiden und Glucose 12. Ebenso wird täglich Umgang mit den Tieren zu normalen Verfahren zu gewöhnen und kann dazu dienen, Stres...

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Offenlegungen

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Die Autoren haben nichts zu offenbaren. Alle Verfahren wurden von der Tierversuchsgesetz von Dänemark, das im Einklang mit dem Übereinkommen des Europarates ETS 123 ist genehmigt.

Danksagungen

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Wir erkennen die geschickte Unterstützung von Annie B. Kristensen, Elisabeth V. Andersen, Belinda B. Bringtoft und den Tierpflegern bei der Abteilung für Experimentelle Medizin, Frederiksberg Campus, Fakultät für Gesundheit und Medizin, Universität von Kopenhagen, Dänemark. Jacob Lønholdt wird dankte für die hervorragende technische Unterstützung bei Dreharbeiten die Verfahren. Diese Studie wurde zum Teil durch die LIFEPHARM Center zur in vivo-Pharmakologie und Universität Kopenhagen unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
ElektrorasiererWella (Contura), Dänemark273207Es kann ein alternatives Produkt verwendet werden. Mehrere Lieferanten
Spritzen B.Braun-Omnifix-F, Deutschland9161406VEs kann auch ein alternatives Produkt verwendet werden. Mehrere Lieferanten
NadelnBD Microlance, Spanien301156Alternatives Produkt kann verwendet werden. Mehrere Lieferanten
Microvette-Auffangröhrchen Sarstedt, D-51588Nü mbrecht, Deutschland201.288.100Alternatives Produkt kann verwendet werden. Mehrere Lieferanten
Accu-Check AnalysatorRoche A/S Diagnostics, DänemarkAlternatives Produkt kann verwendet werden. Mehrere Lieferanten
Heparin 5000 IE/mlLEO Pharma, DänemarkAlternatives Produkt kann verwendet werden. Mehrere Lieferanten
AnästhesieZoletil 50, Chemvet, DänemarkAlternatives Produkt kann verwendet werden. Mehrere Lieferanten
AnästhesieNarcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, DänemarkAlternatives Produkt kann verwendet werden. Mehrere Lieferanten
AnästhesieTorbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, DänemarkAlternatives Produkt kann verwendet werden. Mehrere Lieferanten
Neutrale AugensalbeAlternatives Produkt kann verwendet werden. Mehrere Lieferanten
Gaze oder ein Wattestäbchen Es kann ein alternatives Produkt verwendet werden. Mehrere Lieferanten
Desinfektionsmittel (70% Alkohol)Es kann ein alternatives Produkt verwendet werden. Mehrere Lieferanten

Referenzen

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Schlagwörter

Blutentnahme bei Meerschweinchennicht terminale ProbenahmeProbenahme aus der SaphenveneProbenahme aus der JugularveneProbenahme aus der TarsalveneProbenahme aus der OhrveneProbenahme bei an sthesierten TierenProbenahme bei wachen TierenRichtlinien zur Blutentnahmewiederholte In vivo Probenahme

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