Summary
本研究は、眼鏡拡大鏡を吸引チューブ システムを用いたマウスの尾静脈からの採血を報告します。私たちのメソッドは簡単に実践、マウスで繰り返し採血をされる可能性があります。
Abstract
血液検体の採取実験動物研究の基礎であります。それは様々 な研究目的のための十分な血液サンプルを取得する重要です。マウスの尾静脈が小さい、時々 従来穿刺法の方法で必要な血液量を得ることが困難。この調査を行った真空採血コレクション システムと眼鏡の拡大鏡 (実験群) 従来の採血方法 (従来のグループ) と比較しての使用を介してマウスの尾静脈から繰り返し血液サンプル コレクションの優位性、初心者から専門家、それぞれ実行します。眼鏡拡大鏡の助けを借りて、蝶の針先は実験群の各マウスの尾静脈に挿入されます。静脈が正常に侵入される血液サンプルが収集真空コレクションの管に蝶針のゴムの端の挿入による真空の血のコレクションの管に。プランジャーは、従来のグループで眼鏡拡大鏡の助けなし血を収集するために使用されます。初心者や専門家によって血液サンプル コレクションの成功率は実験群と従来のグループで 85% (p < 0.01) 対 35% 70% 対 100% (p < 0.01) をあることを示した。初心者および専門家の両方の必要な血液サンプルの取得に必要な穿刺時間だった (2.40 対 2.90 ± 0.31 ± 0.75、p < 0.05; 1.55 ± 0.76、p < 0.05 対 1.15 ± 0.37) 従来のグループと比較して実験群で有意に低かった。結論としては、提示血液サンプリングが可能で簡単に実践でき非麻酔下マウスから十分な血液量の頻繁にサンプリング。
Introduction
動物実験に関わるから採血は、基本的な研究手法です。いくつかの利用可能な技術があるマウスから採血、尻尾切り取り領域を含む、心臓、レトロな軌道神経叢、頚静脈、尾静脈、上大静脈の穴をあけます。理想的には、血は動物の健康に影響を最小限に、低侵襲の方法で収集する必要があります。しかし、最も一般的に使用される手法はしばしば動物にストレスを与えるし、研究成果1に影響を与えることができます。レトロな軌道神経叢からの採血は、マウス2から十分な血液量を取得する使用できます。しかし、それは厳しい組織の損傷につながる、3短い時間間隔で繰り返し血を求めることはできません。
尾静脈は、マウスに最小限の危害を加え血液のコレクションの優れた場所です。ただし、マウスの尾静脈が細いとそれは従来穿刺法に十分な血液を得ることが困難あります。場合によっては、繰り返し穿刺は必要な血液量を得る必要があります。マウスの尾静脈から採血しやすく勧め麻酔もよくします。 また、メス、ストレート エッジかみそりやはさみは、必要な血液サンプル4を取得する尾の端を削除する必要ことがあります。我々 は以前血液汚染のリスクを低減し、繰り返し穿刺5の必要性を避ける真空採血サンプル コレクション システムによって非麻酔ラットの尾静脈から採血成功を報告しています。本研究は、非麻酔下のマウスのような血の収集方法を報告します。
Protocol
1. 畜産
- 12 週齢の昆明のマウスを使用します。
注意: マウスを使用して (n = 40、20 男性、37-46 g 意味 42.38 ± 2.39 g) 実験動物センターの同済医科大学から。 - 食品や飲料水への無料アクセスと標準的な条件下でマウスを家します。保つ木のシェービング 530 cm2ケージで 2 つのマウスは寝具します。
- 21-23 °C 間の室内温度を維持します。
- 通常塩ダイエットでマウスをフィード (0.3 %nacl) 研究中。
2. 血液検体の採取
- 次の機器を準備: 真空管 (1 mL)、蝶針、眼鏡拡大鏡、およびプラスチック製の拘束ホルダー。滅菌表面 (図 1) の上に置きます。
- プラスチック拘束ホルダーにマウスを置き、ぬるま湯 (20-30 °C) で尻尾を洗います。尾静脈を拡張する 70% エタノール飽和コットン ボールを拭いてください。採血の右または左の尾静脈を選択します。尾の下の部分を軽く把握し、まっすぐ採血サンプル中尾を保ちます。
- 血を収集します。メソッドを比較すると、2 つのグループの血液を収集: 以下、開発したプロシージャを使用して「実験」のグループとも以下に示す従来のメソッドを使用して「従来型」のグループ。
- 実験的コレクション:
- 尾静脈の穿刺の表示を改善するために眼鏡拡大鏡を着用します。22 G 蝶針の先端に差し込みます、天使約 10°、複数のサンプルのため、尾の根元に向かって尻尾の位置先端から遠位の約半分の距離で外側尾静脈の一つ。
- 蝶針のゴムの端を (図 2) の血を収集するために、真空採血管に挿入します。
注:、血を採血中にこぼれる停止する場合針角度必要がありますすぐに調整。血液停止 15 後を流れる場合に別の穿刺位置を選択針で血液凝固を避けるためには、s。
- 従来のメソッド:
- 尾の先端から遠位の距離の外側静脈約 3 分の 1 のいずれかに注射器に接続針を挿入します。
- 血液は、ハブに表示されたら、血 (図 3)7を収集するためにゆっくりとピストンを引き戻します。
注: さらに血のコレクションでのさまざまな経験の効果の解明、初心者や専門家に選ばれた実験と従来の方法を同時に使用して血液を採取します。
- 実験的コレクション:
- 血のコレクションの後針を除去し、出血を止めるため穿刺ポイントを押します。プラスチック製の拘束ホルダーからマウス ボタンを離し、マウスをそのケージに戻ります。
注: それ報告されていますを総血の 10% にボリュームことができる安全に 2 週間間隔8時健康な動物から削除、ので約 175 μ L の血液が収集された倫理的な原則に準拠するたびに。 - プラズマを収集し、血清を収集するために抗凝固剤なしのチューブを使用する edta 管を使用します。慎重にチューブを数回反転、垂直方向に氷の上にそれらを置きます。
- 血漿、血清を分離する 10 分間 1,000 x g で冷却遠心分離機の血液サンプル コレクション チューブを遠心します。
注: 正常な血のコレクションは 175 μ L のボリュームの各時刻を取得として定義されます。3 つ以上の刺し傷の試行、失敗した採血は 3 穿刺後未満 175 μ L の総血液量として定義されます。サンプリング時間は、尾静脈穿刺から採血後、針の除去までの時間として定義されます。 - 82 週間の間隔で 2 回採血します。
3. 統計解析
- 分析のためには、市販の統計ソフトを使用します。統計的有意性のカットオフとしてp < 0.05 を使用して、平均値 ± 標準偏差としてデータを提示します。
Representative Results
体重、血液コレクション ボリューム、および 2 つのグループのサンプリング期間
各グループに 2 週間間隔で 2 回 (男性 10 例) 20 マウスから採血。マウスの平均体重それぞれ初心者のための実験および従来のグループや専門家間類似していた (42.40 g ± 42.65 g ± 1.14 g 対 1.42 g、p > 0.05; 42.55 g ± 2.91 g 43.20 g ± 2.69 g p > 0.05 対)。集められた血のボリュームとサンプリング期間 (171.75 μ ± 25.61 μ L、p > 0.05 対 184.25 μ ± 11.95 μ L; 1.85 分 ± 0.68 分 2.17 分 ± 0.80 分、p > 0.05 対) の専門家の 2 つのグループ間に類似していた。ただし、収集した血液量の増加、サンプリング期間を短縮 (148.50 μ ± 30.22 μ L、p < 0.01 対 172.00 μ ± 15.17 μ L; 3.11 分 ± 4.08 分 ± 0.61 分、p < 0.01 対 0.44 分) 初心者のための従来のグループと比較して実験的グループで見られました。 初心者と比較して、専門家の血液量の増加を収集し、実験および従来の方法 (172.00 μ ± 15.17 μ L、p < 0.01 対 184.25 μ ± 11.95 μ L; 148.50 μ ± 30.22 μ L、p < 0.05 対 171.75 μ ± 25.61 μ L; 1.85 分 ± 0.68 倍低いサンプリングを示した 3.11 分 ± 0.44 分、p < 0.01; 対分2.17 分 ± 4.08 分 ± 0.61 分、p < 0.05 対 0.80 分) (表 1)。
成功率と 2 つのグループの穿刺時
初心者と専門家間の成功率の比較対 100% (20/20) (p < 0.01) 実験群と 35% 70% (14/20) であった (7/20) 対従来のグループで 85% (17/20) (p < 0.01)。成功率はまた初心者のための従来のグループと比較して実験的グループで見られた [70% (14/20) 対 35% (7/20)、p < 0.05]。初心者と専門家の両方で穿刺の数だった (2.40 対 2.90 ± 0.31 ± 0.75、p < 0.05; 1.55 ± 0.76、p < 0.05 対 1.15 ± 0.37) 従来のグループと比較して実験群で有意に低かった。初心者と比較して、専門家のための下方の穿刺時間は実験と従来の方法を使用して観察されました。(1.15 対 2.40 ± 0.75 ± 0.37、p < 0.01; 1.55 ± 0.76 2.90 ± 0.31、p < 0.01 対)(表 1)。
図 1: 機器。例は、1 mL 真空採血管と 22 G 蝶針 (左)、眼鏡拡大鏡 (中央) と塑性拘束ホルダー (右)。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2: 実験群で成功した採血。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: 従来のグループに成功した採血。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
| 実験群 | 従来のグループ | |||
| 初心者のため | 専門家 | 初心者のため | 専門家 | |
| 体の質量 (g) | 42.4±1.42 | 42.55±2.91 | 42.65±1.14 | 43.20±2.69 |
| 収集した血液量 (μ L) | 172.00±15.17 | 184.25±11.95# | 148.50±30.22* | 171.75±25.61# |
| サンプリング時間 (分) | 3.11±0.44 | 1.85±0.68# | 4.08±0.61* | 2.17±0.80# |
| 血のコレクションの時間 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| パンクの平均数 | 2.40±0.75 | 1.15±0.37# | 2.90±0.31* | 1.55±0.76## * |
| 時間あける | 3 | 17 | 0 | 12 |
| 2 回を穿刺します。 | 6 | 3 | 2 | 5 |
| 3 回を穿刺します。 | 5 | 0 | 5 | 0 |
| 失敗しました | 6 | 0 | 13 | 3 |
| 成功率 | 70% | 100%# | 35%* | 85%# |
表 1: 実験と従来のグループ間の結果を比較します。* p < 0.05 * * p < 0.01、従来法と実験手法。#p < 0.05、0.01 < ##p、専門家対初心者。
Discussion
本研究では、従来の手法よりも優れているマウスで簡単に学ぶ血液コレクション法について説明します。まず、高い成功率を持つメソッドを容易に習得することができます。第二に、それは真空負圧の原理に基づくし、, 汚染と溶血9のチャンスを減らす効果もある直接血液曝露リスクの削減と血液の連続的に描画を可能します。第三に、このメソッドは、マウスからの適切なボリュームとは、血液の様々 な研究目的のための時間の短い期間での頻繁なサンプリング可能です。さらに、プロシージャはマウスにのみ最小限危害を加え、麻酔薬; を使用せず採血を実行できます。したがって、血液サンプルのストレス応答と麻酔薬の影響を回避できます。
尾静脈承認された議定書7によると採血の真向かいにあります。しかし、それは常に低血流と薄い尾静脈から十分な血液量を得ることは容易です。この場合、皮膚は通常オープン カット、ランセットに静脈を浸透させた、またはカミソリで尾の先端がすぐに削除されます。
このプロトコルは、真空採血管サンプル、蝶針と眼鏡拡大鏡が必要です真空の血のコレクション システムを使用してマウスから採血手法の改善を目指しています。このサンプリング ・真空採血システム通常毎日の臨床実習10で患者から血液サンプルを収集するために用いられます。眼鏡拡大鏡の助けを借りて、尾静脈の完璧な穿刺点は分かりやすいです。尾静脈に針の先端を挿入すると、血負圧により真空管流れ込む自動的に。尾静脈から針を撤回した後真空による収集の真空管にカテーテルでブロックされている血液が流れます。
次のヒントは、メソッドの成功のアプリケーションにとって重要です。まず、それぞれのマウスの体重は 40 g をする必要があります以上穴をあけると、十分な血液を得ることの難しさを減らす。第二に、失敗した採血の場合実験者は血を流れ続けるまでゆっくりと針を撤回してみてください。第三に、採血中に任意の動きを避けるために尾を拡張することが重要です。そっと針を保持は、マウスの尾の動きとして静脈に針の先端を維持する助けることができます。第四に、採血中を流れる血液が停止した場合、針の角度はタイムリーに調整必要があります。血液停止 15 後を流れる場合に別の穿刺位置を選択針で血液凝固を防ぐためには、するために s。最後に、マウスから血を収集するためにこの手法を使用している間は、2 つの演算子の協力の使用をお勧めします。
一言で言えば、マウスで使用するため採用された真空採血コレクション メソッドは、実行可能な安全で簡単に実践です。このメソッドは、非麻酔下マウスから十分な血液量と血の頻繁にサンプリングできます。
Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Acknowledgments
この作品が支持された [許可番号 2018CFB761] 中国湖北省の自然科学基金の助成により。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
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