Waiting
Login-Verarbeitung ...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

التصوير تلألؤ بيولوجي من Neuroinflammation في الفئران المعدلة وراثيا بعد الطرفية تلقيح ألفا Synuclein الألياف

Published: April 13, 2017 doi: 10.3791/55503
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 2, 1
1German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE), 2Centre for Prions and Protein Folding Diseases & Department of Biochemistry, University of Alberta

Summary

حقن الطرفية من الألياف، synuclein ألفا في الصفاق أو اللسان من تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران، التي تعبر عن الإنسان ألفا synuclein مع الطفرة A53T العائلية واليراع وسيفيراز، يمكن أن تحفز الأعصاب، بما في ذلك neuroinflammation في الجهاز العصبي المركزي الخاصة بهم.

Abstract

لدراسة سلوك مثل بريون من تتجمع ألفا synuclein، هناك حاجة إلى نماذج الماوس التي تسمح انتقال سريع وبسيط من prionoids ألفا synuclein، والتي تتسبب في أمراض الأعصاب في الجهاز العصبي المركزي (CNS). نحن هنا وصف تلك intraglossal أو الحقن داخل الصفاق من الألياف، synuclein ألفا إلى bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران التي بإفراط البشري ألفا synuclein مع الطفرة A53T من المروج بروتين بريون ويراعة luciferase من المروج لييفي الدبقية البروتين الحمضية (GFAP)، ويكفي للحث على المرض neuropathologic. بالمقارنة مع تيراغرام متماثل (M83 + / +) الفئران التي تتطور لديهم أعراض عصبية شديدة بدءا من سن 8 أشهر، متخالف تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الحيوانات تبقى خالية من المرض من تلقاء أنفسهم حتى التوصل إلى سن 22 شهرا. ومن المثير للاهتمام، حقن الألياف-synuclein ألفا عبر intraperitoneآل الطريق التي يسببها مرض عصبي مع الشلل في أربعة من خمسة تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران مع فترة حضانة متوسط 229 ± 17 يوما. أظهرت الحيوانات المريضة ودائع شديدة من فسفرته ألفا synuclein في أدمغتهم والنخاع الشوكي. كانت تراكمات ألفا synuclein sarkosyl-غير قابلة للذوبان وcolocalized مع اليوبيكويتين وP62، وكان يرافقه استجابة التهابية مما أدى إلى دباق نجمي الخلايا وكثرة الدبيقيات. والمثير للدهشة، كان التلقيح من الألياف، synuclein ألفا في اللسان أقل فعالية في التسبب في مرض واحد فقط من خمسة الحيوانات المحقونة تظهر ألفا synuclein علم الأمراض بعد 285 يوما. وتشير النتائج التي توصلنا إليها أن التلقيح عبر الطريق intraglossal وأكثر من ذلك عبر الطريق داخل الصفاق هو مناسبة للحث على مرض عصبي مع بصمات ذات الصلة synucleinopathies في تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران. وهذا يوفر نموذجا جديدا لدراسة مثل بريون المرضية لحثد كتبها prionoids ألفا synuclein بمزيد من التفصيل.

Introduction

وهناك أدلة متزايدة على أن ألفا synuclein له خصائص مشابهة لتلك التي بروتين بريون، لا سيما في قدرتها على البذور الذاتي ونشر misfolding بين الخلايا وعلى طول الممرات العصبية. ويشار إلى هذه الخاصية ألفا synuclein أيضا باسم "بريون مثل 'أو' prionoid"، وبدعم من الملاحظات في تجارب زراعة الأعضاء، والتي توحي على الانتقال من تتجمع ألفا synuclein من الخلايا العصبية المريضة لزرع حديثا الخلايا العصبية السليمة 1، 2 و 3 و 4. أيضا الحقن المباشر للتتجمع ألفا synuclein في الدماغ أو المحيط، مثل العضلات hindlimb أو جدار الأمعاء، والنتائج في انتشار أمراض ألفا synuclein إلى أجزاء البعيدة للCNS 5، 6، 7، <سوب الطبقة = "XREF"> 8 و 9 و 10. قمنا بتحليل انتقال prionoids ألفا synuclein عبر طرق الطرفية في مزيد من التفاصيل وتناول مسألة ما إذا كانت تتجمع ألفا synuclein قد neuroinvade الجهاز العصبي المركزي بعد intraglossal احد أو الحقن داخل الصفاق، وهي الميزة التي سبق قد تعرض لالبريونات ولكن ليس لألفا تتجمع synuclein. بعد حقن البريونات في اللسان، ويتحقق neuroinvasion من الجهاز العصبي المركزي عن طريق نشر على طول العصب تحت اللسان لسان الذي يؤدي إلى نواة العصب تحت اللسان، والذي يقع في جذع الدماغ (11). كنموذج الماوس اخترنا تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران التي بإفراط متحولة A53T من البشر ألفا synuclein من المروج بريون، ويراعة luciferase تحت سيطرة أحد المروجين GFAP لمراقبة تفعيل نجمي الخلايا التي تلألؤ بيولوجي، كما هو موضح سابقا في دماغبريون-إصابة الفئران 12. في أيدينا bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران لم تتطور المرض حتى 23 شهرا من العمر كما لم تظهر من قبل الآخرين (13). حقنة واحدة من الألياف، synuclein ألفا الإنسان عبر intraglossal أو داخل الصفاق الطريق التي يسببها المرض العصبي يعانون من أمراض في العقول والنخاع الشوكي من تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران دعم الفرضية القائلة بأن prionoids ألفا synuclein مشاركة الخصائص المهمة مع البريونات 14.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تم تنفيذ جميع الإجراءات بما في ذلك الحيوانات مع موافقة لجنة حماية الحيوان وكالة شمال الراين وستفاليا الدولة للبيئة (LANUV). تم إيواء الحيوانات ويعتني به وفقا لظروف قياسية مع ضوء 12 ساعة / دورة الظلام، وحرية الوصول إلى الغذاء والماء.

1. الحيوان نموذج

  1. تزاوج الأقارب فرداني الزيجوت تيراغرام (GFAP -luc +/-) الفئران مع فرداني الزيجوت الفئران تيراغرام (M83 +/-) لتوليد فرداني الزيجوت bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران 15 و 16.
  2. الوراثي ذرية مع الوقت الحقيقي PCR لوجود ترميز التحوير البشري ألفا synuclein ومع معيار PCR ليراعة luciferase 12 و 17.
  3. تطعيم الحيوانات في سن ستة إلى ثمانية أسابيع.

2. إعداد اللقاح

  1. إعداد موnomeric المؤتلف الإنسان ألفا synuclein مع الطفرة A53T في المخزن مخزنة تريس المالحة (TBS) التي تحتوي على 150 ملي كلوريد الصوديوم في 20 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 7.2) كما وصفت سابقا 14.
  2. إعداد ييفي ألفا synuclein عن التطعيمات التي كتبها تهييج 3 ميكروغرام / ميكرولتر من أحادى المؤتلف الإنسان ألفا synuclein في شاكر المداري في 800 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية لمدة 5 أيام.
  3. تمييع المجالس ليفية في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) للوصول إلى تركيز النهائي من 1 ميكروغرام / ميكرولتر لداخل الصفاق أو 2 ميكروغرام / ميكرولتر عن التطعيمات intraglossal.
  4. تفتيت الألياف، synuclein ألفا مع sonicator قضيب لمدة 1 دقيقة (40 نبضات من مدة 0.5 الصورة مع وقفة ثانية واحدة بين كل نبضة واتساع المقرر أن 50٪) على الجليد. لتجنب التلوث عبر البذر. استخدام تحقيقات صوتنة نظيفة للتحضير اللقاح مختلفة.

3. Intraglossal الحقن

  1. تخدير الحيوانات مع intrapeحقن ritoneal من 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 ملغم / كغم من زيلازين. قرصة إصبع الحيوان وتؤكد أنه لا سحب hindlimb لضمان التخدير المناسب. استخدام البيطري مرهم على عيون الحيوان لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
  2. إصلاح الحيوانات مخدر بعناية مع شريط لاصق على لوحة التدفئة في موقف الظهرية راقد مع رؤوسهم التوجه نحو محقق.
  3. ملء 27 G حقنة تحت الجلد القابل للتصرف مع 5 ميكرولتر من الألياف، synuclein ألفا sonicated أو برنامج تلفزيوني.
  4. استخدام واحد ملقط الإبهام حادة الانف مع نصائح مسننة لعقد فم الحيوان المفتوحة، وزوج الثانية أصغر من الملقط لسحب بعناية اللسان لجعل الجانب السفلي من اللسان يمكن الوصول إليها عن طريق الحقن.
  5. حقن إبرة الحقنة في الجانب السفلي الأيمن أو الأيسر من اللسان على مقربة من العصب تحت اللسان. ببطء حقن اللقاح بعد 5 ثوان. ببطء سحب الإبرة بعد 5 ثوان للتأكد من أن اللقاحوقد اخترق الأنسجة ولا تضيع في حين التراجع الإبرة.
  6. الافراج عن الحيوان من تثبيتات وترك الأمر على لوحة التدفئة تحت مراقبة مستمرة حتى الشفاء التام.

4. داخل الصفاق حقن

  1. لحقن داخل الصفاق، خدر الحيوانات قريبا في غرفة التخدير عن طريق الاستنشاق مع isoflurane / الأكسجين باستخدام معدل تدفق 2 لتر / دقيقة والمرذاذ المقرر أن 2٪. قرصة إصبع الحيوان وتؤكد أنه لا سحب hindlimb لضمان التخدير المناسب.
  2. ملء 27 G حقنة تحت الجلد القابل للتصرف مع 50 ميكرولتر من الألياف، synuclein ألفا sonicated أو برنامج تلفزيوني.
  3. حقن مباشرة في الصفاق من الماوس وتجنب اختراق الأمعاء الدقيقة أو الأعور الواقعة خلف جدار البطن من خلال عقد هذا الحيوان في موقف الظهرية مع رئيس تواجه بعيدا عن المحقق ونزولا عند حوالي 45 درجة. مراقبة الحيوانات إلا بعد أن تعافىمن التخدير.

5. ضوء بارد التصوير

  1. صورة تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران كل 2-4 أسابيع باستخدام نظام التصوير تلألؤ بيولوجي.
  2. قبل التصوير تخدير الفئران في غرفة الأيزوفلورين / الأكسجين بمعدل تدفق 2 لتر / دقيقة والمرذاذ المقرر أن 2٪ بقليل. قرصة إصبع الحيوان وتؤكد أنه لا سحب hindlimb لضمان التخدير المناسب.
  3. حلاقة ويزيل الشعر رؤساء الفئران مع كريم مزيل الشعر. لون آذان باللون الأسود مع علامة غير مزعجة لمنع تلألؤ بيولوجي غير محددة.
  4. تمييع-D وسيفيرين ملح البوتاسيوم، وركيزة من وسيفيراز، في برنامج تلفزيوني إلى 30 ملغ / مل محلول المخزون. تخزين هذه في 1 مل aliquots في -20 ° C. حماية المنحل D-وسيفيرين من التعرض للضوء.
  5. وزن الحيوانات قبل الحقن. حساب حجم الدقيق D-وسيفيرين للحقن 150 ملغم / كغم من وزن الجسم. البريتونى حقن D-luciferin والعودة الحيوان إلى غرفة التخدير.
  6. بدء برامج التصوير. بعد أن وصل نظام التصوير في درجة الحرارة التشغيلية تهيئة النظام عن طريق النقر على زر "تهيئة" في لوحة التحكم.
  7. حدد أزرار "الفلورسنت" و "الصورة". ضبط الوقت التعرض ل60 ثانية، وbinning إلى "متوسط"، وF / إيقاف ل"1"، وكسب EM إلى 'إيقاف'.
  8. تأكد من أن يتم تعيين مرشح الإثارة على "حظر" وتصفية الانبعاثات إلى 'فتح'، وتعيين ارتفاع الموضوع إلى 1.50 سم.
  9. عشرة دقيقة بعد حقن مع D-وسيفيرين، وضع الحيوانات على لوحة التدفئة في غرفة التصوير والتأكد من أن يخرس بهم توضع بشكل صحيح في منفذ التخدير. إغلاق تدفق الأيزوفلورين / الأكسجين من الغرفة استنشاق وفتح تدفق للغرفة التصوير مع معدل التدفق من 0.25 لتر / دقيقة والتبخر من 2٪. إغلاق باب العلاقات العامة غرفة التصويرoperly.
  10. انقر على زر "اكتساب" لقياس تلألؤ بيولوجي، والتي تأخذ 60 ثانية. وقف تدفق الأيزوفلورين ومراقبة الحيوانات إلا بعد أن تعافى تماما بعد إعادتها إلى أقفاصها.
  11. استخدام برامج التصوير لقياس تلألؤ بيولوجي. ضمن "أداة لوحة 'اختر' أدوات العائد على الاستثمار". تحت عنوان "النوع" ضمن "أدوات العائد على الاستثمار 'اختر' قياس العائد على الاستثمار".
  12. ضمن 'أدوات العائد على الاستثمار "، انقر على أداة" الدائرة "وحدد عدد رويس رسم من القائمة المنسدلة - مثالي" 3 "لمدة ثلاثة الفئران.
  13. في الصورة انقر بزر الماوس الأيمن فوق كل ROI وتحت عنوان "خصائص" ضبط العرض والارتفاع إلى 1.25 سم. وضع كل ROI على منطقة الدماغ التي كميا.
  14. في الجانب الأيسر العلوي من الصورة، وضع لوحة وحدات إلى 'الاشعاع (الفوتونات).
  15. ضمن "أداة لوحة"، حدد "صورة ضبط" وضبط الحد الأدنى والحدالحد الأقصى من 'مقياس اللون، على سبيل المثال، من 0.20e6 إلى 1.00e6.
  16. تحت عنوان "ملف" حفظ البيانات مع 'حفظ'.

6. تحليل البيوكيميائية

  1. عزل العقول والنخاع الشوكي وفقا لبروتوكولات إنشاء 18 و 19.
  2. التجانس الدماغ كله وعينات النخاع الشوكي كلها بشكل منفصل في برنامج تلفزيوني في وجود الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز مثبطات (مخفف ل1x أخرى في PBS) في اثنين من 30 ثانية دورات مع 6000 دورة في الدقيقة في الخالط الأنسجة. تأكد من أن الدماغ وعينات النخاع الشوكي والمتجانس إلى تركيز النهائي من 20٪ (وزن / المجلد).
  3. يصوتن العينات مرتين مع إبقائها على الجليد مع نبض المستمر من 10 ثانية والسعة المحددة إلى 50٪.
  4. ضبط الخليط إلى 10٪ في برنامج تلفزيوني و 750 ملي مول كلوريد الصوديوم عن طريق تمييع لهم 1: 1 مع 1.5 M كلوريد الصوديوم في برنامج تلفزيوني.
  5. للفصل بين الحطام الخلوي، الطرد المركزي الخليط في 1000 x ج لمدة 5 دقائق في4 ° C. الحفاظ على supernatants للخطوات القادمة والتخلص من الكريات.
  6. قياس تركيز البروتين في الخليط باستخدام فحص الحمض bicinchoninic (BCA) وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. احتضان 1.0 ملغ من البروتين الكلي من الخليط الدماغ أو 0.8 ملغ من الخليط في النخاع الشوكي في N-laurylsarcosyl بتركيز نهائي 10٪ (وزن / المجلد) لمدة 15 دقيقة على الجليد.
  7. تراكب الخليط على وسادة 3 مل السكروز 10٪ (وزن / المجلد) في الماء المقطر، ونابذة لهم في 465000 x ج لمدة 1 ساعة عند 4 درجات مئوية.
  8. إعادة تعليق الكريات في العازلة التي تحتوي على 4٪ دوديسيل كبريتات الصوديوم (SDS)، 2٪ β-المركابتويثانول، 192 ملي الجلايسين، 25 ملي تريس، و 5٪ (وزن / المجلد) السكروز.
  9. تغلي العينات عند 100 درجة مئوية لمدة 5 دقائق وتحميلها على المواد الهلامية بولي أكريلاميد SDS-لالكهربائي في نظام المخزن حمض morpholineethanesulfonic (MES).
  10. نقل البروتينات فصلها لdifluoride البولي فينيل (PVDF) الأغشية في وزارة شؤون المرأةidry نظام النشاف.
  11. احتضان الأغشية في 0.4٪ (المجلد / المجلد) حل الفورمالين في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة على الدوار مع 35 دورة في الدقيقة لعبور الارتباط البروتينات مع الغشاء.
  12. منع الأغشية العازلة في TBS تحتوي على 0.05٪ (المجلد / المجلد) توين 20 و 5٪ (وزن / المجلد) الحليب لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  13. احتضان البقع مع الأجسام المضادة الأولية في عرقلة العازلة بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  14. غسل الأغشية ثلاث مرات في المخزن TBS واحتضان لهم مع الأجسام المضادة الثانوية peroxidase- أو fluorophore مترافق في TBS لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  15. تصور الأجسام المضادة الثانوية ملزمة التوهج أو مضان وفقا لبروتوكولات إنشاء 20.

تحليل 7. المناعي

  1. يذوى أدمغة تشريح والنخاع الشوكي في محطة معالجة الأنسجة وتضمينها في البارافين باستخدام محطة البارافين.
  2. قطع تيس جزءا لا يتجزأ من البارافينيقاضي مع مبضع للفحص المجهري في 8 ميكرون أقسام الاكليلية سميكة وجبل المقاطع على الشرائح الزجاجية.
  3. Deparaffinize المقاطع الأنسجة التي يحتضنها منهم في اثنين من حمامات زايلول منفصلة لمدة 5 إلى 10 دقائق وترطيب لهم من خلال سلسلة من الحمامات الايثانول متدرج (100٪، 90٪، 70٪، 50٪)، وأخيرا مع H 2 O.
  4. احتضان المقاطع في 0.01 M عازلة سيترات (الرقم الهيدروجيني 6.0) لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة، وبالإضافة إلى ذلك سلقها لمدة 10 دقيقة في فرن الميكروويف.
  5. دع أقسام يبرد إلى درجة حرارة الغرفة واحتضان لهم 3٪ محلول بيروكسيد الهيدروجين لمدة 30 دقيقة لمنع بيروكسيديزات الذاتية.
  6. منع المقاطع الأنسجة التي الحضانة مع 20٪ (المجلد / المجلد) العادي مصل الماعز، 1٪ (المجلد / المجلد) زلال المصل البقري (BSA)، و 0.5٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  7. احتضان المقاطع مع الأجسام المضادة الأولية مخففة في 1٪ (المجلد / المجلد) العادي مصل الماعز، 1٪ (المجلد / المجلد) BSA، و 0.25٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
    8. <لى> غسل أقسام مرتين مع 0.25٪ (المجلد / المجلد) تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني ومرة ​​واحدة مع برنامج تلفزيوني.
  8. وصمة عار على المقاطع مع الأجسام المضادة الثانوية fluorophore مترافق المقابلة ودابي صبغ النووي مخففة في 1٪ (المجلد / المجلد) العادي مصل الماعز، 1٪ (المجلد / المجلد) BSA، وبرنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  9. بعد غسل مرتين مع 0.25٪ (المجلد / المجلد) تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني ومرة ​​واحدة مع PBS، ساترة الشرائح مع وسائل الاعلام تضمين ووضع تصور لتلطيخ مع متحد البؤر مجهر المسح بالليزر.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

حقن الطرفية من prionoids ألفا synuclein عبر اللسان أو الغشاء البريتوني الناجم عن أمراض الأعصاب في الجهاز العصبي المركزي من bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران (الجدول 1) والشكل (1). بعد الحقن داخل الصفاق واحد مع الألياف-synuclein ألفا، أربعة من خمسة الفئران المتقدمة مرض عصبي مع فترة حضانة متوسط ​​229 ± 17 يوما. والمثير للدهشة، وضعت واحدة فقط من خمس الفئران مرض CNS بعد الحقن intraglossal مع الألياف ألفا synuclein بعد 285 يوما. لم التلقيح مع PBS لا تسبب المرض في غضون فترة 420 يوم من التجربة.

وكشف تحليل الكيمياء الحيوية من قبل الغرب النشاف والتحقيق مع الأجسام المضادة EP1536Y-الفوسفات محددة ضد Ser129 ألفا synuclein أن الحيوانات المريضة تراكمت لكل من طرق انتقال المجاميع من فسفرته وsarkosyl-insoluble ألفا synuclein في أدمغتهم والنخاع الشوكي (الجدول 2 والشكل 2). في المقابل، العقول والنخاع الشوكي الحيوانات حقن PBS وغير المريضة يتضمن فقط الأنواع أحادى من فسفرته ألفا synuclein.

كشف مناعي تلطيخ شرائح دماغ الفئران حقن داخل الصفاق والمريضة مع pSyn رقم 64 الأجسام المضادة الفوسفات محددة لتوزيع واسعة من ودائع ألفا synuclein فسفرته في جميع أنحاء CNS (الجدول 2 والشكل 3). وعلاوة على ذلك، والودائع فسفرته ألفا synuclein colocalized مع اليوبيكويتين وP62 مما يشير إلى التوازن البروتين الشاذة التي قد تسهم في تشكيل الودائع.

ورافق تراكم المجاميع ألفا synuclein في الحيوانات المريضة عن التغيرات neuroinflammatory، والتي تم الكشف من قبلتلطيخ المناعي للGFAP، علامة من الخلايا النجمية التي يمكن أن تكشف دباق النجمي رد الفعل (الشكل 4). بالإضافة إلى ذلك، تم العثور على تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة أيضا في المناطق ذات وفرة علم الأمراض ألفا synuclein من تلطيخ المناعي للIBA-1 (المتأينة ملزم الكالسيوم محول جزيء 1). وفقا، كشفت التصوير تلألؤ بيولوجي زاد من وهج (> 2 × 10 6 ع / ق / سم 2 / ريال سعودي) المنبعثة من أدمغة تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) حقن الفئران مع الألياف-synuclein ألفا، قبل فترة وجيزة أنها وضعت علامات المرض العصبي. في المقابل، لم أدمغة فئران حقنت مع PBS لا تظهر أي زيادة في إشعاع. زاد من وهج يدل على دباق النجمي رد الفعل، وهي السمة المميزة لneuroinflammation، لأن الدافع وراء التعبير وسيفيراز من المروج GFAP.

شكل 1
الشكل 1: حقن مع الألياف-synuclein ألفا عن طريق داخل الصفاق أو الطريق intraglossal يتسبب المرض في bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران. (A) الكترون صورة مجهرية من الألياف الإنسان المؤتلف sonicated-synuclein ألفا التي كانت تحقن داخل الصفاق وintraglossally في الفئران. تلطيخ السلبية مع خلات اليورانيل كشف مجموعات متعددة من المجاميع قصيرة، على شكل قضيب. الحانات النطاق = 100 نانومتر. وتشير (B) كابلان ماير منحنيات البقاء على قيد الحياة بعد أن حقن داخل الصفاق مع الألياف ألفا synuclein أربعة من خمسة تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) وضعت الفئران مرض عصبي في 229 ± 17 يوما (اللون الأرجواني الساحات المغلقة)، في حين أن أيا من السيطرة على الفئران المحقونة PBS-وضعت علامات خلل عصبي في 420 يوما (الساحات المفتوحة البنفسجية). بعد التلقيح intraglossal مع الألياف ألفا synuclein الماوس واحد من خمسة لقوا حتفهم بعد 285 يوما (الأخضرالدوائر المغلقة). في المقابل، فإن أيا من السيطرة على الفئران المحقونة PBS-تطوير مرض عصبي أو عفويا توفي (الدوائر الخضراء المفتوحة). تعديل من Breid وآخرون. 2016 (14). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2: تحليل كيميائي حيوي من فسفرته ألفا synuclein في الجهاز العصبي المركزي من محيطيا حقن تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران. (A) Immunoblotting مع الأجسام المضادة EP1536Y، مع الاعتراف الفسفرة في Ser129 ألفا synuclein، أظهرت أن حقن داخل الصفاق والفئران المريضة تراكمت الأنواع عالية الوزن الجزيئي من المجاميع sarkosyl غير قابلة للذوبان من فسفرته ألفا synuclein في أدمغتهم لد النخاع الشوكي. لم السيطرة على الفئران تحدى مع PBS لا تتراكم مجاميع من فسفرته ألفا synuclein وأظهر العصابات فقط لشكله أحادى. أظهر (B) بعد التحدي intraglossal مع الألياف-synuclein ألفا فقط الماوس واحد والحيوان 121، وحدات sarkosyl-غير قابلة للذوبان من فسفرته ألفا synuclein في الدماغ والحبل الشوكي، في حين ظلت كل الفئران الأخرى تلقيح intraglossally صحية من دون ودائع ألفا synuclein. وأظهرت الجماهير الجزيئية في kilodaltons. يظهر تحميل العينة في كل حارة من خلال الكشف عن الأكتين. تعديل من Breid وآخرون. 2016 (14). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3)
الشكل (3): يبين التحليل المناعي أن ودائعفسفرته ألفا synuclein colocalize مع اليوبيكويتين وP62 في العقول والنخاع الشوكي من المريضة تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران. كشفت شارك في تلطيخ فسفرته ألفا synuclein، مع الكشف عن الأجسام المضادة EP1536Y، واليوبيكويتين على colocalization واضح في العقول، كما لوحظ في النواة المهادية (A)، والنخاع الشوكي، والكشف عنها في المادة الرمادية (B)، من الفئران المريضة بعد التحدي داخل الصفاق مع الألياف ألفا synuclein. وبالمثل، فسفرته ألفا synuclein، مع الكشف عن الأجسام المضادة pSyn رقم 64، colocalized أيضا مع P62 في العقول (C) والنخاع الشوكي (D) من الحيوانات المريضة. (A إلى D) PBS حقن الحيوانات الأصحاء لم تظهر ودائع أو colocalization لأي من هذه البروتينات. ويرد تلطيخ النووي مع دابي في الزرقاء. الحانات النطاق = 20 ميكرون. تعديل من Breid وآخرون. (2)016 14. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (4)
الشكل 4: تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران وضعت دباق بعد التحدي الطرفية مع الألياف ألفا synuclein. كشفت (A) التحليل المناعي من أقسام الدماغ من الحيوانات المريضة مع الأجسام المضادة ضد GFAP، علامة من الخلايا النجمية، دباق النجمي رد الفعل في المناطق التي بها ترسبات من فسفرته ألفا synuclein، التي تم الكشف عنها في جذع الدماغ مع pSyn رقم 64 الأجسام المضادة. في المقابل، لم يكن هناك دباق النجمي رد الفعل في أدمغة الفئران السيطرة حقن PBS. (B) وبالمثل، تلطيخ مع الأجسام المضادة إلى IBA-1، علامة من الخلايا الدبقية الصغيرة، تظاهر كثرة الدبيقياتفي المناطق التي توجد فيها ودائع فسفرته ألفا synuclein في الحيوانات المريضة. لم أدمغة صحية، والسيطرة على الفئران المحقونة PBS-لا تظهر علامات كثرة الدبيقيات. (C) تلألؤ بيولوجي التصوير كشف إشعاع مرتفعة من العقول والنخاع الشوكي من تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) حقن الفئران داخل الصفاق مع الألياف-synuclein ألفا (اللوحة اليسرى)، التي كان سببها تفعيل الخلايا النجمية قبل فترة وجيزة وضعت الفئران أعراض عصبية. في العقول والنخاع الشوكي من السيطرة على الفئران المحقونة PBS-إشعاع القاعدية لا تزيد مع مرور الوقت (اللوحة اليمنى). بعد التلقيح intraglossal مع الألياف-synuclein ألفا، واحدة تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الماوس والحيوان 121، أظهرت علامات دباق النجمي رد الفعل قبل وقت قصير من توفي في 285 يوما (لوحة في الوسط). (D) بعد التحدي داخل الصفاق من تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران مع الألياف-synuclein ألفا، increa(> 2 × 10 6 ع / ق / سم 2 / ريال سعودي) تم قياس مستويات الحوار الاقتصادي الاستراتيجي من تلألؤ بيولوجي من أدمغة الفئران الأربعة (الأزرق والأخضر والبني والبرتقالي والدوائر) قبل بضعة أسابيع أنها وضعت علامات عصبية من المرض. أظهرت واحد من خمسة الحيوانات أيضا مستويات مرتفعة من تلألؤ بيولوجي قبل وقت قصير من توفي بعد 285 يوما حقن intraglossal مع الألياف-synuclein ألفا (الدوائر أرجواني). في المقابل، ل يصح، السيطرة على الفئران المحقونة PBS (الدوائر السوداء، تظهر أشرطة الخطأ SD [ن = 4])، وحيوان واحد التي لم تتطور المرض بعد الحقن داخل الصفاق مع الألياف-synuclein ألفا (الدوائر الحمراء)، ظلت إشارة تلألؤ بيولوجي دون عتبة من 2 × 10 6 ع / ق / سم 2 / ريال خلال فترة المراقبة. الحانات النطاق = 20 ميكرون. تعديل من Breid وآخرون. 2016 (14). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذاالشكل.

خط الماوس اللقاح (ميكروغرام) طريق التلقيح عدد الفئران مع المرض / لا. من الفئران الملقحة يعني بقاء الوقت ± SD (أيام)
TG (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الألياف-synuclein α الإنسان (50) داخل الصفاق 4/5 229 ± 17/420
TG (M83 +/-: GFAP -luc +/-) PBS داخل الصفاق 0/5 0/420
TG (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الألياف-synuclein α الإنسان (10) intraglossal 1/5 285/420
TG (M83 +/-: GFAP -luc +/-) PBS intraglossal 0/4 0/420

الجدول 1: تجارب التلقيح. * التعديل من Breid وآخرون، 2016 14

الهدف [استنساخ الضد] مضيف مستمنع التخفيف في IF التخفيف في الضفة الغربية
الأكتين [C4] الفأر - - 1: 1000
α-synuclein، الفوسفات S129 [pSyn # 64] الفأر pSer129 1: 1200 -
α-synuclein، الفوسفات S129 [EP1536Y] أرنب pSer129 1: 100 1: 1000
ييفي الدبقية البروتين الحمضية (GFAP) أرنب - 1: 200 -
IBA-1 أرنب - 1: 500 -
Sequestosome-1 (P62) أرنب - 1: 100 -
اليوبيكويتين [يو بي آي-1] الفأر - 1: 500 -

الجدول 2: الأجسام المضادة المستخدمة لالمناعي (IF) والغربية النشاف (WB). * التعديل من Breid وآخرون، 2016 14

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

حقن الطرفية من الألياف، synuclein ألفا في الصفاق من تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) يمثل الفئران طريقة سطحي للحث على مرض عصبي يرافقه neuroinflammation لتلخيص الخصائص المهمة للsynucleinopathies. وبالمثل، يمثل حقن اللسان طريقا آخر للneuroinvasion التي كتبها prionoids ألفا synuclein في الفئران المعدلة وراثيا ولكن أقل كفاءة. لقد اخترنا لإنهاء تجاربنا في 420 يوما بعد الحقن، ونحن لا يمكن استبعاد احتمال أن أكثر أو كل من الفئران ليفية حقن قد وضعت المرض في نقطة زمنية لاحقة. بالإضافة إلى ذلك، فإن استخدام تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران يمكن التصور غير الغازية من دباق النجمي ويمثل طريقة بسيطة لرصد الاستجابات الالتهابية الناجمة عن neuroinvasion ألفا synuclein على مدى العمر كله ل الفأر.

والخطوة الحاسمة هي إعدادمن اللقاح. العوامل تافهة على ما يبدو مثل وقت التجميع، الساعة صوتنة، وفرة من السموم الداخلية، أو كمية من الألياف المستخدمة للحقن يمكن أن تؤثر على نتائج التجربة التي تؤثر على الميل البذر من تتجمع ألفا synuclein 21. وبالتالي فمن المهم دائما استخدام نفس الشروط عند إعداد قائح للحقن. لحقن intraglossal أنه لا بد من اعتبار أن الأمر لا يقتصر على العصب تحت اللسان ولكن أيضا غيرها من الأعصاب القحفية مثل العصب اللساني البلعومي عصب اللسان، ويمكن أن تشارك في نقل interneuronal من prionoids ألفا synuclein إلى الدماغ. وبالتالي استهداف مناطق مختلفة من اللسان يمكن أن يؤدي في مختلف حركية تنتشر في الدماغ. لم نكن حقن مباشرة في العصب تحت اللسان وأنه من الممكن أن استهداف العصب تحت اللسان يمكن أن تحسن انتقال CNS من prionoids ألفا synuclein. لحقن داخل الصفاق مع الألياف-synuclein ألفا هو critiكال أن يتم حقن اللقاح بشكل صحيح في الصفاق وليس عن طريق الخطأ في الأعضاء الداخلية مثل الأمعاء أو الأعور، مما قد يؤثر سلبا neuroinvasion. وهذا هو أيضا مهم للتصوير تلألؤ بيولوجي عند حقن D-وسيفيرين. Mistargeting من D-وسيفيرين إلى الأعضاء الداخلية يمكن أن تبطئ توزيعها على الدماغ ويؤدي إلى انخفاض تلألؤ بيولوجي. للحصول على نتائج موحدة خلال التصوير من الأهمية بمكان دائما طازجة إعداد الحل-D وسيفيرين قبل الحقن والسماح لها احتضان بالضبط لمدة 10 دقيقة بعد الحقن داخل الصفاق قبل التصوير أيضا.

التصوير تلألؤ بيولوجي هو وسيلة مفيدة للتغيرات قياس غير جراحية في دباق النجمي مع مرور الوقت، ويمكن تطبيقها ليس فقط بعد داخل الصفاق أو الحقن intraglossal ولكن أيضا بعد كل نوع من العلاج بما في ذلك، على سبيل المثال، داخل المخ أو الحقن في الوريد. لمراقبة انتشار prionoids ألفا synuclein من المحيط إلى CNS وneuroinflammation التي تلت ذلك كنا bigenic تيراغرام (M83 +/-: GFAP -luc +/-) الفئران. لأن التعبير فرداني الزيجوت ألفا synuclein في هذه الحيوانات هو أقل 40٪ بالمقارنة مع الحيوانات متماثل أنها لا تزال خالية من مرض عفوية لمدة تصل إلى 22 شهرا من العمر ولها خلفية وراثية مناسبة للانتقال ألفا synuclein دراسات (13). ومع ذلك، يمكن إجراء تعديلات فيما يتعلق باختيار نموذج الفأر للتصوير تلألؤ بيولوجي يكون من المرغوب فيه. خيارا مهما هو استخدام أحادية المنشأ (-luc GFAP +/-) تيراغرام الفئران يعبر فقط وسيفيراز كما التحوير، والذي يسمح بتقييم السلوك prionoid من الألياف، synuclein ألفا على خلفية هذا هو أساسا من النوع البري بقدر ما وألفا synuclein المعنية 14. وعلاوة على ذلك، وعبور تيراغرام (GFAP -luc +/-) الفئران المعدلة وراثيا لفئران أخرى، مثل تيراغرام (SOD1 G93A) الفئران لمرض التصلب الجانبي الضموري أو تيراغرام (APP23) مالجليد لمرض الزهايمر، ويمكن التصوير من neuroinflammation في نماذج الأمراض الأخرى 22 و 23.

وجود قيود على هذا البروتوكول هو أنه استنادا إلى موقع الحقن اللقاح حقن لا يمكن أن يتجاوز حجم معين. وهكذا الحقن في اللسان لا يمكن إلا أن يؤديها مع أحجام أصغر من تلك التي في الغشاء البريتوني، والتي قد تؤثر على أوقات الإرسال إلى الجهاز العصبي المركزي. الحد الآخر هو أن التحوير -luc GFAP يسمح فقط الكشف عن دباق النجمي ولكن ليس من كثرة الدبيقيات، وهو نفس القدر من الأهمية في neuroinflammation. وأخيرا، وهذا النموذج لا يقدم رؤى لكيفية الوصول prionoids-synuclein ألفا الجهاز العصبي المركزي بعد الحقن داخل الصفاق.

وقد تبين أن تطبيق خارجي المنشأ prionoids ألفا synuclein عن طريق الحقن لتكون وسيلة مفيدة لدراسة مسارات نقل التي تلعب دورا حاسما في تلخص خصائص synucleinopathies. وقد استخدمت الحقن داخل المخ من الألياف، synuclein ألفا المؤتلف أو الماوس الأمراض المرتبطة أو الأنواع synuclein ألفا الإنسان في النماذج الحيوانية في العديد من الدراسات لتحليل خصائص بذر وكفاءة نقل على مر الزمن 5 و 7 و 17 و 24 و 25 و 26. منذ الحقن المجسم في الدماغ دائما لحث على الاستجابة الالتهابية المحلية بعد عملية جراحية قريبا، هذا الطريق نقل قد تؤثر على الانتشار والعدوى من اللقاح الناجم عن تغيير توازن الدماغ. تغيرت المزيد من الدراسات الأخيرة التركيز على التطبيقات المحيطية أو النظامية، وليس في المقام الأول لتجنب إجراء العمليات الجراحية بل لتحليل المحيط، جدار الأمعاء والعضلات والهيكل العظمي، أو الدم، كنقطة مبدئية من حيث neuroinvasion إلى الجهاز العصبي المركزي يمكن أن تتعاونmmence 6 و 9 و 14 و 27. لالبريونات وقد تبين أن انتقال العدوى عن طريق الغشاء البريتوني أو اللسان يؤدي إلى neuroinvasion والمرض العصبي. بعد الإصابة اللسان، البريونات نشر في أسبوعين فقط إلى النواة تحت اللسان في الدماغ تنبع 11. منذ تمت مناقشته ألفا synuclein أن يكون neuroinvasive والبذر خصائص مثل البريونات، أظهرنا أن انتقال العدوى عن طريق اللسان والغشاء البريتوني تمثل مزيد من نقاط الدخول لprionoids ألفا synuclein لغزو CNS 14. الكمي لدباق النجمي بواسطة التصوير تلألؤ بيولوجي يسهل تتبع العملية neuroinflammatory مع مرور الوقت، ويمثل بديلا غير الغازية للتحليل النسيجي.

للحصول على نظرة أعمق حول كيفية استجابة الجهاز العصبي المركزي إلى neuroinvasion من prionoids ألفا synucleinوالعلاجات الأخرى التي تسبب neuroinflammation، أنه سيكون من المفيد لتوليد نماذج الماوس التي تسمح أيضا مراقبة غير الغازية من كثرة الدبيقيات، على سبيل المثال مع التحوير الذي يدفع التعبير وسيفيراز من المروج محددة للتعبير البروتين في الخلايا الدبقية الصغيرة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgments

الكتاب أشكر أولغا شارما، تيريزا هوندت، وموظفي الفحص المجهري والحيوان مرافق DZNE حصول على الدعم الفني.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
anti-actin antibody Merck Millipore MAB1501
anti-alpha-synuclein, phospho S129 antibody [pSyn#64] Wako 015-25191
anti-alpha-synuclein, phospho S129 antibody [EP1536Y] Abcam ab51253
anti-GFAP antibody Dako Z0334 01
anti-IBA-1 antibody Wako 019-19741
anti-Sequestosome-1 (p62) antibody Proteintech 18420-1-AP
anti-ubiquitin antibody [Ubi-1] Merck Millipore MAB1510
Phosphate-buffered saline (PBS) Invitrogen 14190169
Ketamine  Ratiopharm 100 mg/kg
Xylazine Ratiopharm 10 mg/kg
27 G syringe VWR 613-4900
Isoflurane  Piramal Healthcare PZN  4831850
Depilatory cream Veet
Secureline lab marker  Neolab 25040
D-luciferin potassium salt Acris LK10000 30 mg/mL stock solution
Thermomixer Eppendorf 5776671
Sonopuls Mini20 sonicator Bandelin 3648
IVIS Lumina II imaging system PerkinElmer
Living Image 3.0 Software PerkinElmer
Tg(M83+/-) mice or B6;C3-Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle/J mice The Jackson Laboratory 004479
Standard pattern forceps Fine Science Tools 11000-16
Narrow pattern forceps Fine Science Tools 11002-12
N-laurylasarcosyl Sigma L5125-100G
Optima Max-XP ultracentrifuge  Beckman Coulter TLA-110 rotor 
Thickwall polycarbonate tubes Beckman Coulter 362305
NuPAG Novex 4-12% Bis-Tris Midi Protein Gels Thermo Fisher Scientific WG1401BOX
HRP conjugated antibody Cayman Cay10004301-1
IR Dye 680 conjugated antibody  LI-COR Biosciences 926-68070
SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate Thermo Fisher Scientific 34075
Stella 3200 imaging system Raytest
Odyssey infrared imaging system  LI-COR Biosciences
Tween 20  MP Biomedicals TWEEN201
Triton X-100 Sigma SA/T8787
Immobilon-FL PVDF membrane Merck Millipore IPFL00010
Xylol Sigma Roth
Hydrogen peroxide Sigma SA/00216763/000500 working solution 3%
Bovine serum albumine (BSA)  Thermo Fisher Scientific A3294-100G
Goat serum Thermo Fisher Scientific PCN5000
4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) Thermo Fisher Scientific D1306 working dilution 1:50,000
Fluoromount media  Omnilab SA/F4680/000025
LSM700 confocal laser scanning microscope Carl Zeiss
HALT protease and phosphatase inhibitors Thermo Fisher Scientific  10516495
Precellys 24-Dual homogenizer  Peqlab 91-PCS24D
Alexa Fluor 488 conjugated antibody Thermo Fisher Scientific A31619
Alexa Fluor 594 conjugated antibody Thermo Fisher Scientific A11005
Pierce BCA Protein Assay Kit Thermo Fisher Scientific 10741395
Microtome RM2255 Leica
LSM700 confocal laser scanning microscope Carl Zeiss

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Aguzzi, A. Cell biology: Beyond the prion principle. Nature. 459 (7249), 924-925 (2009).
  2. Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T. B. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. Nat Med. Olanow, C. W. 14 (5), 504-506 (2008).
  3. Li, J. Y., et al. Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation. Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).
  4. Hansen, C., et al. alpha-Synuclein propagates from mouse brain to grafted dopaminergic neurons and seeds aggregation in cultured human cells. J Clin Invest. 121 (2), 715-725 (2011).
  5. Masuda-Suzukake, M., et al. Prion-like spreading of pathological alpha-synuclein in brain. Brain. 136 (4), 1128-1138 (2013).
  6. Holmqvist, S., et al. Direct evidence of Parkinson pathology spread from the gastrointestinal tract to the brain in rats. Acta Neuropathol. 128 (6), 805-820 (2014).
  7. Luk, K. C., et al. Pathological alpha-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice. Science. 338 (6109), 949-953 (2012).
  8. Sacino, A. N., et al. Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 1, 38 (2013).
  9. Sacino, A. N., et al. Intramuscular injection of alpha-synuclein induces CNS alpha-synuclein pathology and a rapid-onset motor phenotype in transgenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10732-10737 (2014).
  10. Mougenot, A. L., et al. Prion-like acceleration of a synucleinopathy in a transgenic mouse model. Neurobiol Aging. 33 (9), 2225-2228 (2012).
  11. Bartz, J. C., Kincaid, A. E., Bessen, R. A. Rapid prion neuroinvasion following tongue infection. J Virol. 77 (1), 583-591 (2003).
  12. Tamgüney, G., et al. Measuring prions by bioluminescence imaging. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (35), 15002-15006 (2009).
  13. Watts, J. C., et al. Transmission of multiple system atrophy prions to transgenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (48), 19555-19560 (2013).
  14. Breid, S., et al. Neuroinvasion of alpha-Synuclein Prionoids after Intraperitoneal and Intraglossal Inoculation. J Virol. 90 (20), 9182-9193 (2016).
  15. Giasson, B. I., et al. Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein. Neuron. 34 (4), 521-533 (2002).
  16. Zhu, L., et al. Non-invasive imaging of GFAP expression after neuronal damage in mice. Neurosci Lett. 367 (2), 210-212 (2004).
  17. Bernis, M. E., et al. Prion-like propagation of human brain-derived alpha-synuclein in transgenic mice expressing human wild-type alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 3 (1), 75 (2015).
  18. Gunther, R., et al. Clinical testing and spinal cord removal in a mouse model for amyotrophic lateral sclerosis (ALS). J Vis Exp. (61), (2012).
  19. Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease. Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).
  20. Mathews, S. T., Plaisance, E. P., Kim, T. Imaging systems for westerns: chemiluminescence vs. infrared detection. Methods Mol Biol. 536, 499-513 (2009).
  21. Kim, C., et al. Exposure to bacterial endotoxin generates a distinct strain of alpha-synuclein fibril. Sci Rep. 6, 30891 (2016).
  22. Keller, A. F., Gravel, M., Kriz, J. Live imaging of amyotrophic lateral sclerosis pathogenesis: disease onset is characterized by marked induction of GFAP in Schwann cells. Glia. 57 (10), 1130-1142 (2009).
  23. Stöhr, J., et al. Distinct synthetic Abeta prion strains producing different amyloid deposits in bigenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. , (2014).
  24. Luk, K. C., et al. Intracerebral inoculation of pathological alpha-synuclein initiates a rapidly progressive neurodegenerative alpha-synucleinopathy in mice. J Exp Med. 209 (5), 975-986 (2012).
  25. Recasens, A., et al. Lewy body extracts from Parkinson disease brains trigger alpha-synuclein pathology and neurodegeneration in mice and monkeys. Ann Neurol. 75 (3), 351-362 (2014).
  26. Sacino, A. N., et al. Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 1 (1), 38 (2013).
  27. Peelaerts, W., et al. alpha-Synuclein strains cause distinct synucleinopathies after local and systemic administration. Nature. 522 (7556), 340-344 (2015).

Tags

علم الأعصاب، العدد 122، ألفا synuclein، والتصوير تلألؤ بيولوجي، والتهاب، synucleinopathy، neuroinvasion، ومرض باركنسون، الطرفية، بريون مثل، prionoid
التصوير تلألؤ بيولوجي من Neuroinflammation في الفئران المعدلة وراثيا بعد الطرفية تلقيح ألفا Synuclein الألياف
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Breid, S., Bernis, M. E., Tachu, J.… More

Breid, S., Bernis, M. E., Tachu, J. B., Garza, M. C., Wille, H., Tamgüney, G. Bioluminescence Imaging of Neuroinflammation in Transgenic Mice After Peripheral Inoculation of Alpha-Synuclein Fibrils. J. Vis. Exp. (122), e55503, doi:10.3791/55503 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter