Spot the Correct Tissue Every Time in Multi-Gewebe-Blöcke

Summary

Der Zweck der Probenausrichtung Tag (vor Ort) soll als Orientierungshilfe, um in einzelnen Gewebeidentifikation in multi-Gewebe Paraffinblöcke unterstützen funktionieren. Diese Protokolle zeigen, wie sie ist leicht von gemeinsamen, kostengünstigen Histologie Materialien gebaut und dient als zuverlässige visuelle Marker in Paraffinblöcke und Abschnitte.

Abstract

Multi-Gewebe Paraffinblöcke bieten eine hohe Durchsatzanalyse mit erhöhter Effizienz, experimentelle Einheitlichkeit und reduziertem Zeit- und Kostenaufwand. Tissue Microarrays bilden die Mehrheit der Multi-Gewebe Paraffinblöcke, sondern zunehmend die Forscher mit nicht-angeordneten Blöcken mit größeren Gewebe von mehreren Personen, die ohne erhebliche Investitionen in die Planung und Ausstattung bieten viele der Vorteile von Tissue Microarrays können. Eine kritische Komponente jeder Mehrgewebeanalyse ist benutzt, um jedes Gewebe zu identifizieren Orientierungsverfahren. Obwohl Verfahren existieren, um die richtige Orientierung und Identifizierung von Gewebe in mehreren Gewebeblöcken zu erhalten, die meisten sind nicht gut geeignet, um nicht in einem Array besteht, kann wertvollen Raum innerhalb einer Anordnung zu verbrauchen und / oder nur schwer in der Standard histologisches Labor herzustellen. Die Probe Orientierung Tag (vor Ort) ist eine einfache, kostengünstige Orientierungshilfe, die eindeutig in die Paraffinblocks und alle Gewebeschnitte fo sichtbar istr zuverlässige Probenidentifikation in angeordnet und nicht in einem Array-Layouts. Der Fleck liefert Vorteile gegenüber bestehenden Orientierungsverfahren für Nicht-Array-Blöcke, wie es keinen direkten Modifikation des Gewebes erfordern und sorgt für Flexibilität bei der Anordnung der Gewebestücke.

Introduction

Die Fähigkeit, Gewebeproben von mehreren Personen in einem einzigen Paraffinblock einzubetten ermöglicht eine einfache Side-by-Side-Vergleich zwischen den Behandlungen und Einzelpersonen, eliminiert die Variabilität zwischen den Folien, und verringert die Kosten und Arbeitsbelastung der Schneiden und Färben von Proben. Diese Mehrgewebeblöcke werden typischerweise entweder als Gewebe-Mikroarrays (TMA) oder Paraffinblöcken, die Gewebe aus mehreren Individuen in einem nicht-Array-Layout erzeugt wird. Aufrechterhaltung der Probenidentität ist entscheidend für den Erfolg eines jeden Multigewebeanalyse. Forscher verwendet haben TMAs seit ihrer Entwicklung, um die Effizienz....

Protocol

1. Konstruktion des Spots

1. Zugeben von 50 mg Rinderserumalbumin (BSA) auf 1 ml Gewebemarkierungsfarbstoff in einem 15 ml konischen Röhrchen oder 2 ml Mikrozentrifugenröhrchen und Vortex für 1 min oder bis vollständig gelöst.
   Hinweis: Bei diesem Protokoll verwenden biochemischen Grade BSA. Während andere Qualitäten und Reinheiten nicht getestet wurden, ist zu erwarten, dass Grad und Reinheit nicht einen erheblichen Einfluss auf den Erfolg der Stelle haben.
2. Wärme 9 ml Hydroxyethyl Agarose-Gel Verarbeitung in einem 15 ml konischen Röhrchen in der Mikrowelle bei 30% Leistung für 10 Sekunden-Schritten, bis das Gel vollständig geschmolzen ist.

Results

Der Spot wird als rund, hell farbigen Punkt in der Paraffinblock (1A und 2D), in allen Paraffinschnitten und bleibt auf dem Objektträger durch die H & E oder IHC Färbeverfahren (1B - 1D und 2D). Dieser offensichtliche visuelle Hinweis unterstützt sowohl die histotechnician und Forscher in Identifizierung jeder einzelnen Gewebestück und vereinfacht die Kommunikation als histotechnician kann der visuelle Hinweis verwenden, um die Anor.......

Discussion

Erfolgreiche Vorbereitung und Nutzung der Spots erfordert eine sorgfältige Einhaltung der wenigen technischen Schritte. Schmelzen des Hydroxyethyl Agarose sollte langsam und bei schwacher Hitze durchgeführt werden. Schnell Schmelzen bei hoher Hitze kann in gewissen Zusammenbruch der Agarose weniger als optimalen Ergebnissen führen. Beim Schneiden der farbstoffbeladenen Stecker in Stücke für die Verarbeitung, dass die Dicke jedes Teils größer ist als 4,5 mm und nicht mehr als 7 mm betragen. Die abgerundeten Enden als Abf.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Histogel Gel für die Probenverarbeitung	Thermo Scientific	HG-4000-012	http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html
Farbstoff für die Gewebemarkierung	Triangle Biomedical Sciences, Inc.	TMD-5	Jeder Gewebemarkierungsfarbstoff wäre höchstwahrscheinlich ausreichend.
Arraymold Kit A 2 mm (60 Kern)	Arraymold	20015A	Jeder manuelle Tissue-Arrayer würde ähnlich funktionieren.